1、 與常規(guī)藥物分析相比，體內(nèi)藥物分析有哪些特點(diǎn)？體內(nèi)藥物分析（Biopahrmaceutical Analysis），是一門(mén)新興學(xué)科，是藥物分析的重要分支，也是現(xiàn)代藥學(xué)的創(chuàng)新、延伸和發(fā)展。體內(nèi)藥物分析旨在通過(guò)各種分析手段，了解藥物在體內(nèi)的數(shù)量與質(zhì)量變化，獲得藥物動(dòng)力學(xué)的各種參數(shù)、藥物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化、代謝方式和途徑等信息。 特點(diǎn)：a干擾雜質(zhì)多：生物樣品中含有的蛋白質(zhì)、內(nèi)源性物質(zhì)和藥物的代謝產(chǎn)物都會(huì)干擾分析測(cè)定，樣品一般需經(jīng)過(guò)分離、凈化才能進(jìn)行分析。b樣品量少（ng/ml ug/ml），不易重新獲得。在測(cè)定前需要濃縮、富集。C由于藥物濃度低，對(duì)分析方法的靈敏度和專屬性要求高 。d要求較快提供結(jié)果（

2、臨床用藥監(jiān)護(hù)，中毒解救等）e要有可以進(jìn)行復(fù)雜樣品分析的設(shè)備。f工作量大，測(cè)定數(shù)據(jù)的處理和結(jié)果的闡明不太容易。g有時(shí)由于濃度太低，需要測(cè)定其綴合物及代謝產(chǎn)物。 影響血藥濃度的因素有哪些？當(dāng)藥物進(jìn)入體內(nèi)后，大多數(shù)藥物借助血液分布到作用部位或受體部位，當(dāng)血藥濃度達(dá)到一定水平時(shí)，才能產(chǎn)生相應(yīng)的藥理效應(yīng)。 藥物進(jìn)入體內(nèi)到產(chǎn)生一定的血藥濃度，要經(jīng)過(guò)一系列的過(guò)程，包括吸收、分布、代謝、排泄，而這一系列過(guò)程會(huì)受到多種因素的影響，從而影響藥物在體內(nèi)的藥理效應(yīng)。1) 機(jī)體因素a生理因素（年齡、性別、婦女妊娠等）年齡： 嬰幼兒 肝、腎等臟器發(fā)育不全，影響吸收、分布、代謝、排泄，藥動(dòng)參數(shù)與成人不同。老年人機(jī)體各組織生

3、理功能退化，胃酸分泌減少，血中白蛋白濃度下降，肝腎血流量減少，藥酶活性下降。 性別：婦女因激素水平影響生理功能，在藥物吸收、蛋白結(jié)合率，分布容積及代謝方面與男性有所不同。2) 病理因素胃、腸道疾病影響吸收，肝臟疾病影響代謝，腎臟疾病影響排泄3) 遺傳因素（代謝酶活性差異）酶活性有先天差異，用藥個(gè)體代謝有快型和慢型之分,如乙?；D(zhuǎn)移酶4) 藥物因素a劑型因素藥物的粒子大小、晶型、輔料、工藝等影響藥物在體內(nèi)的溶解度。（例地高辛、苯妥英鈉）b手性藥物對(duì)映體相互作用藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)相互作用（拮抗或協(xié)同作用），在藥動(dòng)學(xué)方面的相互作用表現(xiàn)在吸收、分布、代謝、排泄過(guò)程中的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用和受體對(duì)兩對(duì)映體的選擇性

4、作用。5) 環(huán)境因素a化學(xué)物質(zhì)和合并用藥藥酶誘導(dǎo)劑、藥酶抑制劑、大氣污染，煙，酒，茶，食品添加劑等b人體晝夜節(jié)律、營(yíng)養(yǎng)和精神狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)不良對(duì)藥物作用敏感精神憂郁對(duì)藥物反應(yīng)較重綜上所述，影響血藥濃度的因素很多，同一種給藥方案難以對(duì)每一個(gè)病人都達(dá)到理想的治療效果。因此，為做到用藥安全、合理、有效，必須設(shè)計(jì)個(gè)體化給藥方案，這需要進(jìn)行“治療藥物監(jiān)測(cè)（therapeutic drug monitoring，TDM）”，以血藥濃度為指標(biāo)，達(dá)到個(gè)體化用藥。 試述體內(nèi)藥物分析在藥學(xué)領(lǐng)域中的作用和地位a.在新藥評(píng)價(jià)和新藥開(kāi)發(fā)中的意義 藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度研究隨著醫(yī)藥工業(yè)的發(fā)展，人們已認(rèn)識(shí)到要達(dá)到臨床安全、有效、

