1、會計學(xué)1高中生物選修高中生物選修1專題專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用用第1頁/共53頁微生物的基礎(chǔ)知識微生物的基礎(chǔ)知識微生物微生物真菌真菌原生動物原生動物原核生物原核生物 結(jié)構(gòu)簡單結(jié)構(gòu)簡單, ,個體多數(shù)十分微小個體多數(shù)十分微小( (光學(xué)顯微光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡鏡或電子顯微鏡才能看到才能看到) )，繁殖迅速，繁殖迅速第2頁/共53頁三三. .純化大腸桿菌純化大腸桿菌四四. .菌種保存菌種保存一一. .培養(yǎng)基培養(yǎng)基二二. .無菌技術(shù)無菌技術(shù)第3頁/共53頁一一. .培養(yǎng)基培養(yǎng)基1.1.概念概念: :人們按照對微生物的營養(yǎng)物質(zhì)的不同需人們按照對微生物的營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求求, ,配制供微生

2、物生長繁殖的配制供微生物生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì)。第4頁/共53頁一一. .培養(yǎng)基培養(yǎng)基2.2.成分：成分： 一般都含有一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、 無機(jī)鹽無機(jī)鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pHpH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)特殊營養(yǎng)物質(zhì), , 以及以及氧氣氧氣的要求。的要求。 第5頁/共53頁一一. .培養(yǎng)基培養(yǎng)基3.3.分類：分類：a a根據(jù)根據(jù)物理性質(zhì)物理性質(zhì)分分固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基用于微生物的分離計數(shù)用于微生物的分離計數(shù)液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于工業(yè)生產(chǎn)第6頁/共53頁一一. .培養(yǎng)基培養(yǎng)基3.3.分類：分類：b b根據(jù)

3、根據(jù)化學(xué)成分化學(xué)成分分分合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基成分明確成分明確天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基成分成分不明確不明確c c根據(jù)根據(jù)用途用途分分選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基第7頁/共53頁選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基 分離固氮菌分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基 分離導(dǎo)入了目的基因的受

4、體細(xì)胞分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞第8頁/共53頁二二. .無菌技術(shù)無菌技術(shù)利用較為利用較為溫和溫和的化學(xué)或物理方法的化學(xué)或物理方法,殺死物殺死物體中的體中的部份部份微生物微生物(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)1.1.消毒消毒以以強烈強烈的化學(xué)或物理方法消滅體內(nèi)外的化學(xué)或物理方法消滅體內(nèi)外所有所有微生物微生物, ,包括包括芽孢芽孢和孢子。和孢子。2.2.滅菌滅菌第9頁/共53頁 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的形的休眠體休眠體，叫做，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗

5、力。芽孢又小又輕，、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜的時候，芽孢又可以萌發(fā)，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌形成一個細(xì)菌. .第10頁/共53頁a.a.煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6minb.b.巴氏消毒法巴氏消毒法:70-75:70-75下煮下煮30min30min或或8080下煮下煮15min15minc.c.化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源d.d.紫外線消毒紫外線消毒常用消毒的方法：常用消毒

6、的方法：第11頁/共53頁干熱滅菌：干熱滅菌：160-170 160-170 下加熱下加熱1-1-2h2h。高壓蒸氣滅菌：高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.15-30min.灼燒滅菌灼燒滅菌常用滅菌的方法：常用滅菌的方法：第12頁/共53頁三三. .純化大腸桿菌純化大腸桿菌一一).).培養(yǎng)基配制與滅菌培養(yǎng)基配制與滅菌二二).).接種、培養(yǎng)接種、培養(yǎng)純化大腸桿菌純化大腸桿菌三三).).結(jié)果分析與評價結(jié)果分析與評價第13頁/共53頁二二. .純化大腸桿菌純化大腸桿菌2)2)稱量稱量( (按比例按比例) )3) 3) 溶化溶化1)1)計算計算4)4

