1、實驗七酵母菌形態(tài)觀察與死活細胞的鑒定酵母菌形態(tài)觀察與死活細胞的鑒定實驗?zāi)康?1、了解自然界的酵母菌及其形態(tài)結(jié)構(gòu)； 2、掌握酵母菌的死活細胞的鑒定方法； 3、學(xué)會計算成活率。實驗器材 1、菌種：酵母菌 2、儀器或其它用具： 0.05美藍染液和0.1%美藍染液， 載玻片，蓋玻片，顯微鏡。酵母菌的形狀觀察 1、不運動的單細胞真核微生物，通常比常見細菌大幾倍甚至十幾倍。因此用高倍鏡觀察即可。 2、酵母細胞一般呈卵圓形。 3、其繁殖方式比較復(fù)雜，無性繁殖主要是出芽生殖，有些酵母可形成假菌絲；有性繁殖通過接合形成子囊及子囊孢子。二、死、活細胞鑒定原理 美藍是一種弱氧化劑，氧化態(tài)呈藍色，還原態(tài)呈無色。用它來

2、對酵母的活細胞進行染色，由于細胞中新陳代謝的作用，使細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍從藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，所以酵母的活細胞無色，而對于死細胞或代謝緩慢的老細胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細胞。三、美藍染色步驟 1、在載玻片中央加一滴01和0.05呂氏堿性美藍染液，液滴不可過多或過少，以免蓋上蓋玻片時，溢出或留有氣泡。然后取酵母菌少許，放在呂氏堿性美藍染液中，使菌體與染液均勻混合。 2、用鑷子夾蓋玻片一塊，小心地蓋在液滴上。蓋片時應(yīng)注意，不能將蓋玻片平放下去，應(yīng)先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然后

3、將整個蓋玻片慢慢放下，這樣可以避免產(chǎn)生氣泡。 3、將制好的片子放置3分鐘后鏡檢。先用低倍鏡觀察，然后換用高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)，同時可以根據(jù)是否染上顏色來區(qū)別死、活細胞。 4、30分鐘后再觀察，注意死細胞數(shù)量是否增加。 四、成活率的測定 在一個視野里記死細胞和活細胞數(shù)，共記數(shù)5-6個視野。 成活率=活細胞總數(shù)（死+活細胞總數(shù)） 100注意事項 染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液會溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察； 蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡，影響觀察。實驗報告 (1)繪圖說明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征； (2)計算不同時間內(nèi)酵母菌的死亡率； （3）不同濃度的美蘭染液對酵母菌的死

4、活有何影響？實驗八酵母菌的大小測定一、目的要求一、目的要求 1、學(xué)習(xí)并掌握用測微尺測定微生物 大小的方法。 2、了解目鏡測微尺和鏡臺測微尺的原理 3、增強對微生物細胞大小的感性認識。二、實驗器材及用品二、實驗器材及用品 1、菌種 酵母菌 2、儀器或其它用具 目鏡測微尺，鏡臺測微尺，顯微鏡。三、基本原理三、基本原理 微生物細胞大小，是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。由于菌體很小，只能在顯微鏡下測量。用來測量微生物細胞大小的工具有目鏡測微尺和鏡臺測微尺。 鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片。一般將1mm等分為100格，每格長度等于001mm（即10m）。是專用于校正目鏡測微尺

5、每格長度的。 目鏡測微尺是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片，其中央刻有精確的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長線相隔。由于所用接目鏡放大倍數(shù)和接物鏡放大倍數(shù)的不同，目鏡測微尺每小格所代表的實際長度也就不同，因此，目鏡測微尺不能直接用來測量微生物的大小，在使用前必須用鏡臺測微尺進行校正，以求得在一定放大倍數(shù)的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值，然后才可用來測量微生物的大小。四、操作步驟1、裝目鏡測微尺2、校正目鏡測微尺（1）放鏡臺測微尺 將鏡臺測微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺上。（2）先用低倍鏡觀察，將鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野中央，調(diào)節(jié)焦距，當(dāng)清晰的看到鏡

6、臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行。利用移動器移動鏡臺測微尺，使兩尺在某一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，然后分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺測微尺和目鏡測微尺所占格數(shù)。用同樣的方法換成高倍鏡和油鏡進行校正，分別測出在高倍鏡和油鏡下，兩重合線之間兩尺分別所占格數(shù)。 顯微測微尺顯微測微尺 （3）計算 由于已知鏡臺測微尺每格長10um，根據(jù)公式 目鏡測微尺每格長度（um）=兩條重合線間鏡臺測微尺的格數(shù)10/兩重合線間目鏡測微尺的格數(shù) 即可分別計算出在不同放大倍數(shù)下，目鏡測微尺 每格所代表的長度。 低倍鏡下-倍目鏡測微尺每格長度為- 高倍鏡下-倍目鏡測微尺每格長度為- 油鏡下-倍目鏡測微尺每格長度為-注意事項 1、鏡臺測微尺的玻片很薄，在標定油鏡時，要格外注意，以免壓碎鏡臺測微尺或損壞鏡頭； 2、標定目鏡測微尺時，一定要準確對正目鏡測微尺與鏡臺測微尺的重合線。 3、酵母菌大小的測定 先制備水晶片，再用低倍鏡找到標本后，換高倍鏡測定酵母菌的長和寬。測定時，通過轉(zhuǎn)動目鏡測微尺和移動載玻片，測出酵母菌細胞的寬和長所占目鏡測微尺的格數(shù)。最后將所測得的格數(shù)乘以目鏡測微尺（用高倍鏡時）每格所代表的長度，即為該菌的實際大??；選擇3-5個細胞進行測量，求平均值。 大小范圍表示為：酵母菌：寬um*長um五、實驗報告 (1)當(dāng)接目鏡不