5、合理用藥，不僅要從管理、生產(chǎn)、應(yīng)用等各環(huán)節(jié)對(duì)藥品進(jìn)行全面質(zhì)量管理，而且還需進(jìn)行臨床藥理學(xué)和臨床藥學(xué)的研究，給新藥一個(gè)確切的評(píng)價(jià)。 代謝物研究為設(shè)計(jì)和發(fā)現(xiàn)新藥提供信息部分藥物生物轉(zhuǎn)化后的代謝產(chǎn)物較原型藥物活性更高，故可利用藥物代謝的知識(shí)來(lái)設(shè)計(jì)新藥或?qū)υ退幬镞M(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，從而產(chǎn)生新的作用特點(diǎn)的藥物。對(duì)藥物及其制劑的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究，也是設(shè)計(jì)新劑型的基礎(chǔ)要開(kāi)展以上研究工作，首先要解決的問(wèn)題是體內(nèi)微量藥物及其代謝物的分離分析方法。b.在臨床合理用藥中的意義 藥物進(jìn)入體內(nèi)后，大多數(shù)藥物借助血液分不到作用部位或受體部位，當(dāng)血藥濃度達(dá)到一定水平時(shí)，才能產(chǎn)生相應(yīng)的藥理效應(yīng)。 臨床上的合理用藥、個(gè)性化給藥都

6、與血藥濃度的檢測(cè)密切相關(guān)。 常用生物樣本有哪些？如何采集、儲(chǔ)存。1) 血液采集：待藥物在血液中分布均勻后取樣，從靜脈采血。制備：血漿(plasma)：全血 + 抗凝劑（肝素等）離心上清液（淡黃色）血清(serum)：全血靜置一段時(shí)間離心上清液（淡黃色）全血(whole blood)：全血 + 抗凝劑（肝素等）混合儲(chǔ)存：采血后即使分離，不超過(guò)2h，分離后置于冰箱或冷凍柜中保存；若不予先分離，血凝后冰凍保存；短期4，長(zhǎng)期-20。2) 尿液：尿中藥物以原型、代謝物或綴合物形式存在。采集：自然排尿，常用涂蠟的一次性紙杯或玻璃杯制備：尿液加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎┯趦?chǔ)尿瓶?jī)?chǔ)存：主要成分是水、尿素、鹽類，易長(zhǎng)細(xì)菌，

7、短期可置4冷藏或加防腐劑，若保存時(shí)間長(zhǎng)則需冷凍（-20）保存。3) 唾液采集：漱口15min后，用插入漏斗的試管收集口內(nèi)自然流出或經(jīng)舌在口內(nèi)攪動(dòng)后流出的混合唾液采集時(shí)間至少10min制備：唾液除去泡沫部分放置分層離心上清液。儲(chǔ)存：4以下保存冷凍的樣品測(cè)定時(shí)需解凍，最好一次性測(cè)定完畢，不要反復(fù)冷凍-解凍-冷凍-解凍，以免藥物含量下降。 生物樣品測(cè)定前為什么要除去蛋白質(zhì)？除去蛋白質(zhì)的常用方法有哪些？去蛋白質(zhì)的意義：使結(jié)合型藥物釋放出來(lái)，以便測(cè)定藥物的總濃度；得到較“干凈”的提取液，減少乳化，消除對(duì)測(cè)定的干擾；保護(hù)儀器，延長(zhǎng)使用期限。常用的方法：1) 蛋白質(zhì)沉淀法a生成不溶性鹽加入酸類（TCA、HC

