1、動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體學(xué)習(xí)目標(biāo) 了解細(xì)胞融合的原理、過(guò)程和意義了解細(xì)胞融合的原理、過(guò)程和意義 理解單克隆抗體制備的過(guò)程和應(yīng)用理解單克隆抗體制備的過(guò)程和應(yīng)用重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)難點(diǎn)1.1.學(xué)習(xí)重點(diǎn)：學(xué)習(xí)重點(diǎn)： 單克隆抗體的制備和應(yīng)用單克隆抗體的制備和應(yīng)用2.2.學(xué)習(xí)難點(diǎn)：學(xué)習(xí)難點(diǎn)： 單克隆抗體的制備過(guò)程單克隆抗體的制備過(guò)程 溫故而知新溫故而知新植物細(xì)胞雜交植物細(xì)胞雜交（馬鈴薯番茄）（馬鈴薯番茄）融合融合的原的原生質(zhì)生質(zhì)體體ABAB再再生生出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合雜雜種種細(xì)細(xì)胞胞AB雜雜種種植植株株脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物組織培養(yǎng)植物組織培

2、養(yǎng)原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A植物細(xì)胞植物細(xì)胞B三、動(dòng)物細(xì)胞融合三、動(dòng)物細(xì)胞融合1.1.概念：概念： 動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或兩個(gè)或多個(gè)多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。細(xì)胞的過(guò)程。 融合后形成的融合后形成的單核細(xì)胞單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。，稱為雜交細(xì)胞。2 2、基本原理：、基本原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性 (植物原生質(zhì)體融合植物原生質(zhì)體融合)物理法：物理法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒 例如：仙臺(tái)病毒例如：仙臺(tái)病毒3、誘導(dǎo)方式、誘導(dǎo)方式

3、滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）. .過(guò)程：過(guò)程：細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性和和植物細(xì)胞植物細(xì)胞全能性全能性細(xì)胞膜細(xì)胞膜的流動(dòng)的流動(dòng)性性抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)本質(zhì)是什么？其化學(xué)本質(zhì)是什么？主要分布在哪里？主要分布在哪里？B B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特異性抗體。淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特

4、異性抗體。動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體種類可達(dá)百動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體種類可達(dá)百萬(wàn)種以上，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。萬(wàn)種以上，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。但但每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。、在體外，、在體外，一個(gè)淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的。一個(gè)淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的。從從血血清清中中分分離離抗抗體體該方法制備抗體的特點(diǎn)：該方法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差。產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動(dòng)動(dòng)物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 自主閱讀自主閱讀P

5、52：傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？：傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？、單克隆抗體、單克隆抗體McAb（概念）（概念） 由單個(gè)由單個(gè)B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖無(wú)性繁殖（克隆），形（克隆），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。稱為單克隆抗體。 那么，如何那么，如何大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體性強(qiáng)的抗體？（即？（即單克隆抗體單克隆抗體）二、單克隆抗體制備二、單克隆抗體制備一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種

6、特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、設(shè)計(jì)方案：、設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆單克隆抗體抗體既能產(chǎn)生特異性抗既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖體，又能大量繁殖單克隆抗體的制備思考思考討論討論1 、注射抗原的目的是什么、注射抗原的目的是什么?2 2、單克隆抗體制備時(shí)需選哪兩種細(xì)胞融合？、單克隆抗體制備時(shí)需選哪兩種細(xì)胞融合？ 誘導(dǎo)融合方法？誘導(dǎo)融合方法？3 3、考慮細(xì)胞兩兩融合會(huì)有幾種融合結(jié)果？、考慮細(xì)胞兩兩融合會(huì)有幾種融合結(jié)果？ 4 4、如何篩選出雜交瘤細(xì)胞？雜交瘤細(xì)胞有哪些特點(diǎn)？、如何篩選出雜交瘤細(xì)胞？

7、雜交瘤細(xì)胞有哪些特點(diǎn)？5 5、選出的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生、選出的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生所需的所需的特異性抗體嗎？特異性抗體嗎？6 6、如何、如何篩選出產(chǎn)生篩選出產(chǎn)生所需的所需的特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞？特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞？7 7、兩次篩選的目的各是？、兩次篩選的目的各是？8 8、如何培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞得到大量的單克隆抗體？、如何培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞得到大量的單克隆抗體？ 兩種方法的優(yōu)點(diǎn)？?jī)煞N方法的優(yōu)點(diǎn)？9、此過(guò)程運(yùn)用到哪些生物學(xué)技術(shù)？、此過(guò)程運(yùn)用到哪些生物學(xué)技術(shù)？動(dòng)物細(xì)胞融動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)合技術(shù)BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、B 、瘤瘤只有雜交瘤只有雜交瘤細(xì)胞才能活細(xì)胞才能活動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)3.3.

8、制備過(guò)程制備過(guò)程獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞：雜交瘤細(xì)胞：即能迅速大量增即能迅速大量增殖，殖，又能產(chǎn)生專又能產(chǎn)生專一的抗體一的抗體能產(chǎn)生所需特定抗體能產(chǎn)生所需特定抗體的雜交瘤細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，無(wú)需配置培養(yǎng)液無(wú)需配置培養(yǎng)液能在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)能在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的單克隆生大量的單克隆抗體抗體能產(chǎn)生特定所需抗能產(chǎn)生特定所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？ 4 4、單克

9、隆抗體的特點(diǎn)和應(yīng)用、單克隆抗體的特點(diǎn)和應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強(qiáng)，特異性強(qiáng)，靈敏度高，產(chǎn)量高靈敏度高，產(chǎn)量高。應(yīng)用：應(yīng)用：特點(diǎn)：特點(diǎn)：可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)可用于疾病治療可用于疾病治療可用于運(yùn)載藥物可用于運(yùn)載藥物“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是（抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是（ ） A.A.經(jīng)過(guò)

10、免疫的經(jīng)過(guò)免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.B.沒經(jīng)過(guò)免疫的沒經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞C.C.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.沒經(jīng)過(guò)免疫的淋巴細(xì)胞沒經(jīng)過(guò)免疫的淋巴細(xì)胞A2.動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和克服遠(yuǎn)緣雜交不親和 B. 制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新品種培育新品種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞生產(chǎn)雜種細(xì)胞3.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ）誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞都能形成雜種細(xì)胞 AD4. 單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是-（ ）A.由小鼠