1、植植 保保 研研 究究 技技 術(shù)術(shù)主講教師:吳 彩 蘭一、植保研究技術(shù)教學(xué)內(nèi)容o第一部分 植病研究前的準(zhǔn)備o第二部分 真菌病害研究技術(shù)o第三部分 細(xì)菌病害研究技術(shù)o第四部分 病毒病害研究技術(shù)o第五部分 線蟲病害研究技術(shù)o第六部分 資料的收集和數(shù)據(jù)的處理 課程總學(xué)時24，其中理論授課10學(xué)時，實驗14學(xué)時n病害調(diào)查方法n標(biāo)本采集、制作方法n培養(yǎng)基制作、滅菌方法、n（徒手、石蠟）玻片制作和顯微鏡檢測、n病原菌分離培養(yǎng)方法n真菌、細(xì)菌孢子記數(shù)法、測量法n病原物接種方法、柯赫氏證病法血清學(xué)技術(shù)n文獻(xiàn)檢索n數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析法、圖表制作法、論文寫作技巧等。實驗內(nèi)容包括：二、教學(xué)目的o植病研究法是一門著重說明原

2、理，然后介紹一些具體方法的課程，也可以說是一本植病研究者完全的“工作手冊”。通過該課程的學(xué)習(xí)，掌握植物病害研究過程中的一些基本方法和技巧，其以培養(yǎng)學(xué)生的實踐能力為本位，與理論教學(xué)相互配合，使所學(xué)的專業(yè)知識進(jìn)一步系統(tǒng)化，融會貫通。學(xué)會如何解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中遇到的實際問題。 三、 教學(xué)要求:o1熟悉植物病害的基本調(diào)查方法。o2了解植物病害標(biāo)本制作及保存的基本技術(shù)。o3掌握植物病原物（真菌、細(xì)菌、線蟲等）分離、培養(yǎng)的基本原理及技術(shù)。o4掌握資料的收集和數(shù)據(jù)處理的方法四、考試內(nèi)容:o選題范圍：（可靈活掌握）選題范圍：（可靈活掌握）o假如你在田間發(fā)現(xiàn)了一種危害嚴(yán)重的細(xì)菌性病害，為詳細(xì)搞清引起該病害的病原種群

3、，請你寫出一份研究該病的具體實施方案。o請你敘述真菌病害、細(xì)菌病害和病毒病害三者在研究過程的中的相似和不同處。至少通過列舉3例加以詳細(xì)說明。o如何準(zhǔn)確診斷一種植物病害，你能設(shè)計出幾種好辦法，請詳細(xì)列舉。o假如你在田間發(fā)現(xiàn)了一種危害嚴(yán)重的真菌性病害，為了能準(zhǔn)確診斷該病，請你寫出一份研究該病的詳細(xì)實施方案。o請寫一份對某種病毒病的研究具體方案。 五、考試方式：五、考試方式：o考試成績由論文成績和實驗、平時成績構(gòu)成。其中論文成績占40%，實驗、平時成績60%。o要求論文頁面整齊、字跡清晰；字?jǐn)?shù)不得少于3000字。論文條理清楚，方法得當(dāng)，要有較強的邏輯性，同時應(yīng)理論結(jié)合實例答題，忌廢話連篇；涉及文獻(xiàn)應(yīng)

4、注釋。數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，分析合理。完成教學(xué)的保證（師生的合作與努力）o注意課堂紀(jì)律和實驗室紀(jì)律o認(rèn)真聽講，做好筆記o隨時提問，以求隨學(xué)隨吸收、消化o認(rèn)真實驗，注意實踐教學(xué)o主動涉獵相關(guān)文獻(xiàn)。如何學(xué)好這門課：o建立興趣、自信、勤奮、健康o學(xué)好其他相關(guān)課程：普病第一章 植物病理學(xué)研究的計劃o 植物病理學(xué)的主要內(nèi)容有癥狀學(xué)，病因?qū)W，診斷學(xué)，病原物的致病性和致病力的分化，寄主植物抗病性，植物群體發(fā)病的流行學(xué)分析，植物個體發(fā)病分析的植物病理生理學(xué)，植物病害的控制以及較近發(fā)展的分了植物病期學(xué)等方而。o 癥狀學(xué)主要是描述植物病害的外部癥狀，典型的和非典型癥狀，有些病害還有內(nèi)部癥狀如有些植物病毒病的內(nèi)部癥狀、癥狀對于

5、病害的識別和初步診斷是很有意義的。o病因?qū)W主要是研究病害發(fā)生的原因。植物侵染性病害發(fā)生的原因是由病原物，寄主植物和環(huán)境條件三方面因素決定的，即所謂病害三角。病害是否發(fā)生和發(fā)生的輕重，決定于上述三方面的因素，因此一種病害要從這三方面的因素的分析作出診斷。至于病原物的鑒定只是診斷的一個方面，即所謂“狹意的診斷”。o根據(jù)以上對植物病理學(xué)研究各方面的簡短介紹?？梢赃M(jìn)一步探討。研究計劃，也就是研究什么，如何研究和何時結(jié)束。有人用“W”起頭的三句話來表示。即：What to do ? Which way to go? When to stop? 也是同樣的意思。研究什么是最重要的問題，應(yīng)該慎重考慮確定。o

6、當(dāng)前和當(dāng)?shù)氐纳a(chǎn)上的重要問題，應(yīng)該是研究的主要對象。當(dāng)前的病害應(yīng)該是包括當(dāng)?shù)匾呀?jīng)大量發(fā)生的和當(dāng)前只是少量發(fā)生的而可能繼續(xù)擴(kuò)大的危險性病害。當(dāng)?shù)氐姆秶纱罂尚?。地區(qū)、省、大區(qū)到全國，都可屬于當(dāng)?shù)氐姆秶?。植物病理學(xué)本身是基礎(chǔ)學(xué)科，但它研究中得到的成果，主要是為病害的控制提供信息。因此，解決與生產(chǎn)中有關(guān)的問題將是植物病理學(xué)研究的主要內(nèi)容。o研究途徑是指如何進(jìn)行研究，則不外乎到生產(chǎn)第一線的調(diào)查研究和室內(nèi)研究，兩者相輔相成。生產(chǎn)第一線的試驗和調(diào)查研究，為室內(nèi)研究提供課題和材料室內(nèi)研究的結(jié)果也得到生產(chǎn)第一線驗證。很難設(shè)想沒有生產(chǎn)第一線提供的材料，可以在室內(nèi)進(jìn)行有價值的工作。設(shè)備和經(jīng)費也是要考慮的問題。o研