8、lO4等）加入重金屬鹽（Zn2+ 、Cu2+ 、Ag+ ）b鹽析和脫水加入中性鹽（(NH4)2SO4、NaCl ）加入與水混溶的有機(jī)溶劑（甲醇、乙腈、丙酮）c組織酶消化法（蛋白水解酶）酶消化法是在一定的pH范圍、一定的溫度和一定的反應(yīng)時(shí)間下完成的。其特點(diǎn)是：水解條件溫和，水解效率高，無(wú)乳化生成。有時(shí)可合用一些蛋白酶增活劑，以減少酶用量和縮短消化時(shí)間。d超濾法 e加熱法：熱變性蛋白質(zhì) 影響液-液提取和液-固提取效率的因素分別有哪些？液-液提取1) 水相pH堿性藥物：PH高于藥物的pKa 23單位；酸性物質(zhì)：pKa 23單位2) 提取溶劑提取溶劑的選擇既要考慮提取的選擇性，同時(shí)也要考慮操作是否方便

9、，在滿足提取效率的同時(shí)選取極性盡可能小的溶劑，使既有合適的回收率，又可將干擾物質(zhì)降到最低。一般可根據(jù)相似相溶原則進(jìn)行選擇，選擇沸點(diǎn)低的溶劑。當(dāng)樣品中藥物性質(zhì)未知時(shí)，可用乙醚、氯仿分別作為酸性和堿性藥物的提取溶劑。 3) 離子強(qiáng)度 在水相中加中性鹽，如NaCl，可增加離子強(qiáng)度，使溶液中水分子與無(wú)機(jī)離子強(qiáng)烈締合，導(dǎo)致與藥物締合的水分子減少，使藥物在水相中溶解度變小，有利于有機(jī)溶劑提取。4) 有機(jī)相和水相體積 1:1或2:1液-固提取分離度和回收率是反映提取效率的重要指標(biāo)，影響提取率的主要因素是：1) 洗脫液流速流速太快，分離度下降，樣品流失，回收率低，重現(xiàn)性差。2) 樣品裝載量有效裝載量取決于被測(cè)

10、物的容量因子、固定相量和樣品濃度。過(guò)載，導(dǎo)致樣品流失。3) 樣品的前處理血樣血清、血漿可直接上樣進(jìn)行固相萃取，但若藥物與蛋白結(jié)合，則會(huì)降低萃取回收率 如何根據(jù)所取樣本、待測(cè)物的理化性質(zhì)設(shè)計(jì)前處理方法？舉例說(shuō)明。藥物的理化性質(zhì)和存在形式。首先是藥物的酸堿性質(zhì)(pK。)、未電離分子的親脂性、揮發(fā)性等物理參數(shù)。這些涉及藥物的提取性質(zhì)、是否會(huì)有揮發(fā)損失以及能否采用氣相色譜法分析測(cè)定。藥物的光譜特性及官能團(tuán)性質(zhì)涉及分析儀器的選擇以及是否需要進(jìn)行化學(xué)衍生化和是否需要應(yīng)用特殊檢測(cè)器。藥物的化學(xué)穩(wěn)定性也涉及樣品處理?xiàng)l件的選擇。同時(shí)應(yīng)注意藥物在體內(nèi)的存在形式及血漿蛋白結(jié)合率數(shù)值，以便采取適宜的預(yù)處理方法。選用的

11、生物樣品類型樣品預(yù)處理應(yīng)根據(jù)所選用的待測(cè)生物樣品的類型不同而變化。如血漿、血清常需去除蛋白質(zhì)然后提取，而唾液樣品則主要采用離心沉淀除去粘蛋白，取上清液測(cè)定藥物濃度。要測(cè)定尿液中的綴合物常需采用酸水解法或酶水解法使綴合物水解。示例2慶大霉素血藥濃度測(cè)定慶大霉素(gentamicin)血藥濃度范圍為412mgml，在體內(nèi)不被代謝，以原型存在，蛋白結(jié)合率為30。慶大霉素與蛋白質(zhì)結(jié)合率低，在沉淀蛋白時(shí)較易釋放。蛋白沉淀劑有乙腈、甲醇、高氯酸等。慶大霉素分子中的苷鍵在強(qiáng)酸條件下易水解，故不宜選高氯酸等強(qiáng)酸除蛋白。慶大霉素水溶液在pH212范圍內(nèi)穩(wěn)定，用乙腈或甲醇去蛋白時(shí)，上清液pH為8595，因此可選這