7、)滅菌滅菌: :將包好培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行將包好培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌5)5)待冷卻到待冷卻到5050O OC C時時倒平板倒平板一一).).培養(yǎng)基配制與滅菌培養(yǎng)基配制與滅菌第14頁/共53頁倒平板操作的討論倒平板操作的討論用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手不燙手時即可時即可開始倒平板。開始倒平板。 通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止凝結(jié)在皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基防止凝結(jié)在皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基, ,造成污染造成

8、污染空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此上滋生，因此最好不要最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。用這個平板培養(yǎng)微生物。第15頁/共53頁二二).).純化大腸桿菌純化大腸桿菌1.1.原理原理 在適宜環(huán)境下，在適宜環(huán)境下，單個細(xì)菌單個細(xì)菌能迅速生長能迅速生長增殖形成一個細(xì)胞群體增殖形成一個細(xì)胞群體菌落菌落第16頁/共53頁二二).).純化大腸桿菌純化大腸桿菌2.2.方法方法: :平板劃線法、稀釋涂布平板法平板劃線法、稀釋涂布平板法1.1.原理原理 在適宜環(huán)境下，在適宜環(huán)境下，單個細(xì)菌單個細(xì)菌能迅速生長能迅速生長增殖形成一個細(xì)胞群體增殖形成一個細(xì)

9、胞群體菌落菌落第17頁/共53頁4.4.平板劃線法平板劃線法 通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃連續(xù)劃線線的操作，將聚集的菌種逐步的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散稀釋分散到培養(yǎng)到培養(yǎng)基的表面?；谋砻妗Ｗ⒁馐马椬⒁馐马椂?.).純化大腸桿菌純化大腸桿菌第18頁/共53頁注意事項注意事項: : a.a.在操作的第一步、劃線之前以及在操作的第一步、劃線之前以及劃線操作結(jié)束時都要劃線操作結(jié)束時都要灼燒接種環(huán)灼燒接種環(huán)？避免接種環(huán)上可能存在的避免接種環(huán)上可能存在的微生物微生物污染培養(yǎng)物污染培養(yǎng)物殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種殘留的菌

10、種，使下，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端。的末端。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免避免細(xì)菌細(xì)菌污染污染環(huán)環(huán)境和感染操作者境和感染操作者第19頁/共53頁注意事項注意事項: :b.b.在灼燒接種環(huán)之后在灼燒接種環(huán)之后, ,要等其冷卻后再進(jìn)行劃線要等其冷卻后再進(jìn)行劃線 以免接種環(huán)溫度太高，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種殺死菌種。c.c.在作第二次以及其后的劃線操作時，總是從在作第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的上一次劃線的末端開始末端開始劃線劃線能使細(xì)菌的數(shù)目能使細(xì)菌的數(shù)目隨著隨著劃線劃線次數(shù)

11、次數(shù)的增加而的增加而逐步減少逐步減少,最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。第20頁/共53頁5.5.稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)。菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)。 二二).).純化大腸桿菌純化大腸桿菌第21頁/共53頁系列稀釋操作系列稀釋操作101102103104105106第22頁/共53頁涂布平板操作涂布平板操作(1)(1)將涂布器浸在盛有將涂布器浸在盛有7070的酒精的燒杯中。的酒精的燒杯中。(2)(2)

12、取少量菌液取少量菌液( (不超不超0.1mL0.1mL),),滴加到培養(yǎng)基表面滴加到培養(yǎng)基表面。(3)(3)將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷卻卻8 810s10s。(4)(4)用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。第23頁/共53頁6.6.培養(yǎng)觀察培養(yǎng)觀察 將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入放入3737度恒溫箱中培養(yǎng)度恒溫箱中培養(yǎng) 12h12h和和24h24h后，分別觀察記錄后，分別觀察記錄二二).).純化大腸桿菌純化大腸桿菌第24頁/共53頁 1.1.未接種的培養(yǎng)基