7、究進(jìn)展到一定的程度，基本達(dá)到預(yù)期目的，可及時整理和總結(jié)。對事物的認(rèn)識由淺入深，由表及里的過程，不可能一次完成，從階段性總結(jié)就可以分析哪些問題已經(jīng)解決，哪些還有不妥之處，哪些還需要改進(jìn)和進(jìn)一步研究。總結(jié)中發(fā)現(xiàn)已經(jīng)完成的部分，應(yīng)及時報道和發(fā)表。同時將原始的試驗記錄、調(diào)查材料、圖片等材料整理成冊，作為技術(shù)檔案保存，便于本人和后人查閱。第二章 植物病害文獻(xiàn)o研究一種病害或者其中某一方面的問題，收集國內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)和資料，了解這方面工作的基礎(chǔ)和進(jìn)展，可以作為今后工作的參考和避免不必要的重復(fù)。文獻(xiàn)是以往工作的總結(jié)，對于我們來說是間接知識。但是一切工作都要自己做過是不可能的，除去強調(diào)親自實踐的重要性外，也要善

8、于吸取前人和別人的實踐經(jīng)驗。當(dāng)然，文獻(xiàn)僅供“參考”，實際問題的解決，還要結(jié)合具體情況。o 第一節(jié) 文獻(xiàn)收集提綱o 系統(tǒng)地收集文獻(xiàn)，可以節(jié)省時間，又不至于遺漏重要的著作。事前可以先訂一個收集提綱，如：病名、寄主、歷史、分布、經(jīng)濟(jì)上的重要性、癥狀、病原物、侵染過程、病害循環(huán)、生態(tài)關(guān)系、寄主的抗病性、病害的控制。o第二節(jié) 文獻(xiàn)的來源o文獻(xiàn)的收集，一般是以查閱“文獻(xiàn)摘要”著手。o 第三節(jié) 文獻(xiàn)的記載第三章 植物病害的調(diào)查o植物病害的分布和為害、發(fā)生時期和癥狀的變化，以及栽培和環(huán)境條件對植物病害發(fā)生的影響，品種在生產(chǎn)中的表現(xiàn)，防治效果等，都要通過調(diào)查才能掌握。o無論是哪一種調(diào)查，目的確定后，所用的方式和

9、方法要符合調(diào)查的要求。因此調(diào)查前要作充分的準(zhǔn)備，調(diào)查后對掌握的材料要分析研究。許多問題不是通過一次調(diào)查就能作出結(jié)論的。調(diào)查工作經(jīng)常會發(fā)生以下這些情況：沒有代表性，有些調(diào)查工作是地點沒有選好，調(diào)查結(jié)果不能反映當(dāng)?shù)氐恼鎸嵡闆r；資料不完全，事前沒有具體規(guī)定所要收集的資料，事后發(fā)現(xiàn)已經(jīng)太遲；發(fā)病程度記載不一致，是最常發(fā)生的問題，以致各方面的資料不能分析和比較；損失估計錯誤，這方面可發(fā)生的偏差更大，有的是由于估計沒有根據(jù)，有的是由于主觀片面將損失估計過高。第一節(jié) 調(diào)查的類別o病害調(diào)查有一般調(diào)查、重點調(diào)查和調(diào)查研究，它們之間的界限不是絕對的，區(qū)分的意義在于明確調(diào)查目的和采取的方法。1.一般調(diào)查 當(dāng)一個地區(qū)

10、有關(guān)病害發(fā)生情況的資料很少，可先進(jìn)行一般調(diào)查。一般調(diào)查的面要廣，并且要有代表性。調(diào)查的病害種類很多，對發(fā)病率的計算并不要求十分精確。植物檢疫性病害調(diào)查的性質(zhì)與其相似，但目標(biāo)更加明確，任務(wù)是了解這些病害是否發(fā)生和發(fā)生的地區(qū)。 對一般發(fā)病情況的調(diào)查，為了節(jié)約人力和物力，調(diào)查次數(shù)可以少一些。如小麥病害調(diào)查的適當(dāng)時期，葉枯病是在抽穗前，條銹病是在抽穗期，葉銹病可以遲一些，稈銹病、赤霉病、腥黑穗病和線蟲病等可以遲到完熟期。如果一次要調(diào)查幾種作物或幾種病害的發(fā)生情況，可以選一個比較適中的時期。 一般性病害調(diào)查，主要是了解病害的分布和發(fā)病程度。o大麥病害調(diào)查記載o調(diào)查地點調(diào)查日期 調(diào)查人2.重點調(diào)查 經(jīng)過一

11、般調(diào)查發(fā)現(xiàn)的重要病害，可作為重點調(diào)查的對象，深入了解它的分布、發(fā)病率、損失、環(huán)境影響和防治效果等。重點調(diào)查的次數(shù)要多一些，發(fā)病率的計算也要求比較準(zhǔn)確。比較深入的重點調(diào)查，可以參考“作物病害調(diào)查記載”方式。第二節(jié) 發(fā)病程度 發(fā)病程度包括發(fā)病率和嚴(yán)重度，發(fā)病率一般是指發(fā)病田塊、植株或器官等發(fā)病的百分率，而嚴(yán)重度是指田塊植株或器官等的受害程度。 1記載方法 病害的種類很多，為害的情況不一，發(fā)病程度的記載方法比較復(fù)雜。以下幾點可供選擇和設(shè)計時參考：要簡單明了而相當(dāng)準(zhǔn)確，只求精確而過于復(fù)雜是不適用的，并且有時是不必要的；要客觀和具體，使各人在不同的地點和時期，用該方法記載得到的結(jié)果，可以相互比較；一種病