12、兩種溶劑作為蛋白沉淀劑，特別是乙腈具有弱堿性，藥物一蛋白結(jié)合物在堿性下更易于釋放，而且蛋白質(zhì)經(jīng)乙腈沉淀后形成團(tuán)塊狀，易黏附于容器壁上，使上清液澄清便于用吸樣器吸取、轉(zhuǎn)移。慶大霉素結(jié)構(gòu)中含多個(gè)羥基，使其具有較強(qiáng)的極性和水溶性，導(dǎo)致無(wú)法直接采用經(jīng)典的液一液萃取法。從慶大霉素結(jié)構(gòu)看，分子中含有多個(gè)游離氨基(伯胺)，可以用1-氟-2，4-二硝基苯FDNB等紫外衍生試劑，也可以用鄰苯二醛0PA等熒光衍生試劑，使慶大霉素變?yōu)榫哂凶贤馕栈驘晒獾难苌铩Ｒ驘晒鈾z測(cè)靈敏度比紫外檢測(cè)要高13個(gè)數(shù)量級(jí)，故選擇熒光衍生化試劑OPA。考慮到柱后衍生需要附加裝置，所以采用人工的柱前衍生化法，生成的衍生物可用溶劑萃取，萃

13、取液直接進(jìn)樣或蒸干后加流動(dòng)相或適當(dāng)溶劑溶解后進(jìn)樣分析。萃取溶劑以乙酸乙酯較好。慶大霉素的強(qiáng)極性和解離性，使其更適合固相萃取分離，可采用硅膠和陽(yáng)離子交換劑作為固相填料。當(dāng)在萃取柱上直接衍生化后，生成的衍生物可用乙醇洗脫。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的條件，血漿樣品預(yù)處理方法為：乙腈沉淀血漿蛋白后，用OPA柱前衍生化，再以乙酸乙酯萃取熒光衍生物。然后采用RP-HPLC分離，熒光檢測(cè)血漿中慶大霉素濃度。 基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生的原因、影響、確認(rèn)方法以及消除。 與標(biāo)準(zhǔn)樣品和QC樣品相比，生物樣品在進(jìn)行LC-ESI-MS時(shí)，會(huì)產(chǎn)生明顯的基質(zhì)效應(yīng)。 原因：生物樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)、代謝產(chǎn)物或一同服用的其它藥物，因在色譜分析中與目標(biāo)化合

14、物分離不完全或未被檢測(cè)到而進(jìn)入質(zhì)譜后產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)。影響：顯著降低或增加目標(biāo)離子的生成效率及離子強(qiáng)度，進(jìn)而影響測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度。確認(rèn)方法：(1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定法：本法需配制3組不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每組包括5條標(biāo)準(zhǔn)曲線，每條標(biāo)準(zhǔn)曲線包括從低到高的7個(gè)濃度點(diǎn)，共需測(cè)定357=105個(gè)樣品。通過(guò)比較3組標(biāo)準(zhǔn)曲線待測(cè)組分的絕對(duì)響應(yīng)值、待測(cè)組分與內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)值比值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，可以確定基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量的影響。(2) 柱后灌注法：將空白生物樣品的提取液和空白溶劑分別進(jìn)樣進(jìn)行液質(zhì)分析，同時(shí)利用注射泵將含相同濃度待測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液通過(guò)色譜柱與質(zhì)譜接口之間的三通注人到色譜柱流出液中。如果同空白溶劑的萃取離子圖譜