13、表面是否有菌落生長？如果有菌未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？落生長，說明了什么？無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則，說明培養(yǎng)基有雜菌，需要重新制備。否則，說明培養(yǎng)基有雜菌，需要重新制備。 2.2.在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨立的在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似？菌落？它們的大小、形狀、顏色相似？ 如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。形狀、顏色相似的菌落。三三).).結(jié)果分析與評價結(jié)果分析與評

14、價第25頁/共53頁 3.3.培養(yǎng)培養(yǎng)12h12h和和24h24h后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？ 培養(yǎng)培養(yǎng)12h12h與與24h24h后的大腸桿菌菌落的后的大腸桿菌菌落的大小大小會有明顯會有明顯不同不同。隨著時間的延長、菌落的不斷生長，使菌落不斷增大。隨著時間的延長、菌落的不斷生長，使菌落不斷增大。 4.4.如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。其可能的原因。 無菌操作無菌操作未未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹

15、底；可能是接種時發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了能是接種時發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。污染。三三).).結(jié)果分析與評價結(jié)果分析與評價第26頁/共53頁 1.1.試管低溫臨時保存試管低溫臨時保存 將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成菌落將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成菌落后，置于后，置于4 4O OC C的冰箱中保存（每隔的冰箱中保存（每隔3 36 6個月要重新接種培個月要重新接種培養(yǎng)后再保存）。養(yǎng)后再保存）。 2.2.甘油管長期保存甘油管長期保存 在在3mL3mL的甘油瓶中加入的甘油瓶中加入1mL1mL的甘油，高壓滅菌。將的甘油，高壓滅菌。將1mL1m

16、L培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充分混合后，置于培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充分混合后，置于2020O OC C的的冷凍箱中保存。冷凍箱中保存。四四. .菌種保存菌種保存第27頁/共53頁一一. .基礎(chǔ)知識原理基礎(chǔ)知識原理1.1.分離分離 - - 篩選菌株篩選菌株篩選原理篩選原理: :人為提供有利于目的菌株生長的人為提供有利于目的菌株生長的條件條件，同時抑，同時抑制或阻止其他微生物生長。制或阻止其他微生物生長。篩選方法篩選方法: :選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)控制培養(yǎng)基的控制培養(yǎng)基的PHPH控制培養(yǎng)的溫度控制培養(yǎng)的溫度( (氧濃度等氧濃度等) )第28頁/共53頁一一. .基礎(chǔ)知識原理基礎(chǔ)知識原理2

17、.2.計數(shù)計數(shù)篩選方法篩選方法: :用顯微鏡用顯微鏡直接直接計數(shù)計數(shù)間接間接計數(shù)計數(shù)統(tǒng)計平板的菌落數(shù)統(tǒng)計平板的菌落數(shù)間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）: :原理原理: :在在稀釋度稀釋度足夠足夠高高時，微生物在固體培養(yǎng)基上時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的所形成的一個菌落一個菌落是由是由一個單細(xì)胞一個單細(xì)胞繁殖而成繁殖而成的，即一個菌落的，即一個菌落代表代表原先的一個細(xì)菌原先的一個細(xì)菌方法方法: :稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法計算公式計算公式: :（C CV V）x Mx M第29頁/共53頁第30頁/共53頁一一. .基礎(chǔ)知識原理基礎(chǔ)知識原理3.3.設(shè)計對照實驗設(shè)計對照實驗?zāi)康呐?/p>