12、害為害的方式可以是多方面的，要兼顧到各種為害方式；發(fā)病率固然不能表示損失的大小，但是能指出其間一定的關(guān)系最好。 （1 1）直接計數(shù)法）直接計數(shù)法 這是比較簡單的方法，就是計算發(fā)病田塊、植株或器這是比較簡單的方法，就是計算發(fā)病田塊、植株或器官的數(shù)目，從調(diào)查的總數(shù)，求得發(fā)病的百分率。直接計官的數(shù)目，從調(diào)查的總數(shù)，求得發(fā)病的百分率。直接計數(shù)法的優(yōu)點是根據(jù)發(fā)病或不發(fā)病計數(shù)，有明確的標(biāo)準(zhǔn)，數(shù)法的優(yōu)點是根據(jù)發(fā)病或不發(fā)病計數(shù)，有明確的標(biāo)準(zhǔn)，記載比較一致；缺點是不能反映受害的嚴(yán)重度，因此只記載比較一致；缺點是不能反映受害的嚴(yán)重度，因此只適用于植株或器官受害程度大致相仿的病害適用于植株或器官受害程度大致相仿的病

13、害 例如，棉花枯萎病的記載，可以數(shù)田間的發(fā)病株數(shù)，例如，棉花枯萎病的記載，可以數(shù)田間的發(fā)病株數(shù)，求得發(fā)病的百分率，由于病株發(fā)病輕重的程度不同，比求得發(fā)病的百分率，由于病株發(fā)病輕重的程度不同，比較精確的調(diào)查一般還是采取分級計數(shù)的方法較精確的調(diào)查一般還是采取分級計數(shù)的方法 （2）分級計數(shù)法 病害發(fā)生的輕重，對植物的影響不同。直接計數(shù)就不能反映發(fā)病程度的差異，要用分級以后再計數(shù)的方法。 分級的標(biāo)準(zhǔn)要明確和具體，要大家都能了解。有些分級法，如分為“輕”、“重”、“很重”，或者用“+”、“+”、“+”、“+-+”等符號表示輕重，而不加以說明是沒有意義的。分級標(biāo)準(zhǔn)可用文字、繪圖或照相等方法表明。根據(jù)病害的

14、性質(zhì)，可以按葉片、果實、植株或田塊分級。以下列舉幾個典型，說明分級標(biāo)準(zhǔn)的用法。 1 1 分級用文字?jǐn)⑹鰹踱徥硗硪卟“l(fā)病率的一種記載標(biāo)準(zhǔn)，是按分級用文字?jǐn)⑹鰹踱徥硗硪卟“l(fā)病率的一種記載標(biāo)準(zhǔn)，是按田塊的發(fā)病率分為田塊的發(fā)病率分為9 9級。發(fā)病率是指葉片綠色部分面積減少（破壞）級。發(fā)病率是指葉片綠色部分面積減少（破壞）的百分率（表的百分率（表3-13-1）。）。 調(diào)查時，記載每級的發(fā)病田塊數(shù)，計算田塊的平均發(fā)病率。文字調(diào)查時，記載每級的發(fā)病田塊數(shù)，計算田塊的平均發(fā)病率。文字?jǐn)⑹龅臉?biāo)準(zhǔn)，如能配合有照相或繪圖，則更加清楚。敘述的標(biāo)準(zhǔn)，如能配合有照相或繪圖，則更加清楚。2 分級用圖或照相表示 這標(biāo)準(zhǔn)用于麥

15、類稈銹病的記載，比較簡單而明確，所以被廣泛采用。調(diào)查時，在田間隨機采集一定數(shù)目的麥葉，分別和標(biāo)準(zhǔn)對比，決定各個葉片的發(fā)病率，然后再求得平均數(shù)。 分級計數(shù)記載，如每一級都是用百分率表示的，很容易計算它的平均白分級計數(shù)記載，如每一級都是用百分率表示的，很容易計算它的平均白分率。例如麥感染銹病后，五張葉片的發(fā)病率，按照標(biāo)準(zhǔn)記載是分率。例如麥感染銹病后，五張葉片的發(fā)病率，按照標(biāo)準(zhǔn)記載是100%100%，55%55%，65%65%，40%40%和和25%25%，均發(fā)病率就是（，均發(fā)病率就是（100+65+65+40+25100+65+65+40+25）% %5 55959。 分級計數(shù)法的級別，有的不是根

16、據(jù)百分率分級的，得到的結(jié)果是每一級分級計數(shù)法的級別，有的不是根據(jù)百分率分級的，得到的結(jié)果是每一級中有多少個體。針對這種情況，往往是計算感染指數(shù)來表示發(fā)病程度，中有多少個體。針對這種情況，往往是計算感染指數(shù)來表示發(fā)病程度，即每一級用一代表數(shù)值，然后按以下公式計算：即每一級用一代表數(shù)值，然后按以下公式計算：其值在其值在0100之間之間（3 3）感染指數(shù)）感染指數(shù) 例如，番茄早疫病例如，番茄早疫病( (Alternaria solaniAlternaria solani) )的病株，可根的病株，可根據(jù)發(fā)病程度分為五級，每一級用數(shù)值代表據(jù)發(fā)病程度分為五級，每一級用數(shù)值代表( (表表3-2)3-2)。

17、發(fā)病最重的感染指數(shù)是發(fā)病最重的感染指數(shù)是100100，完全無病是，完全無病是0 0，所以這數(shù)，所以這數(shù)值就能表示發(fā)病的輕重。值就能表示發(fā)病的輕重。 感染指數(shù)是將發(fā)病率和嚴(yán)重度兩者合在一起，用一個數(shù)值來代表感染指數(shù)是將發(fā)病率和嚴(yán)重度兩者合在一起，用一個數(shù)值來代表發(fā)病程度，對調(diào)查和實驗結(jié)果的分析是有利的。在比較防治效果發(fā)病程度，對調(diào)查和實驗結(jié)果的分析是有利的。在比較防治效果和研究環(huán)境條件對病害的影響等方面，常常采用這一計算方法。和研究環(huán)境條件對病害的影響等方面，常常采用這一計算方法。 此外，感染指數(shù)含有發(fā)生量和嚴(yán)重度兩方面的因素，有時看不出此外，感染指數(shù)含有發(fā)生量和嚴(yán)重度兩方面的因素，有時看不出是