15、相比，空白提取液的萃取離子圖譜的響應(yīng)信號(hào)明顯減弱或增強(qiáng)，則表明存在基質(zhì)效應(yīng)的影響?；|(zhì)效應(yīng)的消除： 選擇合適的樣品制備方法最有效：實(shí)驗(yàn)時(shí)可同時(shí)次啊用幾種不同的樣品制備方法，從中選擇基質(zhì)效應(yīng)最小的樣品制備方法。 改善色譜分析條件：適當(dāng)?shù)卦黾颖Ａ魰r(shí)間(3rain)、改善多組分間的色譜分離、減少進(jìn)樣體積。 優(yōu)化質(zhì)譜分析條件：改變離子化方式，如APCI。 內(nèi)標(biāo)的選擇：穩(wěn)定同位素標(biāo)記物 分析方法的確證包括哪些內(nèi)容。 特異性：在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一地測(cè)定分析物的能力。內(nèi)源性物質(zhì)、代謝產(chǎn)物、配伍藥物的干擾等 標(biāo)準(zhǔn)曲線、定量范圍、定量下限（LLOQ）：標(biāo)準(zhǔn)曲線反映了所測(cè)物質(zhì)濃度與

16、儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回歸分析方法所得的回歸方程來(lái)評(píng)價(jià)。其到底濃度范圍為定量范圍。標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，表示測(cè)定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度 準(zhǔn)確度：在分析條件下，測(cè)得值與真實(shí)值的接近程度。準(zhǔn)確度的測(cè)定通常使用模擬生物樣品，以測(cè)得的濃度與添加的理論濃度比較計(jì)算求得。準(zhǔn)確度用回收率表示。 精密度：表示一組測(cè)量值彼此符合的程度。常用標(biāo)準(zhǔn)差（SD）、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）或變異系數(shù)（CV）表示。批內(nèi)精密度、批間精密度 穩(wěn)定性：包括方法穩(wěn)定性和生物樣品穩(wěn)定性兩個(gè)方面。要求：取高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品考察；在不同的存放條件下，存放時(shí)間要求不同；需要考慮生物樣品從收集到分析的所有步

17、驟的穩(wěn)定性。長(zhǎng)期貯存穩(wěn)定性考察、短期室溫穩(wěn)定性 萃取回收率：從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值的百分比即為分析物的萃取回收率。應(yīng)考察高、中、低三個(gè)濃度的萃取回收率。萃取回收率應(yīng)大于70%且穩(wěn)定。萃取回收率不同于提取回收率。 基質(zhì)效應(yīng) 方法學(xué)質(zhì)控10.闡述定量限與檢測(cè)限的定義及區(qū)別、表示方法。檢測(cè)限LOD系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。是限度試驗(yàn)參數(shù)，無(wú)需定量測(cè)定。常用%、ppm、ppb表示。常用的方法：非儀器分析目視法、信噪比法一般以信噪比（S/N）31或21時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。定量限LOQ 指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確

18、度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10定量限在數(shù)值上總應(yīng)高于檢出限。與檢測(cè)限不同，定量限不僅受到測(cè)定噪聲限制，而且還受到空白背景絕對(duì)水平的限制，只有當(dāng)分析信號(hào)比噪聲和空白背景大到一定程度時(shí)才能可靠地分辨與檢測(cè)出來(lái)。11.比較比色法、紫外法、熒光法的異同點(diǎn) 。比色法：以可見(jiàn)光作光源，比較溶液顏色深淺度以測(cè)定所含有色物質(zhì)濃度的方法。紫外法：可見(jiàn)光、紫外線照射某些物質(zhì)，主要是由于物質(zhì)分子中價(jià)電子能級(jí)躍遷對(duì)輻射的吸收，而產(chǎn)生化合物的可見(jiàn)紫外吸收光譜。熒光法同點(diǎn)： 都以朗伯-比爾定律(Abc)為基礎(chǔ)。 都屬于光譜分析法異點(diǎn)：比色法和紫外法 光源：比

