1、關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁，共24頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁，共24頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁，共24頁一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)為什么要進(jìn)行動(dòng)為什么要進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)？物細(xì)胞培養(yǎng)？材料一：在治療燒傷病人時(shí)，通常是取病人材料一：在治療燒傷病人時(shí)，通常是取病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植。對(duì)于大面積燒傷的健康皮膚進(jìn)行自體移植。對(duì)于大面積燒傷的病人，自體健康皮膚非常有限，使用他人的病人，自體健康皮膚非常有限，使用他人皮膚來源又不足，且會(huì)產(chǎn)生排斥反應(yīng)。怎樣皮膚來源又不足，且會(huì)產(chǎn)生排斥反應(yīng)。怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚呢？才能獲得大量的自體健康皮膚呢？材料二：許多動(dòng)物細(xì)胞能分泌蛋白質(zhì)，如抗體等。材料二：

2、許多動(dòng)物細(xì)胞能分泌蛋白質(zhì)，如抗體等。但是，單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)很少，怎樣才能獲得但是，單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)很少，怎樣才能獲得大量的分泌蛋白呢？大量的分泌蛋白呢？現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁，共24頁、什么是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)？、什么是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)？、具體培養(yǎng)過程、具體培養(yǎng)過程（1 1）為什么要把動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞？）為什么要把動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞？ 完成完成4444頁兩個(gè)問號(hào)。頁兩個(gè)問號(hào)。（2 2）什么叫細(xì)胞貼壁？什么叫接觸抑制？）什么叫細(xì)胞貼壁？什么叫接觸抑制？（3 3）什么叫原代培養(yǎng)？什么叫傳代培養(yǎng)？）什么叫原代培養(yǎng)？什么叫傳代培養(yǎng)？（4 4）總結(jié)出具體的培養(yǎng)過程？）總結(jié)出具體的培養(yǎng)過程？任務(wù)：閱讀

3、教材第任務(wù)：閱讀教材第44-4644-46頁第一段頁第一段時(shí)間：時(shí)間：4 4分鐘分鐘問題：問題：現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁，共24頁 就是從動(dòng)物機(jī)體中取出就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織相關(guān)組織，將，將它分散成它分散成單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞，然后，然后, ,放在放在適宜的培養(yǎng)適宜的培養(yǎng)基基中，讓這些細(xì)胞中，讓這些細(xì)胞生長和繁殖生長和繁殖。1 1、概念：、概念：一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁，共24頁2 2、培養(yǎng)過程：、培養(yǎng)過程：為什么要把動(dòng)物組織分散成單個(gè)為什么要把動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞？怎樣分散成單個(gè)細(xì)胞的？細(xì)胞？怎樣分散成單個(gè)細(xì)胞的？完成完成4444頁兩個(gè)問號(hào)頁兩個(gè)問號(hào)成塊的組織中細(xì)胞與

4、細(xì)胞靠在一起，成塊的組織中細(xì)胞與細(xì)胞靠在一起，彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖。另彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖。另外，單個(gè)細(xì)胞所需的營養(yǎng)容易供應(yīng)，外，單個(gè)細(xì)胞所需的營養(yǎng)容易供應(yīng)，其代謝廢物容易排出。所以分散成其代謝廢物容易排出。所以分散成單個(gè)細(xì)胞后培養(yǎng)。單個(gè)細(xì)胞后培養(yǎng)。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁，共24頁 用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶作用的適宜質(zhì)。胃蛋白酶作用的適宜pHpH約為約為2 2，當(dāng)，當(dāng)pHpH大于大于6 6時(shí)，胃蛋白酶時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境就會(huì)失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pHpH為為7.27.2

5、8.48.4。多。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pHpH為為7.27.27.47.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，而胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶沒有活性，而胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶適宜用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的消化。適宜用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的消化。 4444頁兩個(gè)小問題的答案頁兩個(gè)小問題的答案 胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長時(shí)間的胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用，因此必作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。須控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁

6、，共24頁3 3、幾個(gè)重要的概念、幾個(gè)重要的概念l細(xì)胞貼壁細(xì)胞貼壁懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上( (單層單層) )。要求：要求：培養(yǎng)瓶（皿）內(nèi)表面光滑、無毒、培養(yǎng)瓶（皿）內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。易于貼附?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁，共24頁l接觸抑制接觸抑制當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。制?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁，共24頁l原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)l傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶胰蛋白酶等處理讓等

7、處理讓細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。（即從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶代培養(yǎng)。（即從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)過程。）內(nèi)過程。）通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。培養(yǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁，共24頁l 細(xì)胞株細(xì)胞株 傳到傳到40-5040-50代后有代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化了變化，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去?？赡茉谂囵B(yǎng)條件下無限制的傳代下去。 從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培從原代培養(yǎng)細(xì)胞群