18、發(fā)生量不同，還是嚴(yán)重度不同。例如，可以有兩種不同的情況，是發(fā)生量不同，還是嚴(yán)重度不同。例如，可以有兩種不同的情況，一種情況是發(fā)病個體雖少，但是發(fā)病很重；另一種情況是發(fā)病個一種情況是發(fā)病個體雖少，但是發(fā)病很重；另一種情況是發(fā)病個體很多，但是發(fā)病很輕。它們的感染指數(shù)可以相同，但是病害發(fā)體很多，但是發(fā)病很輕。它們的感染指數(shù)可以相同，但是病害發(fā)生的情況顯然不同。生的情況顯然不同。 總之，感染指數(shù)是表示發(fā)病程度的一種方式。總之，感染指數(shù)是表示發(fā)病程度的一種方式。2.2.取樣方法取樣方法 病害調(diào)查的取樣方法，影響著結(jié)果的準(zhǔn)確性。各種病害的取樣方法不同，同時還要看調(diào)查的性質(zhì)和要求準(zhǔn)確的程度，原則是可靠而又可

19、行。 （1）樣本數(shù)目 樣本的數(shù)目要看病害的性質(zhì)和環(huán)境條件?？諝鈧鞑ザ植季鶆虻牟『θ琨滎愪P病等，樣本數(shù)目可以少一些。土壤傳染的病害樣本要多，如地形、土壤和耕作條件的差別較大，取樣更要多一些。一般的方法是一塊田隨機調(diào)查四五個點，在一個地區(qū)調(diào)查十塊田。取樣不一定要太多，重要的是有代表性。 （2）取樣地點 避免在田邊取樣，田邊植株往往不能代表一般發(fā)病情況，應(yīng)離開田邊五步到十步（田小的可以近些），在四五處隨機取樣，或者從田塊四角兩根交叉線的交叉點和交叉點至每一角的中間四個點，共五個點取樣。植株較大的條播作物如棉花等，可以在田間隨機選若干行進(jìn)行調(diào)查。在一個區(qū)內(nèi)調(diào)查，要隨機選田，避免專門選擇重病田，可規(guī)定

20、每隔一定距離調(diào)查一次。（3 3）樣本類別）樣本類別 樣本可以整株作為計算單位。枝干病害要看發(fā)病情況，主干發(fā)病而影響全株生機的，應(yīng)以植株計算；發(fā)病而不影響全株生機的，可以計算有多少枝干發(fā)病，或者以整株作單位，但分級后計數(shù)。 葉片病害的取樣比較復(fù)雜，大致有以下三種方法：田里隨機采取葉片若干，分別記載，求得平均發(fā)病率；從植株的一定部位采取葉片，以此葉片代表植株的平均發(fā)病率；記載植株上每張葉片（必要時也可采下）的發(fā)病率，求得平均數(shù)。第一種方法比較省時省事，用得最多；第二、三兩種方法只適合于植株葉片較少的作物。（4 4）樣本要小而可靠）樣本要小而可靠 麥類黑粉病的調(diào)查，可以在田間每一點觀察二三百穗或稈，

21、或者麥類黑粉病的調(diào)查，可以在田間每一點觀察二三百穗或稈，或者觀察一定的面積觀察一定的面積(0.45M(0.45M2 2）或行長（）或行長（(1.67m(1.67m左右），求得發(fā)病率。左右），求得發(fā)病率。植株較大的作物，行長和面積要大一些。果實病害要觀察一二百植株較大的作物，行長和面積要大一些。果實病害要觀察一二百個，全株性病害觀察一二百株，葉片病害則由分布情形決定，分個，全株性病害觀察一二百株，葉片病害則由分布情形決定，分布很不均勻的病害，每一樣本要有布很不均勻的病害，每一樣本要有2020張葉片左右。張葉片左右。（5 5）取樣時間）取樣時間 調(diào)查取樣的適當(dāng)時期，一般是在田間發(fā)病最盛期。谷粒病害

22、和果調(diào)查取樣的適當(dāng)時期，一般是在田間發(fā)病最盛期。谷粒病害和果實腐爛病等，可在收獲后取樣。實腐爛病等，可在收獲后取樣。第四章第四章 植物病害和菌類標(biāo)本的采集和制作植物病害和菌類標(biāo)本的采集和制作 第一節(jié)第一節(jié) 標(biāo)本的采集標(biāo)本的采集 病害標(biāo)本采集的用具有標(biāo)本夾、標(biāo)本箱、刀、剪、鋤、鋸、小玻瓶、病害標(biāo)本采集的用具有標(biāo)本夾、標(biāo)本箱、刀、剪、鋤、鋸、小玻瓶、標(biāo)本紙、紙袋、標(biāo)簽和記錄本等。標(biāo)本紙、紙袋、標(biāo)簽和記錄本等。 病害標(biāo)本主要是有病的根、莖、葉和果實等，好的標(biāo)本要有各受害病害標(biāo)本主要是有病的根、莖、葉和果實等，好的標(biāo)本要有各受害部位在不同時期的典型癥狀，真菌病害則上面有子實體更好。寄主的部位在不同時期

23、的典型癥狀，真菌病害則上面有子實體更好。寄主的鑒定很重要，許多病害標(biāo)本，尤其是銹菌和黑粉菌，不知道寄主是很鑒定很重要，許多病害標(biāo)本，尤其是銹菌和黑粉菌，不知道寄主是很難鑒定的。對于不熟悉的寄主，最好能采得花、芽和果實等，有助于難鑒定的。對于不熟悉的寄主，最好能采得花、芽和果實等，有助于鑒定。每種標(biāo)本采集的件數(shù)不能太少，在制作和鑒定過程中常有損壞，鑒定。每種標(biāo)本采集的件數(shù)不能太少，在制作和鑒定過程中常有損壞，多余的標(biāo)本還可以交流。一般口十斑病標(biāo)本，最少采十幾張葉片。多余的標(biāo)本還可以交流。一般口十斑病標(biāo)本，最少采十幾張葉片。 采到的標(biāo)本，如果干燥后容易卷縮的（如稻葉），最好是采到的標(biāo)本，如果干燥后