19、色法使用的是混色光源，紫外法使用的是單色光源。 比色法使用的是色階和人的眼睛，相對(duì)誤差較大，紫外法和熒光法使用的是儀器和光電檢測(cè)器，相對(duì)誤差較小 比色法主要是定性的，而紫外法和熒光法是定量、定性 本質(zhì)：紫外法為吸收光譜；熒光法為發(fā)射光譜。 靈敏度：熒光法10-10-10-1；紫外法10-4-10-72；比色法較低低 選擇性：紫外和比色法一般；熒光高 應(yīng)用：熒光法的應(yīng)用沒(méi)有紫外廣。12.紫外法消除干擾的方法有哪些？說(shuō)明原理和應(yīng)用條件。 差示分光光度法原理：利用被測(cè)物在兩種不同溶液中吸收光譜發(fā)生了特征性變化，而共存干擾物在該兩種溶液中未引起光譜變化，測(cè)定兩種溶液的吸收度差值（A值），根據(jù)A與被測(cè)物

20、濃度C的線性關(guān)系進(jìn)行定量測(cè)定。應(yīng)用條件：必須使被測(cè)物在兩種溶液中以不同的化學(xué)形式存在，且兩種化學(xué)形式的吸收光譜應(yīng)有顯著差異。根據(jù)被測(cè)物理化性質(zhì)，可選擇不同的處理方法，除酸、堿外，還可用緩沖液、氧化劑等。但應(yīng)使被測(cè)物在一種溶液中以一種形式存在，光譜純度不低于99%。 雙波長(zhǎng)法：主要用于二元混合物或渾濁樣品的測(cè)定。原理：在l測(cè)處：A測(cè)= A樣A雜在l參處：A參=A樣A雜A = A測(cè)A參 =（A樣A雜）（A樣A雜） 因?yàn)椋篈雜= A雜 所以： A= A樣 A樣，與干擾物無(wú)關(guān)。應(yīng)用條件：l測(cè)被測(cè)物吸收峰附近 l參干擾物在l測(cè)處的等吸收點(diǎn)，即干擾物在此兩波長(zhǎng)處A值相等 導(dǎo)數(shù)光譜法原理：如果干擾吸收隨波長(zhǎng)

21、呈線性時(shí)，可用直線方程表示 A混=E測(cè)C測(cè)Lab，對(duì)上述公式求導(dǎo)：dA混/d=dE測(cè)/dC測(cè)Lb，干擾物質(zhì)的吸收由隨波長(zhǎng)呈線性變成了常數(shù)。對(duì)于非線性干擾，可近似地用二次曲線表示A=ECL+t+u+w2，對(duì)上式求二階導(dǎo)數(shù)，可使雜質(zhì)干擾的二階曲線t+u+w2變成常數(shù)w，從而消除干擾。應(yīng)用條件：根據(jù)干擾物質(zhì)的吸收光譜圖形，選擇導(dǎo)數(shù)階數(shù)，不同階導(dǎo)數(shù)曲線如下13.如何進(jìn)行激發(fā)光譜和熒光光譜的測(cè)定？激發(fā)光譜：將熒光單色器的波長(zhǎng)鬧定在比激發(fā)單色器波長(zhǎng)長(zhǎng)的某一任意波長(zhǎng)上，以激發(fā)單色器波長(zhǎng)掃描，測(cè)得不同波長(zhǎng)的相應(yīng)熒光強(qiáng)度，繪制曲線。發(fā)射光譜：將激發(fā)單色器的波長(zhǎng)固定在物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)處，將熒光單色器波長(zhǎng)大于激發(fā)

22、波長(zhǎng)的不同范圍內(nèi)掃描，測(cè)得不同波長(zhǎng)下的相應(yīng)熒光強(qiáng)度，繪制曲線。14.GC常用檢測(cè)器有哪些？各有何特點(diǎn)？以氣體為流動(dòng)相的色譜法稱為氣相色譜法。檢測(cè)器 氫焰離子化檢測(cè)器FID為質(zhì)量型檢測(cè)器，峰面積（A）取決于單位時(shí)間進(jìn)入檢測(cè)器中組分的質(zhì)量，峰高（H）與載氣流速成正比，當(dāng)用H定量時(shí)，需保持載氣流速恒定。特點(diǎn)適于有機(jī)物檢測(cè)，應(yīng)用范圍廣，線性寬，響應(yīng)快。 氮-磷檢測(cè)器NPD特點(diǎn)：為含N、P藥物的專屬檢測(cè)器，選擇性高，與FID相比，靈敏度分別高50、500倍，線性寬。 電子捕獲檢測(cè)器ECD是電負(fù)性有機(jī)化合物的專屬檢測(cè)器特點(diǎn)：具有較高的選擇性和靈敏度，可用于測(cè)定某些含藥物濃度較低的生物樣品。15.如何選擇進(jìn)

