1、生長激素的實(shí)驗(yàn)室檢測生長激素的實(shí)驗(yàn)室檢測 濟(jì)醫(yī)附院檢驗(yàn)科 陳新科1生長激素概述構(gòu)造：含有191個(gè)氨基酸殘基的單鏈，由兩個(gè)二硫鍵銜接的蛋白質(zhì)。分子量：22KD 。分泌：垂體前葉(腺垂體)嗜酸細(xì)胞分泌,是腺垂體中含量最多的激素,約占腺垂體激素的50% 。脈沖分泌，晝夜動搖大，深睡眠分泌最旺盛。GH的半衰期為半小時(shí)左右；皮下注射和肌肉注射的半衰期分別為1.75和3.4小時(shí)。2生長激素概述3一、促進(jìn)組織生長骨骼生長：GH及其介導(dǎo)IGF-1促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖和代謝，促進(jìn)線性增長。骨骺閉合后GH對維持骨礦物質(zhì)及骨密度依然有重要作用。細(xì)胞生長：如骨骼肌細(xì)胞數(shù)量及其體積的添加，添加紅細(xì)胞數(shù)量。器官增長：添加內(nèi)臟

2、器官的體積和功能。二、促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成GH促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，這表達(dá)在：細(xì)胞對氨基酸的攝取以及氮潴留的添加。生長激素的生理作用4三、促進(jìn)脂肪熄滅GH對脂肪細(xì)胞溶脂速率有重要調(diào)理作用；體外研討闡明，GH可提高脂解速率，抑制游離脂肪酸重新酯化。臨床上GH缺乏病人皮下脂肪增多，尤其在腹部。而GH治療后腹脂明顯減少。四、減少對葡萄糖的利用GH可減少外周組織對葡萄糖利用，亦可降低細(xì)胞對胰島素的敏感性，可致血糖上升。生長激素的生理作用5五、促進(jìn)水、礦物質(zhì)代謝GH促進(jìn)生長及合成代謝，使體內(nèi)鈉、鉀、磷酸鹽正平衡。GH參與對體液的調(diào)理，尤其對細(xì)胞外液，可促進(jìn)腎小管鈉回吸收，激活腎上腺素、血管緊張素、醛固酮系統(tǒng)，引起

3、水、鈉滯留添加。生長激素的生理作用六、其它：還有抗衰老、促進(jìn)腦功能、加強(qiáng)心肌功能、提高免疫功能等作用。6高級神經(jīng)中樞下丘腦垂體前葉生長激素GHRH(+)SRIF(-)IGFs(亦稱生長介素)直接作用甲狀腺性腺生長激素的分泌、調(diào)理生長激素生長激素釋放激素釋放激素 生長激素生長激素釋放抑制激素釋放抑制激素促進(jìn)骨的縱向生長促進(jìn)骨的成熟加速骨骺交融7生長激素的分泌、調(diào)理脈沖式分泌，晚9點(diǎn)至第二天凌晨1點(diǎn)，特別是晚上10點(diǎn)前后，生長激素的分泌量到達(dá)最高，可以到達(dá)白天的5-7倍。另外，早上6點(diǎn)前后的一兩個(gè)小時(shí)，生長激素也有一個(gè)分泌小頂峰。與年齡相關(guān)，青春發(fā)育中期分泌脈沖幅度最大，分泌量最多。頻率：間隔約3

4、5小時(shí)8生長激素的分泌、調(diào)理 一天中生長激素分泌的不平衡性。人體生長激素的分泌一天24小時(shí)內(nèi)是不平衡的，其分泌量睡眠時(shí)高于清醒時(shí)。80%的生長激素在人睡眠時(shí)分泌，特別是處于快速生長期的孩子，這個(gè)階段是生長激素分泌的頂峰，晚上分泌的生長激素特別多。所以,才有“人在睡中長的說法。 夜間生長激素分泌的不平衡性。生長激素在前半夜分泌比較多，這時(shí)是“睡眠黃金期，而到了后半夜，相對分泌要少些。 生長激素分泌受睡眠質(zhì)量影響。生長激素在入睡初期的深度睡眠時(shí)分泌最多，血液中生長激素的濃度到達(dá)最頂峰。假設(shè)睡眠遭到干擾，睡眠質(zhì)量不高的話，生長激素的分泌就會減少，身高的增長也有能夠遭到影響。9生長激素的檢測 隨機(jī)采血

5、：GH不像甲狀腺激素，平常在血液中濃度是根本恒定的，隨時(shí)采血就可以檢查。它在體內(nèi)呈峰值分泌，根底值很低05ng/ml都是正常，主要在夜間深睡眠時(shí)出現(xiàn)35個(gè)較高的分泌峰，但是夜間采血孩子能夠會醒，且時(shí)間長采血次數(shù)需更多，因此不采用。 GH激發(fā)實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過藥物促使GH分泌添加，以察看血中GH動態(tài)變化，從而了解下丘腦、垂體合成和分泌GH的才干。10生長激素激發(fā)實(shí)驗(yàn)以往曾運(yùn)用的運(yùn)動、睡眠等生理性篩查實(shí)驗(yàn)，由于準(zhǔn)確度低，目前已很少運(yùn)用，多數(shù)都直接采用藥物刺激實(shí)驗(yàn)：清晨不運(yùn)動及空腹。激發(fā)實(shí)驗(yàn)前一晚22點(diǎn)后開場禁食，可以適量喝水，但不能喝飲料，于第二天清晨8點(diǎn)前空腹進(jìn)展化驗(yàn)，全過程不能吃東西，可少喝水，最好孩