24、容易卷縮的（如稻葉），最好是隨采隨壓。其他不致?lián)p壞的標(biāo)本，可以暫時放在標(biāo)本箱中，隨采隨壓。其他不致?lián)p壞的標(biāo)本，可以暫時放在標(biāo)本箱中，帶回壓制和整理。敗壞的果實，先用紙分別包裹，然后放在帶回壓制和整理。敗壞的果實，先用紙分別包裹，然后放在標(biāo)本箱中，以免損壞及沾污。黑粉病標(biāo)本，要放在紙袋中標(biāo)本箱中，以免損壞及沾污。黑粉病標(biāo)本，要放在紙袋中或用紙包好，避免飽子混雜而影響鑒定。或用紙包好，避免飽子混雜而影響鑒定。 柔軟肉質(zhì)菌類的采集，用籃或筐，并分別用紙包裹，以免柔軟肉質(zhì)菌類的采集，用籃或筐，并分別用紙包裹，以免損壞和沾污。標(biāo)本務(wù)求完整，有些覃類的基部結(jié)構(gòu)，對鑒定損壞和沾污。標(biāo)本務(wù)求完整，有些覃類的基

25、部結(jié)構(gòu)，對鑒定是很重要的，采集時應(yīng)特別注意。肉質(zhì)覃類不容易保存，采是很重要的，采集時應(yīng)特別注意。肉質(zhì)覃類不容易保存，采到后要當(dāng)天觀察，及時繪成彩色圖，彩色照相更好。到后要當(dāng)天觀察，及時繪成彩色圖，彩色照相更好。 采集要有記載，主要內(nèi)容是寄主名稱、采集日期和地點、采集人姓名、主要發(fā)生情況和必要的生態(tài)因子。覃類多生在林間土面，要記下土壤性質(zhì)和林木種類。菌類標(biāo)本采集記錄的一種形式如下： 菌類采集記錄 地點：日期： 年月 日 產(chǎn)地和環(huán)境 海拔 寄主:通稱學(xué)名 受害部位（根、莖、葉、花等）標(biāo)本性質(zhì) （寄生或腐生）普遍性采集人 采集號數(shù) 定名人標(biāo)本號數(shù)附注： 第二節(jié)第二節(jié) 標(biāo)本的制作標(biāo)本的制作 一般都用干

26、燥法或浸漬法保存，要求是能盡量保持原來的性狀。一般都用干燥法或浸漬法保存，要求是能盡量保持原來的性狀。 1.1.標(biāo)本干燥制作法標(biāo)本干燥制作法 干燥法比較簡單而經(jīng)濟(jì)，標(biāo)本可以長期保存，所以應(yīng)用廣泛。干燥法比較簡單而經(jīng)濟(jì)，標(biāo)本可以長期保存，所以應(yīng)用廣泛。 莖和葉可壓在吸水的標(biāo)本紙中，用標(biāo)本夾夾緊，日曬任其干燥?？汕o和葉可壓在吸水的標(biāo)本紙中，用標(biāo)本夾夾緊，日曬任其干燥。可在在5050的烘箱中放二三天，使它很快干燥。標(biāo)本干燥愈快，愈能保的烘箱中放二三天，使它很快干燥。標(biāo)本干燥愈快，愈能保持原有的色澤。夏季的溫度和濕度高，標(biāo)本容易發(fā)霉變色，標(biāo)本紙持原有的色澤。夏季的溫度和濕度高，標(biāo)本容易發(fā)霉變色，標(biāo)本紙

27、的更換要勤。通常前三四天每天換紙一二次，以后每二三天換一次，的更換要勤。通常前三四天每天換紙一二次，以后每二三天換一次，至完全干燥為止。為了加快干燥，有些標(biāo)本可以夾在吸水紙中用熨至完全干燥為止。為了加快干燥，有些標(biāo)本可以夾在吸水紙中用熨斗燙，使它快速干燥而保持原來的色澤。斗燙，使它快速干燥而保持原來的色澤。 幼嫩多汁的標(biāo)本如花和小苗等，可夾在兩層脫脂棉中壓制，水分幼嫩多汁的標(biāo)本如花和小苗等，可夾在兩層脫脂棉中壓制，水分過高的可在過高的可在30-4530-45之間加溫烘干。之間加溫烘干。2.2.浸漬標(biāo)本制作浸漬標(biāo)本制作 浸漬法多半用于教學(xué)和示范用。浸漬法多半用于教學(xué)和示范用。 腐爛的水果、肉質(zhì)子

28、囊菌和擔(dān)子菌的子實體等浸漬腐爛的水果、肉質(zhì)子囊菌和擔(dān)子菌的子實體等浸漬液種類很多有純防腐的，也有專為保持標(biāo)本原來色澤液種類很多有純防腐的，也有專為保持標(biāo)本原來色澤的。標(biāo)本浸漬保存，占的面積大，保存時間又有限，所的。標(biāo)本浸漬保存，占的面積大，保存時間又有限，所以很少用于保存大量的標(biāo)本。浸漬法多半用于保存教學(xué)以很少用于保存大量的標(biāo)本。浸漬法多半用于保存教學(xué)和示范用的標(biāo)本。和示范用的標(biāo)本。第五章第五章 培養(yǎng)基的制作培養(yǎng)基的制作第一節(jié)第一節(jié) 微生物的營養(yǎng)微生物的營養(yǎng)根據(jù)獲得碳源的方式，微生物可以分為：根據(jù)獲得碳源的方式，微生物可以分為：自養(yǎng)營養(yǎng)自養(yǎng)營養(yǎng) (autotropic)：能利用二氧化碳，不需要

29、有機物質(zhì)作為來源：能利用二氧化碳，不需要有機物質(zhì)作為來源 微生物具有特殊的色素，能夠進(jìn)行光合作用，可以利用光能微生物具有特殊的色素，能夠進(jìn)行光合作用，可以利用光能 將二氧化碳合成含碳素的有機化合物；將二氧化碳合成含碳素的有機化合物； 微生物沒有能營光合作用的特殊色素，不能進(jìn)行光合作用，微生物沒有能營光合作用的特殊色素，不能進(jìn)行光合作用， 是利用其他無機化合物氧化時所產(chǎn)生的能量來合成有機碳是利用其他無機化合物氧化時所產(chǎn)生的能量來合成有機碳 素化合物，如硫細(xì)菌、鐵細(xì)菌和土壤中的硝化細(xì)菌。素化合物，如硫細(xì)菌、鐵細(xì)菌和土壤中的硝化細(xì)菌。寄生微生物：能夠從活的植物組織上獲得養(yǎng)分寄生微生物：能夠從活的植物