23、樣室、色譜柱、檢測(cè)室溫度？色譜條件選擇柱溫：關(guān)鍵因素。使最難分離的組分有盡可能好的分離的前提下，盡可能采取較低柱溫，以tR值適中，不拖尾為原則。程序升溫：對(duì)于含理化性質(zhì)差異較大的多組分樣品，可采用程序升溫方式測(cè)定，但此法不適合于臨床治療藥濃監(jiān)測(cè)，因儀器平衡時(shí)間長(zhǎng)，不能滿足臨床要求。進(jìn)樣室溫度一般進(jìn)樣室溫度樣品沸點(diǎn)（不超過(guò)沸點(diǎn)50），通常較柱溫高1050。檢測(cè)室溫度要求比柱溫大30或等于進(jìn)樣室溫度，并不能低于100，以免色譜柱流出物在檢測(cè)器中冷凝而污染檢測(cè)器。16.GC 中常用定量方法有哪些？如何選擇內(nèi)標(biāo)？有外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法和標(biāo)準(zhǔn)加入法內(nèi)標(biāo)法在GC測(cè)定中，前處理步驟多，難控制各步操作一致。同時(shí)進(jìn)樣

24、量小，溶解殘?jiān)娜軇]發(fā)性又大，每次進(jìn)樣量不可能一致。樣品提取過(guò)程中轉(zhuǎn)移出的溶劑體積也不可能相等。鑒于上述原因，GC法通常采用內(nèi)標(biāo)法定量。對(duì)內(nèi)標(biāo)的要求： 內(nèi)標(biāo)物必須是樣品中不含有的組分 保留時(shí)間應(yīng)與待測(cè)物tR值相近，R1.5 有足夠的純度內(nèi)標(biāo)選擇原則： 內(nèi)標(biāo)與被測(cè)物相差一個(gè)化學(xué)元素 內(nèi)標(biāo)與被測(cè)物為同系物 內(nèi)標(biāo)與被測(cè)物結(jié)構(gòu)相似 內(nèi)標(biāo)與被測(cè)物理化性質(zhì)相似17.什么是鍵合相色譜，在HPLC 中常用鍵合相色譜有哪幾類？固定液通過(guò)化學(xué)反應(yīng)的方法鍵合在載體表面上的固定相稱為化學(xué)鍵合相。以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法稱為鍵合相色譜。 正相HPLC：流動(dòng)相極性固定相,本法主要用于非極性至中等極性的各類分子型化合

25、物。 離子對(duì)色譜:主要用來(lái)分離強(qiáng)極性有機(jī)酸和有機(jī)堿 離子抑制色譜:本法適用于pKa 3的弱酸和pKa 8的弱堿。 離子交換色譜：適用于無(wú)機(jī)物和有機(jī)物的分離。18.什么叫正相色譜？什么叫反相色譜？如何調(diào)整流動(dòng)相極性、pH，使被測(cè)物的容量因子在合適范圍，分離度、對(duì)稱性滿意。正相色譜（normal phase，NP）：流動(dòng)相極性小于固定相極性的分配色譜稱為正相色譜。反相色譜（reversed phase ，RP）：流動(dòng)相極性大于固定相極性的分配色譜稱為反相色譜。流動(dòng)相極性增加，洗脫能力降低，溶質(zhì)的容量因子k值增大，保留時(shí)間增大；結(jié)構(gòu)類似組分，極性大的先出峰，調(diào)整流動(dòng)相極性，可控制k值在所要求的范圍內(nèi)