8、中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，能傳到養(yǎng)的細(xì)胞，能傳到40-5040-50代，其代，其遺傳物質(zhì)沒遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化有發(fā)生變化。l 細(xì)胞系細(xì)胞系l注意注意目前使用的細(xì)胞通常為目前使用的細(xì)胞通常為1010代以內(nèi)，以保持細(xì)代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。胞正常的二倍體核型。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁，共24頁胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液部分細(xì)胞部分細(xì)胞“癌變癌變”，無限傳代無限傳代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動(dòng)物體終培養(yǎng)成動(dòng)物體原原代代培培養(yǎng)養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)細(xì)胞胞貼貼壁壁剝離、分瓶剝離、分瓶培養(yǎng)過程：培養(yǎng)過程：分化程度低，增殖能力強(qiáng)分化程度低，增殖能力強(qiáng)去掉組織間去掉組織

9、間蛋白蛋白現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁，共24頁細(xì)胞細(xì)胞 懸懸浮液浮液1010代細(xì)代細(xì)胞胞5050代代細(xì)胞細(xì)胞無限無限傳代傳代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系細(xì)胞貼壁生長細(xì)胞貼壁生長隨細(xì)胞增多，出隨細(xì)胞增多，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)接觸抑制部分細(xì)胞癌變，失部分細(xì)胞癌變，失去接觸抑制，無限去接觸抑制，無限傳代傳代現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁，共24頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)都需要滿足什么條件？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)都需要滿足什么條件？任務(wù)：閱讀教材第任務(wù)：閱讀教材第4646頁黑體字后面頁黑體字后面時(shí)間：時(shí)間：4 4分鐘分鐘問題：問題：現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁，共24頁4 4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件l無菌、無毒的

10、環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）l營養(yǎng)營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清、微量元素等動(dòng)物血清、微量元素等）l溫度和溫度和PHPH溫度溫度36.536.5+ +0.50.5度，度，pH 7.2pH 7.27.47.4l氣體環(huán)境氣體環(huán)境O O2 2和和COCO2 2（95%95%空氣和空氣和5%CO5%CO2 2）離體培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物和有離體培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物和有毒物質(zhì)沒有防御能力。毒物質(zhì)沒有防御能力。保證細(xì)胞順利保證細(xì)胞順利的生長增殖的生長增殖現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁，共24頁COCO2

11、2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱 哺乳動(dòng)物離體細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)細(xì)胞一樣哺乳動(dòng)物離體細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)細(xì)胞一樣, ,需需要在恒足溫度下才能生存要在恒足溫度下才能生存, ,溫差變化一般不應(yīng)超溫差變化一般不應(yīng)超過過0.50.5度，因此培養(yǎng)箱對(duì)溫度應(yīng)具有較高靈敏度。度，因此培養(yǎng)箱對(duì)溫度應(yīng)具有較高靈敏度。 COCO2 2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)在于能恒定地供應(yīng)一定量的培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)在于能恒定地供應(yīng)一定量的COCO2 2, ,一般一般5%5%即可維持培養(yǎng)液即可維持培養(yǎng)液PHPH值穩(wěn)定值穩(wěn)定。培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的類型l天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：l合成培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基：營養(yǎng)價(jià)值高，成分復(fù)雜。營養(yǎng)價(jià)值高，成分復(fù)雜。成分明確，便于控制試驗(yàn)條件。成分明

12、確，便于控制試驗(yàn)條件?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁，共24頁5 5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1 1）生產(chǎn)蛋白生物制品：）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗病毒疫苗、干擾素干擾素、單克隆抗體單克隆抗體等；等；（4 4）用于）用于檢測有毒物質(zhì)檢測有毒物質(zhì)；（2 2）獲得大量自身的）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞皮膚細(xì)胞，用于植皮；，用于植皮；（3 3）作為基因工程的受體細(xì)胞。）作為基因工程的受體細(xì)胞。（5 5）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)；治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)；現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁，共24頁6 6、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

13、的比較、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的獲得細(xì)胞或獲得細(xì)胞或 細(xì)細(xì)胞分泌蛋白胞分泌蛋白細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體植物體快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等葡萄糖、動(dòng)物血清葡萄糖、動(dòng)物血清促生長因子促生長因子蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁，共24頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁，共24頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)特點(diǎn)原理原理概念：概念：貼

14、壁生長，接觸抑制貼壁生長，接觸抑制培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件無菌無毒，營養(yǎng)，溫度、無菌無毒，營養(yǎng)，溫度、PHPH，氣體環(huán)境，氣體環(huán)境過程過程細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁，共24頁1 1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是（改變的細(xì)胞是（ ） A A細(xì)胞系細(xì)胞系 B B細(xì)胞株細(xì)胞株 C C原代細(xì)胞原代細(xì)胞 D D傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞2 2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是（）、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是（）A.A.動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 B.B.單克隆抗體單克隆抗體 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)A AD D現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁，共24頁3 3、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（是這樣的組織細(xì)胞（ ）A.A.容易產(chǎn)生各種變異容易產(chǎn)生各種變異 B.B.具有更強(qiáng)的全能性具有更強(qiáng)的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力強(qiáng)分裂增殖的能力強(qiáng)D D4.4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要