30、組織上獲得養(yǎng)分(biotrophic)，腐生微生物：只能利用死的有機質(zhì)腐生微生物：只能利用死的有機質(zhì)(necrotrophic)異養(yǎng)營養(yǎng)異養(yǎng)營養(yǎng) (heterotrophic)：植物病原微生物都是異養(yǎng)營養(yǎng)微生物，植物病原微生物都是異養(yǎng)營養(yǎng)微生物， 異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物 寄生和腐生之間沒有絕對的界限，寄生性的微生物也寄生和腐生之間沒有絕對的界限，寄生性的微生物也有一定的腐生能力，如在植物上寄生的病原菌，大都可有一定的腐生能力，如在植物上寄生的病原菌，大都可以在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)。以在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)。（1)1)碳素來源碳素來源：異養(yǎng)微生物可以利用的有機碳素化合物：異養(yǎng)微生物可以利用的有機碳素化合物

31、很多，以碳水化合物最好，氨基酸和蛋白質(zhì)次之，油脂類很多，以碳水化合物最好，氨基酸和蛋白質(zhì)次之，油脂類較差；較差；碳水化合物中，單糖比多糖好，己糖比戊糖好。碳水化合物中，單糖比多糖好，己糖比戊糖好。 培養(yǎng)微生物一般都是首先試用葡萄糖作為碳源。葡萄糖培養(yǎng)微生物一般都是首先試用葡萄糖作為碳源。葡萄糖雖然不一定是最適當(dāng)?shù)奶荚?，但幾乎所有的微生物都利用雖然不一定是最適當(dāng)?shù)奶荚矗珟缀跛械奈⑸锒祭闷咸烟?。蔗糖也是常用的碳源，效果有時還超過葡萄糖。葡萄糖。蔗糖也是常用的碳源，效果有時還超過葡萄糖。麥芽糖、甘露糖等則較差麥芽糖、甘露糖等則較差 (2)氮素來源：異養(yǎng)微生物對氮素的要求是多樣的。大部分微生物

32、都能利用無機和有機的氮。根據(jù)對不同氮源利用的能力，真菌（細(xì)菌）大致可以分為氣態(tài)氮固定類、硝態(tài)氮類、銨態(tài)氮類和有機氮類。真菌對各種氮源的利用真菌對各種氮源的利用(3)(3)礦物質(zhì)營養(yǎng)礦物質(zhì)營養(yǎng)：除去碳源和氮源外，微生物還需要：除去碳源和氮源外，微生物還需要K K、P P、S S、MgMg等礦物質(zhì)和許多微量元素。微生物需要的礦物質(zhì)常等礦物質(zhì)和許多微量元素。微生物需要的礦物質(zhì)常用硫酸鎂（供給用硫酸鎂（供給MgMg及及S S）磷酸鉀（供給）磷酸鉀（供給K K及及P P），因此這兩種），因此這兩種鹽常用于配制組合培養(yǎng)基。鹽常用于配制組合培養(yǎng)基。生長物質(zhì)與一般營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素的性質(zhì)不同，主要區(qū)別如下生長

33、物質(zhì)與一般營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素的性質(zhì)不同，主要區(qū)別如下 生長物質(zhì)是有機物質(zhì)；生長物質(zhì)是有機物質(zhì)； 微生物需要生長物質(zhì)是由于它喪失了合成這種生長物質(zhì)的能微生物需要生長物質(zhì)是由于它喪失了合成這種生長物質(zhì)的能力力 生長物質(zhì)的用量是很少的，主要起著催化作用；生長物質(zhì)的用量是很少的，主要起著催化作用； 生長物質(zhì)的作用是專化的。生長物質(zhì)的作用是專化的。 微生物需要的生長物質(zhì)有維生素微生物需要的生長物質(zhì)有維生素B1B1、B2B2、生物素、煙酸、泛酸、生物素、煙酸、泛酸吡咯醇、對氨基苯甲酸等，大半都屬于維生素吡咯醇、對氨基苯甲酸等，大半都屬于維生素B B型復(fù)體。型復(fù)體。(4)(4)生長物質(zhì)：生長物質(zhì)：有些微生物

34、即使供給了適當(dāng)?shù)奶荚础⒌春偷V物質(zhì)養(yǎng)料有些微生物即使供給了適當(dāng)?shù)奶荚?、氮源和礦物質(zhì)養(yǎng)料,其他條件也都適宜，有時仍不能生長或不能正常地生長和發(fā)育，就要其他條件也都適宜，有時仍不能生長或不能正常地生長和發(fā)育，就要供給適當(dāng)?shù)纳L物質(zhì)或維生素。這種現(xiàn)象最早在酵母菌上發(fā)現(xiàn)供給適當(dāng)?shù)纳L物質(zhì)或維生素。這種現(xiàn)象最早在酵母菌上發(fā)現(xiàn),以后其以后其他微生物也發(fā)現(xiàn)類似的情況。他微生物也發(fā)現(xiàn)類似的情況。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基的成分和種類培養(yǎng)基的成分和種類根據(jù)配制材料和成分，培養(yǎng)基可以分為三類：根據(jù)配制材料和成分，培養(yǎng)基可以分為三類： 天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：動植物的組織、廄肥、土壤和土壤浸出液等配制成動植物的組織、廄肥

35、、土壤和土壤浸出液等配制成 的培養(yǎng)基。其成分復(fù)雜，幾乎無法完全了解，但是一般微生的培養(yǎng)基。其成分復(fù)雜，幾乎無法完全了解，但是一般微生 物在這種培養(yǎng)基上的生長和發(fā)育都很好。其配制也比較方便物在這種培養(yǎng)基上的生長和發(fā)育都很好。其配制也比較方便, , 所以使用很廣。所以使用很廣。 半組合培養(yǎng)基：半組合培養(yǎng)基：是由成分未知的天然物質(zhì)和成分已知的物質(zhì)配成是由成分未知的天然物質(zhì)和成分已知的物質(zhì)配成, , 如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液中的蔗糖是已知的成分，馬鈴薯則是成如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液中的蔗糖是已知的成分，馬鈴薯則是成 分未知的天然物質(zhì)。馬鈴薯的成分因品種、成熟程度和栽培分未知的天然物質(zhì)。馬鈴薯的成分因品種、成熟程度

