1、v1.0可編輯可修改微生物取樣方法舉例一：一、空氣采樣及檢驗(yàn)方法1培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，按中條配制2采樣（空氣沉降法）布點(diǎn)：面積小于30平方米的車間，設(shè)一對(duì)角線，在線上取 3點(diǎn)，即中心一點(diǎn)，兩端在距墻1 米處各取一點(diǎn)；面積大于30平方米的車間，設(shè)東、西、南、北、中5個(gè)點(diǎn)，其中東、西、南、 北點(diǎn)均距墻1米。采樣高度：與地面垂直高度 80-150厘米。采樣方法；用直徑為9厘米的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)上暴露 20分鐘蓋上送檢培養(yǎng)。3培養(yǎng)：于37c培養(yǎng)24小時(shí)。4檢測(cè)頻率：每周空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：生車間、熟車間、成品車間：低于 100個(gè)半成品庫(kù)、成品庫(kù)：低于10個(gè)二、設(shè)備的采樣與檢驗(yàn)方法根據(jù)生產(chǎn)過(guò)程所

2、要求的重點(diǎn)衛(wèi)生部位，實(shí)驗(yàn)室對(duì)其進(jìn)行涂抹采樣，進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)。1采樣方法涂抹法（適用于表面平坦的設(shè)備和工器具產(chǎn)品接觸面）取經(jīng)過(guò)滅菌的鋁片框（框內(nèi)面積為 50平方厘米）放在需檢查的部位上，用無(wú)菌棉球蘸上無(wú)菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分，擦完后立即將棉球投入盛有10毫升無(wú)菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。貼紙法（適用于表面不平坦的設(shè)備和工器具接處面）將無(wú)菌規(guī)格紙（5X5厘米，紙質(zhì)要薄而軟）用無(wú)菌生理鹽水泡濕后，于需測(cè)部分分別貼上兩 張，兩張紙面積共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升無(wú)菌生理鹽水的試管中，此液每 毫升代表5平方厘米。2檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)將上述樣液充分振搖，根據(jù)衛(wèi)生

3、情況，相應(yīng)地做 10倍遞增稀釋，選擇其中2-3個(gè)合適的稀釋 度作平皿傾注培養(yǎng)，培養(yǎng)基用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，每個(gè)稀釋度作 2個(gè)平皿，每個(gè)平皿注入1毫升 1v1.0可編輯可修改樣液，于37c培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)菌落數(shù)。結(jié)果計(jì)算表面細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均數(shù)X樣液稀釋倍數(shù)/30X2致病菌的檢驗(yàn)沙門氏菌，參照進(jìn)行金黃色葡球菌，參照進(jìn)行4.檢驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌總數(shù)10 100個(gè)/ cm2,5.關(guān)鍵點(diǎn)：細(xì)菌總數(shù)0 10個(gè)/ cm2一般區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)0 100個(gè)/ cm2三、人員手表面細(xì)菌污染情況的檢驗(yàn)1. 采樣方法：用一支蘸有無(wú)菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對(duì)象手的全部，反復(fù)兩次，涂擦的時(shí)候棉拭子要相

4、應(yīng)地轉(zhuǎn)動(dòng)，擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有 10毫升無(wú)菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢培養(yǎng)。2. 檢驗(yàn)方法：同工器具表面細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法。3. 結(jié)果計(jì)算：每只手表面的細(xì)菌總數(shù)（cfu/只手）=平皿上菌落的平均數(shù)X 樣液稀釋倍數(shù)四、消毒液藥效的微生物學(xué)鑒定法1采樣對(duì)象：正常使用的消毒液，和已知配制好備用的消毒液2采樣及檢驗(yàn)方法在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌吸管吸取 1毫升樣液，加入9毫升稀釋液中混勻，對(duì)于醇類與酚類消 毒劑，稀釋液用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯即可；對(duì)于含氯消毒劑、含碘消毒劑，需在肉湯中加入 蜥代硫 酸鈉，對(duì)洗必泰、季俊鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3% （WM 土溫80和呼日磷脂；對(duì)醛類消毒劑，需在肉湯中加

5、入&氨酸；對(duì)于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入（WM 土溫80,以中和被檢樣液中的殘效作用，將注入了樣液的稀釋液充分搖勻，取 1毫升注入平皿，隨之倒入普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固 后，翻轉(zhuǎn)平皿，將平皿于37c條件下培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)。3結(jié)果分析平板上有菌生長(zhǎng)，表明被檢樣液中有殘存活菌，若每個(gè)平板菌落數(shù)在 10個(gè)以下，仍可用于消 毒，若每個(gè)平板菌落數(shù)超過(guò)10個(gè)，說(shuō)明每毫升被檢樣液含菌量已超過(guò) 100個(gè)，即不宜在用于 消毒。v1.0可編輯可修改該公式是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)公式.它的理論模式依據(jù)是：100CM2的面積上10MIN降落的菌落數(shù)，等于1升空氣中所含的細(xì)菌總數(shù).系數(shù)5