18、除無關(guān)變量對實驗結(jié)果的影響，目的排除無關(guān)變量對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可靠性提高實驗結(jié)果的可靠性第31頁/共53頁二二. .實驗設(shè)計與操作實驗設(shè)計與操作1.1.土壤取樣土壤取樣2.2.制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基3.3.接種、培養(yǎng)、觀察接種、培養(yǎng)、觀察4.4.細(xì)菌的計數(shù)細(xì)菌的計數(shù)第32頁/共53頁二二. .實驗設(shè)計與操作實驗設(shè)計與操作1.1.土壤取樣土壤取樣2.2.制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基對照對照選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 - - 尿素為唯一氮源尿素為唯一氮源第33頁/共53頁二二. .實驗設(shè)計與操作實驗設(shè)計與操作3.3.接種、培養(yǎng)、觀察接種、培養(yǎng)、觀察稀釋涂布平板接種

19、稀釋涂布平板接種稀釋液的倍數(shù)的范圍稀釋液的倍數(shù)的范圍: :真菌真菌:10:102 210104 4 細(xì)菌細(xì)菌:10:104 410106 6 放線菌放線菌:10:103 310105 5每一個濃度做每一個濃度做3 3個或個或3 3個以上個以上平板平板, ,求平均值求平均值重復(fù)實驗重復(fù)實驗-增強說服力和準(zhǔn)確性增強說服力和準(zhǔn)確性第34頁/共53頁二二. .實驗設(shè)計與操作實驗設(shè)計與操作3.3.接種、培養(yǎng)、觀察接種、培養(yǎng)、觀察時間時間 溫度溫度細(xì)菌細(xì)菌1-2d 301-2d 303737O OC C放線菌放線菌霉菌霉菌5-7d 255-7d 252828O OC C3-4d 253-4d 252828

20、O OC C第35頁/共53頁二二. .實驗設(shè)計與操作實驗設(shè)計與操作1.1.土壤取樣土壤取樣2.2.制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基3.3.接種、培養(yǎng)、觀察接種、培養(yǎng)、觀察4.4.細(xì)菌的計數(shù)細(xì)菌的計數(shù)每隔每隔24h24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。當(dāng)菌落數(shù)目當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在時，選取菌落數(shù)在30-30030-300的平板進(jìn)行的平板進(jìn)行計數(shù)。計數(shù)。 每同一濃度至少對每同一濃度至少對3 3個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù), ,求平均值求平均值 再根據(jù)對應(yīng)稀釋的計算出樣品中的細(xì)菌數(shù)再根據(jù)對應(yīng)稀釋的計算出樣品中的細(xì)菌數(shù) 第36頁/共53頁計數(shù)計數(shù)每克土壤中菌株數(shù)每克土壤中菌株數(shù) ( (

21、 C/V C/V ) ) X MX M平板的平均平板的平均菌落數(shù)菌落數(shù)X X 稀釋液的稀釋液的稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)涂布時所用稀釋液涂布時所用稀釋液體積體積第37頁/共53頁三三. .課題延伸課題延伸原理原理細(xì)菌分解尿素時產(chǎn)生細(xì)菌分解尿素時產(chǎn)生氨氨，氨使培養(yǎng)，氨使培養(yǎng)基的堿性增強?；膲A性增強。因此，可通過檢測培養(yǎng)基因此，可通過檢測培養(yǎng)基PHPH變化來鑒定變化來鑒定該種細(xì)菌能否分解尿素該種細(xì)菌能否分解尿素方法方法在選擇培養(yǎng)基中加酚紅指示劑在選擇培養(yǎng)基中加酚紅指示劑, ,培養(yǎng)培養(yǎng)細(xì)菌，觀察指示劑是否變紅。細(xì)菌，觀察指示劑是否變紅。對分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定對分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定第38頁/共53頁課

22、題課題. .分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離一一. .基礎(chǔ)知識原理基礎(chǔ)知識原理1.1.纖維素與纖維素酶纖維素與纖維素酶：一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，廣泛地存在于植物的根、莖、葉等器官中。廣泛地存在于植物的根、莖、葉等器官中。：由微生物分泌的一種復(fù)合酶，包括由微生物分泌的一種復(fù)合酶，包括酶酶、酶和葡萄糖苷酶，由于它們的協(xié)同作用，最終將纖維素分酶和葡萄糖苷酶，由于它們的協(xié)同作用，最終將纖維素分解成葡萄糖。解成葡萄糖。纖維素纖維素酶酶酶酶纖維二糖纖維二糖葡萄糖葡萄糖苷苷 酶酶葡萄糖葡萄糖第39頁/共53頁課題課題. .分解纖維素的微