36、和栽培 條件而不同，所以每次配成的培養(yǎng)液成分不可能是相同的。條件而不同，所以每次配成的培養(yǎng)液成分不可能是相同的。 組合培養(yǎng)基：組合培養(yǎng)基：是成分和濃度完全已知的培養(yǎng)基，是由成分已知的是成分和濃度完全已知的培養(yǎng)基，是由成分已知的 化學(xué)藥品配成。如化學(xué)藥品配成。如 RichardRichard溶液。瓊膠是成分不固定的天然溶液。瓊膠是成分不固定的天然 物質(zhì)，組合培養(yǎng)液中加入了瓊膠就只能作為半組合培養(yǎng)基。物質(zhì)，組合培養(yǎng)液中加入了瓊膠就只能作為半組合培養(yǎng)基。第三節(jié)第三節(jié) 培養(yǎng)基的理化性狀培養(yǎng)基的理化性狀1 1 固體和液體培養(yǎng)基固體和液體培養(yǎng)基 培養(yǎng)液中加適當(dāng)?shù)哪虅统蔀楣腆w培養(yǎng)基。凝固劑有瓊膠、明培

37、養(yǎng)液中加適當(dāng)?shù)哪虅统蔀楣腆w培養(yǎng)基。凝固劑有瓊膠、明 膠和硅膠，常用的是瓊膠。膠和硅膠，常用的是瓊膠。瓊膠：瓊膠：凝固點較高，含氮量低，凝固后可以再熔化，使用比較方便。瓊凝固點較高，含氮量低，凝固后可以再熔化，使用比較方便。瓊 膠含氮量低，只有極個別的微生物能分解。膠含氮量低，只有極個別的微生物能分解。明膠：熔點很低，溫度稍高即熔化，不適于較高溫度下培養(yǎng)的微生物。明膠：熔點很低，溫度稍高即熔化，不適于較高溫度下培養(yǎng)的微生物。 明膠含氮量很高，超過瓊膠幾十倍，許多微生物都能利用和分解明膠含氮量很高，超過瓊膠幾十倍，許多微生物都能利用和分解 一般只用于配制鑒別性培養(yǎng)基，測定一種植物病原細(xì)菌液化

38、明膠一般只用于配制鑒別性培養(yǎng)基，測定一種植物病原細(xì)菌液化明膠 的能力。的能力。硅膠：它是無機化合物，不含微生物可利用的物質(zhì)，所以硅膠培養(yǎng)基用硅膠：它是無機化合物，不含微生物可利用的物質(zhì)，所以硅膠培養(yǎng)基用 于特殊營養(yǎng)生理的研究，主要用于分離和培養(yǎng)對有機物質(zhì)敏感的于特殊營養(yǎng)生理的研究，主要用于分離和培養(yǎng)對有機物質(zhì)敏感的 自養(yǎng)性細(xì)菌如硝化細(xì)菌等。自養(yǎng)性細(xì)菌如硝化細(xì)菌等。第四節(jié) 常用培養(yǎng)基的配制1 1馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊膠培養(yǎng)基( (簡稱簡稱PDA)PDA) 這是使用最多的培養(yǎng)基，主要用于真菌的分離和培養(yǎng)這是使用最多的培養(yǎng)基，主要用于真菌的分離和培養(yǎng)馬鈴薯馬鈴薯 200g 葡萄糖葡萄糖

39、(或蔗糖或蔗糖) 1020g瓊膠瓊膠 17-20g 水水 1000ml 將洗凈后去皮的馬鈴薯切碎，加水將洗凈后去皮的馬鈴薯切碎，加水1000ml煮沸半小時，用紗布煮沸半小時，用紗布濾去馬鈴薯，加水補足濾去馬鈴薯，加水補足1000ml，然后加糖和瓊膠，加熱使瓊膠完全，然后加糖和瓊膠，加熱使瓊膠完全熔化后，趁熱用紗布過濾。而后分裝試管，加棉花塞后滅菌。作平熔化后，趁熱用紗布過濾。而后分裝試管，加棉花塞后滅菌。作平板培養(yǎng)的每管約板培養(yǎng)的每管約10ml，作斜面培養(yǎng)的則每管約，作斜面培養(yǎng)的則每管約5ml。還可以分裝在三。還可以分裝在三角瓶中滅菌。角瓶中滅菌。 培養(yǎng)基中的葡萄糖，改用蔗糖的效果并不差，不加

40、糖分則生長較培養(yǎng)基中的葡萄糖，改用蔗糖的效果并不差，不加糖分則生長較差。培養(yǎng)基中也可以不加瓊膠，配成培養(yǎng)液使用。差。培養(yǎng)基中也可以不加瓊膠，配成培養(yǎng)液使用。PDA往往略帶酸性。培養(yǎng)真菌就無需調(diào)節(jié)酸度，培養(yǎng)細(xì)菌則調(diào)節(jié)到中往往略帶酸性。培養(yǎng)真菌就無需調(diào)節(jié)酸度，培養(yǎng)細(xì)菌則調(diào)節(jié)到中性反應(yīng)。酸度可以在加瓊膠熔化前、后調(diào)節(jié)均瓊膠對酸度的影響不大性反應(yīng)。酸度可以在加瓊膠熔化前、后調(diào)節(jié)均瓊膠對酸度的影響不大2. 2. 肉汁凍培養(yǎng)基肉汁凍培養(yǎng)基(NA):(NA):主要用于細(xì)菌的分離和培養(yǎng)。主要用于細(xì)菌的分離和培養(yǎng)。 牛肉浸膏牛肉浸膏 3g 3g 蛋白胨蛋白胨 5 510g10g 水水 1000ml pH7.0,