6、0000基于上述假說(shuō)和單位換算而來(lái).細(xì)菌總數(shù)（CFU/M3）=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT5/10T:實(shí)際放置了 5MIN;100/A:A單一培養(yǎng)皿面積；1000:1M3=1000L 啊，換算成 m3N:平均菌落數(shù)舉例二：一、物體表面采樣及檢查方法采樣面積被采表面 100cmz取全部表面；被采表面100cm2取100cm2采樣方法用5X5cm2的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板；放在被檢物體表面，用浸有無(wú)菌生理鹽水液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次；并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭于。連續(xù)采樣14個(gè)規(guī)格板面積；剪去手 接觸部分，將棉拭于放入裝10ml采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采

7、用棉拭子直接 涂抹物體的方法采樣。培養(yǎng)（略）二、空氣及與食品接觸面微生物檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)1、目的：檢測(cè)生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo)，生產(chǎn)區(qū) 域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控，達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，以控制食品成品的質(zhì)量。2、參照標(biāo)準(zhǔn)：中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB15979- 1995、HACCP®理與實(shí)施、中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)公共場(chǎng)所空氣微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定 GB/T -2000、 中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境檢驗(yàn)檢疫局二000四年出入食品微生物

8、檢驗(yàn)培訓(xùn)教材中出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗(yàn)方 法、日本東京冷凍食品檢驗(yàn)方法。3、采樣與檢測(cè)方法：v1.0可編輯可修改空氣的采樣與測(cè)試方法樣品采集：（1）取樣頻率：a）車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行采樣，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。b）全廠統(tǒng)一放長(zhǎng)假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行采樣。c）產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)車間進(jìn)行采樣，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行 采樣檢驗(yàn)。d）實(shí)驗(yàn)性新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗(yàn)。e）正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣，每周一次。（2）采樣方法在動(dòng)態(tài)下進(jìn)行，室內(nèi)面積不超過(guò) 30 m2在對(duì)角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1m室內(nèi)面積超過(guò)30 m2,設(shè)東、西、南、北、

9、中五點(diǎn)，周圍 4點(diǎn)距墻1 m。采樣時(shí)，將含平 板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板（直徑9 cm）置采樣點(diǎn)（約桌面高度），并避開空調(diào)、門窗等空氣流通 處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露 5 min。采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)， 送檢時(shí)間不得超過(guò)6h,若樣品保存于04c條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過(guò) 24h0菌落培養(yǎng)：（1）在采樣前將準(zhǔn)備好的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37c ± 1 C培養(yǎng)24 h ,取出檢查有無(wú)污染，將污染培養(yǎng)基剔除。（2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在 6 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，細(xì)菌總數(shù)于37c ±1C培養(yǎng)48h觀察結(jié)果， 計(jì)數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù)。（3）菌落計(jì)算：a）記錄平均菌落數(shù)，

10、用“個(gè)/皿”來(lái)報(bào)告結(jié)果。用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn) 計(jì)，然后用510倍放大鏡檢查，不可遺漏。b）若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以 2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。工作臺(tái)（機(jī)械器具）表面與工人手表面采樣與測(cè)試方法：樣品采集：（1）取樣頻率：a）車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情 況。b）全廠統(tǒng)一放長(zhǎng)假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行全面擦拭檢驗(yàn)。v1.0可編輯可修改c）產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)車間可疑處進(jìn)行擦拭，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后 再進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。d）實(shí)驗(yàn)新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗(yàn)。e）對(duì)工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時(shí)，進(jìn)行擦

11、拭檢驗(yàn)。f）正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭，每周一次。（2）采樣方法：a）工作臺(tái)（機(jī)械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或 有一定影響的表面）取25cm2的面積，在其內(nèi)涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉 簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。b）工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來(lái)回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含 10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。（3）采樣注意事項(xiàng)：擦拭時(shí)棉簽要隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)，保證擦拭的準(zhǔn)確性。對(duì)每個(gè)擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場(chǎng)的具體位置、 擦拭時(shí)間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時(shí)間細(xì)菌？大腸菌群的檢測(cè)培養(yǎng)：樣液