26、。改變流動(dòng)相組成、比例、pH值，比較： 柱效 n = 5.54（tR/W1/2 ）2 分離度 R = 2（tR2 tR1）/（W1+W2）對(duì)稱因子 T = W0.05h /2d1 合適的tR 19.HPLC常用檢測(cè)器有哪些？使用范圍？ 紫外檢測(cè)器最常用，用于具有-共軛及n-共軛結(jié)構(gòu)的化合物。固定波長(zhǎng)檢測(cè)器（254nm），可變波長(zhǎng)檢測(cè)器在190-700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)可任選，選擇合適波長(zhǎng)可提高檢測(cè)靈敏度和選擇性。 光電二極管陣列檢測(cè)器DAD 熒光檢測(cè)器FD：用于能產(chǎn)生熒光或其衍生物能發(fā)熒光的物質(zhì) 電化學(xué)檢測(cè)器：包括安培檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器和極譜檢測(cè)器等，適用于具有氧化還原性質(zhì)的化合物的檢測(cè) 蒸發(fā)光散

27、射檢測(cè)器ELSD：主要用于糖類、高分子化合物、高級(jí)脂肪酸、氨基酸等無(wú)紫外吸收的化合物。20.什么是離子抑制色譜？什么是離子對(duì)色譜？?jī)烧叩膮^(qū)別？離子抑制色譜法ISC是在反相色譜法的基礎(chǔ)上，通過(guò)在流動(dòng)相中加入少量弱酸(常用醋酸)，弱堿(常用氨水)或緩沖鹽(常為磷酸鹽及醋酸鹽)作為抑制劑，以調(diào)節(jié)溶液的pH，抑制待測(cè)組分的解離，增加組分在固定相中的溶解度，以達(dá)到分離有機(jī)弱酸、有機(jī)弱堿的目的。離子對(duì)色譜IPC原理：將平衡離子（反離子）加入到流動(dòng)相中，在一定pH 條件下，與呈解離狀態(tài)的藥物作用，生成脂溶性的中性離子對(duì)結(jié)合物，從而增加了被測(cè)物在固定相上的保留，改善分離效果。區(qū)別 離子抑制色譜是在流動(dòng)相中加弱

28、酸或弱堿，抑制被測(cè)物電離。而離子對(duì)色譜是在流動(dòng)相中加入反離子，與待測(cè)離子形成離子對(duì)，以提高脂溶性。 分析對(duì)象（適用范圍）不同： 離子抑制色譜適用于弱酸、弱堿 離子對(duì)色譜適用于不同強(qiáng)度的酸、堿、兩性物、酸堿混合物。21.掌握色譜法定量計(jì)算。定量方法有外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法和標(biāo)準(zhǔn)加入法等。內(nèi)加法（第二標(biāo)準(zhǔn)加入法）將內(nèi)標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)加入法相結(jié)合，可以克服標(biāo)準(zhǔn)加入法樣品耗量多，不適宜大量樣品測(cè)定和操作繁、難平行一致的缺點(diǎn)。將被測(cè) 物分成兩等分：甲 等量?jī)?nèi)標(biāo)（r） 等量溶劑 乙 藥物標(biāo)準(zhǔn)（i） 同法處理、測(cè)定，得各自圖譜，計(jì)算。 求藥物與內(nèi)標(biāo)峰的比值：R甲= Ad/Ar， R乙= Adi/Ar，求比值差R：R= R乙R甲= Adi/Ar-Ad/Ar計(jì)算被測(cè)物濃度（md）：md=（Ad/Ar）/（Adi/Ar- Ad/Ar ）mi = mi（R甲/R）mi為加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度；r內(nèi)標(biāo)；d藥物；i藥物標(biāo)準(zhǔn)22.GC/MS中常用離子源？各有何特點(diǎn)？接口的作用是什么？離子源離子源的作用是接受樣品產(chǎn)生離子。 電子轟擊離子化EI特點(diǎn)：電離效率高，能量分散小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便。圖譜具有特征性，化合物分子碎裂大，能提供較多信息，對(duì)化合物的鑒別和結(jié)構(gòu)解析十分有利。所得分子離子峰不強(qiáng)，有時(shí)不能識(shí)別。本法不適合于高分子量和熱不穩(wěn)定的化合物。 化學(xué)離子化CICI 特點(diǎn)不會(huì)發(fā)生象EI中那么強(qiáng)的能量交換，較少