23、生物的分離分解纖維素的微生物的分離一一. .基礎(chǔ)知識原理基礎(chǔ)知識原理2.2.剛果紅染色法剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理篩選纖維素分解菌的原理第40頁/共53頁二二. .實驗設(shè)計實驗設(shè)計土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明挑選產(chǎn)生透明圈的菌落圈的菌落1.1.實驗流程實驗流程課題課題. .分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離第41頁/共53頁選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 將土樣加入裝有將土樣加入裝有30ml30ml選擇培養(yǎng)基的錐形選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度瓶中，將錐形

24、瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培養(yǎng)下震蕩培養(yǎng)1 12 2天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)可重復(fù)選擇培養(yǎng)第42頁/共53頁剛果紅染色法剛果紅染色法思考：思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足 方法一方法一 缺點缺點是操作煩瑣，加入剛果紅溶是操作煩瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；液會使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點優(yōu)點是這樣顯示出是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用 方法二方法二 優(yōu)點優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混是操作簡便，不存在菌落混雜問題雜問題缺點一缺點一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質(zhì)，可是

25、由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質(zhì)，可使產(chǎn)生淀粉酶的菌落也出現(xiàn)透明圈使產(chǎn)生淀粉酶的菌落也出現(xiàn)透明圈( (模糊模糊) )；缺點二缺點二有些微生物具有降解色素的能力，它們有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會形成明顯的透明圈在長時間培養(yǎng)過程中會形成明顯的透明圈第43頁/共53頁課題延伸課題延伸 對分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定對分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生纖維素酶，進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生纖維素酶，再進(jìn)行纖維素酶測定再進(jìn)行纖維素酶測定第44頁/共53頁專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用一一. .基礎(chǔ)知識和基本技術(shù)基礎(chǔ)知識和基本技術(shù)1.1.培養(yǎng)基培養(yǎng)基概念、分類、成分概念、分類

26、、成分3.3.制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板4.4.無菌技術(shù)無菌技術(shù)滅菌滅菌消毒消毒5.5.接種技術(shù)接種技術(shù)平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法2.2.菌落菌落概念、特點概念、特點第45頁/共53頁專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用二二. .微生物培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用微生物培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用2.2.分離微生物分離微生物方法方法4.4.微生物的分離和鑒定微生物的分離和鑒定3.3.微生物計數(shù)微生物計數(shù)原理、方法、注意事項原理、方法、注意事項原理、方法原理、方法1.1.純化微生物純化微生物原理、方法原理、方法第46頁/共53頁

27、微生物的基礎(chǔ)知識微生物的基礎(chǔ)知識微生物微生物真菌真菌原生動物原生動物原核生物原核生物 結(jié)構(gòu)簡單結(jié)構(gòu)簡單, ,個體多數(shù)十分微小個體多數(shù)十分微小( (光學(xué)顯微光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡鏡或電子顯微鏡才能看到才能看到) )，繁殖迅速，繁殖迅速第47頁/共53頁a.a.煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6minb.b.巴氏消毒法巴氏消毒法:70-75:70-75下煮下煮30min30min或或8080下煮下煮15min15minc.c.化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源d.d.紫外線消毒紫外線消毒常用消毒的方法：常用消毒的方法：第48頁/共53頁倒平板操作的討論倒平板操作的討論用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手不燙手時即可時即可開始倒平板。開始倒平板。 通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止凝結(jié)在皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基防止凝結(jié)在皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基, ,造成污染造成污染空氣中的微生物可能在皿蓋與皿