12、稀釋：將放有棉棒的試管充分振搖。此液為 1: 10稀釋液。如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀 釋，吸取1ml 1 : 10樣液加9ml無(wú)菌生理鹽水中，混勻，此液為 1: 100稀釋液。細(xì)菌總數(shù)：（1）以無(wú)菌操作，選擇12個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿（平行樣），將已融化冷至45c左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約 15ml, 充分混合。（2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置 36c ± 1C培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。（3）結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)大腸菌群：（1）平板法：a）以無(wú)菌操作，選擇12個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無(wú)菌平皿內(nèi)

13、，每個(gè)稀釋度做兩 個(gè)平皿（平行樣），將已融化冷至45c左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約 15ml, 充分混合。待瓊脂凝固后，再覆蓋一層培養(yǎng)基，約3-5 ml 0b）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置 36 C±1C培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。c）結(jié)果計(jì)算：以平板上出現(xiàn)紫紅色菌落的個(gè)數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。d）結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)v1.0可編輯可修改（2）試管法：a）以無(wú)菌操作，選擇3個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGL的湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度 接種三管。b）置BGL的湯管于36C ±1C培養(yǎng)48±2h。記錄所有BGL的湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。c）

14、結(jié)果報(bào)告：按BGL的湯管產(chǎn)氣管數(shù)，查MPNft報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的大 腸菌群值。金黃色葡萄球菌檢測(cè)（1）定性檢測(cè)a）取1ml稀釋液注入滅菌白平皿內(nèi)，傾注15-20ml的B-P培養(yǎng)基，（或是吸取稀釋液，用L 棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進(jìn)36±1C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時(shí)。b）從每個(gè)平板上至少挑取1個(gè)可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。c）結(jié)果報(bào)告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性，即報(bào)告手（工器具）上 有金黃色葡萄球菌存在。（2）定量檢測(cè)a）以無(wú)菌操作，選擇3個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10%氯化鈉胰蛋白陳大豆肉湯 培

15、養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種三管。b）置肉湯管于36±1C的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)。劃線接種于表面干燥的 B-P瓊脂平板，置 36 C ± 1C培養(yǎng)4548小時(shí)。c）從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基，36c ± 1 C培養(yǎng)2024小時(shí)。d）取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗(yàn)，記錄試驗(yàn)結(jié)果。e）報(bào)告結(jié)果：根據(jù)凝固酶試驗(yàn)結(jié)果，查 MPNft報(bào)告每25 cm2食品接觸面中或每只手的金黃 色葡萄球菌值。工廠環(huán)境中病原體的檢測(cè)計(jì)劃與方法檢測(cè)計(jì)劃：為了保證食品安全，工廠應(yīng)該對(duì)生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)估，檢測(cè) 項(xiàng)目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生

16、物，化驗(yàn)室應(yīng)該按照一定的計(jì)劃對(duì)生產(chǎn)場(chǎng)所環(huán)境 中的病原體進(jìn)行檢測(cè)，其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設(shè)備框架、運(yùn)輸?shù)闹Ъ?，冷藏裝置、速凍機(jī)、傳送帶、設(shè)備的螺絲、維修工具等部位。當(dāng)某個(gè)點(diǎn)檢測(cè)到病員微 生物時(shí)，應(yīng)該對(duì)環(huán)境中的相似點(diǎn)加大檢測(cè)頻率；在把所有的預(yù)定點(diǎn)檢測(cè)完后，應(yīng)該對(duì)環(huán)境中 的病原微生物的存在狀況進(jìn)行全面評(píng)估，在下一次環(huán)境檢測(cè)循環(huán)過(guò)程中加強(qiáng)檢測(cè)容易出現(xiàn)病 原體的環(huán)境點(diǎn)，達(dá)到持續(xù)改進(jìn)的目的。檢測(cè)頻率：每月兩次，每次每個(gè)區(qū)域至少選取5個(gè)檢測(cè)點(diǎn)，分別進(jìn)行檢測(cè)v1.0可編輯可修改環(huán)境李斯特菌的檢測(cè)方法（3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測(cè)試片）用涂抹棒，海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白陳水，將樣本與緩沖蛋白陳混合1分鐘，將樣品置于室溫（ 20-30C） 1小時(shí)，最久不超過(guò)小時(shí)，以修復(fù)損傷的李斯特菌。將測(cè)試片放在平坦處，掀起上層膜。用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產(chǎn)生氣泡。輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上，不要壓，扭轉(zhuǎn)或者滑動(dòng)壓板。提起壓板等至少十 分鐘，以使膠體凝固。將測(cè)試片透明面朝上，可疊放至十片，在 37C ± 1