6、子進(jìn)入睡眠形狀。按照生長激素缺乏癥的診療規(guī)范，必需是分別做兩種藥物的生長激素激發(fā)實(shí)驗(yàn)防止一種藥物做激發(fā)實(shí)驗(yàn)有15%的假陽性。激發(fā)實(shí)驗(yàn)藥物：胰島素、可樂定、精氨酸、左旋多巴、吡定斯的明、GHRH等藥物中選兩種。激發(fā)實(shí)驗(yàn)給藥途徑:口服和靜脈，分別采用口服和靜脈兩種用藥方式，可減少因消化吸收緣由影響口服藥迅速起作用的能夠。衛(wèi)生部中要求，靜脈用藥方式必選一種。取血時(shí)間：0min、30min、60min、90min、120min。11實(shí)驗(yàn)室常用檢測方法 化學(xué)發(fā)光免疫測定CLIA：采用一步酶免夾心法測定。將樣品添加到含有抗GH-堿性磷酸酶結(jié)合物、蛋白緩沖液和包被著抗GH單克隆抗體的順磁性磁珠的反響管中。樣

7、品中的GH與固定在磁珠上的抗GH單克隆抗體結(jié)合，而抗GH-堿性磷酸酶結(jié)合物和GH上不同的抗原位點(diǎn)反響。將這種抗體-抗原-抗體復(fù)合物置于磁場內(nèi)，復(fù)合物被吸附住，而未結(jié)合的物質(zhì)被沖洗除去。隨后將化學(xué)發(fā)光底物添加到反響管中，它在ALP的作用下迅速發(fā)光，所產(chǎn)生的光的量與樣品中GH的濃度成正比，經(jīng)過多點(diǎn)校準(zhǔn)曲線確定樣品中GH的量。12電化學(xué)發(fā)光免疫測定ECLIA:是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫測定以后的新一代標(biāo)志免疫測定技術(shù)，是電化學(xué)發(fā)光ECL和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。其檢測原理： 將待測樣品、釕復(fù)合體標(biāo)志的抗GH單克隆抗體和生物素抗GH單 克隆抗體同時(shí)參與一個(gè)反響杯中孵育,反響生成“三明治

8、樣 抗原-抗體復(fù)合物。實(shí)驗(yàn)室常用檢測方法13電化學(xué)發(fā)光法14將被鏈霉親和素包被的磁珠參與反響杯中，再次孵育，使生物素經(jīng)過與親和素的結(jié)合將磁珠與反響復(fù)合物銜接為一體。 電化學(xué)發(fā)光法15電化學(xué)發(fā)光法16蠕動泵將構(gòu)成的 釕標(biāo)志抗體GH生物素化抗體磁珠復(fù)合體吸入流動丈量室，此時(shí)，磁珠被任務(wù)電極下面的磁鐵吸附于電極外表。同時(shí)，游離GH被吸出丈量室。電化學(xué)發(fā)光法17電化學(xué)發(fā)光法18蠕動泵參與含三丙胺TPA的緩沖液，同時(shí)電極加電壓，啟動ECL反響過程。反響過程中產(chǎn)生許多光子，光強(qiáng)度與釕標(biāo)志復(fù)合物的濃度呈線性關(guān)系,經(jīng)過光電倍增管檢測光強(qiáng)度，可測出待測GH的含量。電化學(xué)發(fā)光法19電化學(xué)發(fā)光法20結(jié)果判別生長激素

9、激發(fā)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判別：整個(gè)激發(fā)實(shí)驗(yàn)過程中，只需有一次任一次生長激素GH峰值 10ng/ml為正常；5ng/ml GH峰值 10ng/ml為部分缺乏；GH峰值 5ng/ml為完全缺乏不代表體內(nèi)完全沒有生長激素，主要是為了與部分性相區(qū)別。21其他相關(guān)激素其他相關(guān)激素22生長激素經(jīng)過直接作用于骨骼或經(jīng)過生長激素經(jīng)過直接作用于骨骼或經(jīng)過IGF-1介導(dǎo)作用于骨骼，促進(jìn)骨介導(dǎo)作用于骨骼，促進(jìn)骨骼的線性增長?？棍赖木€性增長。抗GH抗體妨礙抗體妨礙GH與受體結(jié)合，從而抑制與受體結(jié)合，從而抑制IGF-1的產(chǎn)的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制其促生長效果。生，進(jìn)而抑制其促生長效果。Comparative study of biosynthetic human growth hormone immunogenicity in growth hormone deficient children. Rougeot C, Marchand P, Dray F, et al. Horm Res. 1991; 35(1):76-81.生長激素作用機(jī)制23 IGF-和胰島素原有50%的序列一樣。但和胰島素不同的是，它在循環(huán)中仍保管相應(yīng)于胰島素C肽的那部分，并有一延伸的羧基端。胰島素樣生長因子-1IGF-124生長激素生長激素-生長介質(zhì)軸生長介質(zhì)軸 IGFs的合成與分泌受血液中生