41、1000ml pH7.0,肉汁凍培養(yǎng)液，每肉汁凍培養(yǎng)液，每1000ml1000ml加瓊膠加瓊膠17-20g17-20g，即配成固體培養(yǎng)基。，即配成固體培養(yǎng)基。肉汁凍培養(yǎng)液中蛋白胨的用量是每肉汁凍培養(yǎng)液中蛋白胨的用量是每1000ml1000ml加加10g10g，也可以減少到，也可以減少到5g5g減少用量，緩沖容雖有所降低，但并不影響一般微生物的生長。減少用量，緩沖容雖有所降低，但并不影響一般微生物的生長。無論是用新鮮牛肉或牛肉浸膏配制肉汁凍培養(yǎng)基，不一定要加糖無論是用新鮮牛肉或牛肉浸膏配制肉汁凍培養(yǎng)基，不一定要加糖 培養(yǎng)植物病原細(xì)菌，加糖有利于它們的生長，一般可加葡萄糖或培養(yǎng)植物病原細(xì)菌，加糖有

42、利于它們的生長，一般可加葡萄糖或蔗糖蔗糖10g10g。蛋白胨和牛肉浸膏是配制培養(yǎng)基的重要材料。酵母膏有時用來代蛋白胨和牛肉浸膏是配制培養(yǎng)基的重要材料。酵母膏有時用來代替牛肉浸膏，并且還在其他培養(yǎng)基中使用。替牛肉浸膏，并且還在其他培養(yǎng)基中使用。3燕麥片瓊膠培養(yǎng)基培養(yǎng)真菌(和放線菌)，可以促使某些真菌形成孢子和子實體，也適用于保存腐霉屬(Pythium)和疫霉屬(Phytophthora)真菌的菌種。 燕麥片 30g 瓊膠 17-20g 水 1000ml燕麥片加水1000ml，在沸水浴上加熱1h，紗布過濾后加水補足1000ml，加瓊膠熔化后分裝滅菌。瓊膠用量增加到30g，培養(yǎng)基不容易干燥，可用于較

43、長時期的培養(yǎng)，對促進(jìn)孢子的產(chǎn)生是有利的。第五節(jié)第五節(jié) 培養(yǎng)基的保藏培養(yǎng)基的保藏配成的培養(yǎng)基應(yīng)該配成的培養(yǎng)基應(yīng)該注明培養(yǎng)基的種類和配制的日期注明培養(yǎng)基的種類和配制的日期。培養(yǎng)基在貯存的過程中會喪失水分，貯放時間太長還可能發(fā)生其他培養(yǎng)基在貯存的過程中會喪失水分，貯放時間太長還可能發(fā)生其他變化。培養(yǎng)基在冰箱中變化。培養(yǎng)基在冰箱中(2(24)4)保存的時間可以長一些，由于條件的保存的時間可以長一些，由于條件的限制，很少是這樣做的。限制，很少是這樣做的。一般都是放在清潔的玻璃櫥內(nèi)，盡量避免灰塵的沾染。培養(yǎng)基保存一般都是放在清潔的玻璃櫥內(nèi)，盡量避免灰塵的沾染。培養(yǎng)基保存的時間的長短，很難作明確的規(guī)定，一般

44、的時間的長短，很難作明確的規(guī)定，一般以不超過以不超過6 6個月為宜個月為宜。最合理的辦法還是根據(jù)需要的量配制最合理的辦法還是根據(jù)需要的量配制，不然多余的培養(yǎng)基不但貯存，不然多余的培養(yǎng)基不但貯存困難，而且培養(yǎng)基還可能發(fā)生一些有害的變化。困難，而且培養(yǎng)基還可能發(fā)生一些有害的變化。根據(jù)根據(jù)植物病原細(xì)菌分離的經(jīng)驗，最好是用新鮮配制的培養(yǎng)基植物病原細(xì)菌分離的經(jīng)驗，最好是用新鮮配制的培養(yǎng)基。第六節(jié)第六節(jié) 選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 當(dāng)有大量其他微生物混雜的情況下，要分離某種類型的或某種特定的微生物，雖然可以用稀釋分離法使它們分開來，但有時還很難得到預(yù)期的效果；有必要采用對所要分離的微生物有利，而對其他混雜的

45、微生物生長不利的選擇性培養(yǎng)基。根據(jù)?；潭龋x擇性培養(yǎng)基分為 一般選擇性培養(yǎng)基 特殊選擇性培養(yǎng)基1 1一般選擇性培養(yǎng)基一般選擇性培養(yǎng)基 只對微生物大類，如對真菌、細(xì)菌或者革蘭氏染色反應(yīng)不同只對微生物大類，如對真菌、細(xì)菌或者革蘭氏染色反應(yīng)不同的細(xì)菌有選擇性的細(xì)菌有選擇性。而不是對某些特定的微生物有選擇性，一般選擇。而不是對某些特定的微生物有選擇性，一般選擇性培養(yǎng)基的配制，多半是性培養(yǎng)基的配制，多半是采取調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸度和加適當(dāng)?shù)囊种菩圆扇≌{(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸度和加適當(dāng)?shù)囊种菩晕镔|(zhì)物質(zhì)等方法。等方法。 在在分離真菌時分離真菌時，在瓊膠培養(yǎng)基中，在瓊膠培養(yǎng)基中加乳酸或孟加拉紅加乳酸或孟加拉紅使它的反應(yīng)呈使

46、它的反應(yīng)呈酸性以抑制細(xì)菌生長，這就是一種比較簡單的一般選擇性培養(yǎng)基。酸性以抑制細(xì)菌生長，這就是一種比較簡單的一般選擇性培養(yǎng)基。 為了為了抑制真菌和革蘭氏反應(yīng)陽性細(xì)菌抑制真菌和革蘭氏反應(yīng)陽性細(xì)菌的生長，培養(yǎng)基中可以加的生長，培養(yǎng)基中可以加結(jié)結(jié)晶紫和孔雀石青晶紫和孔雀石青等染料；等染料； 為了為了抑制某些革蘭氏反應(yīng)陰性細(xì)菌抑制某些革蘭氏反應(yīng)陰性細(xì)菌的生長，則的生長，則加牛膽酸鈉和重鉻加牛膽酸鈉和重鉻酸鉀酸鉀等。等。2 2特殊選擇性培養(yǎng)基特殊選擇性培養(yǎng)基是為分離某些或某一種特定的微生物用的培養(yǎng)基是為分離某些或某一種特定的微生物用的培養(yǎng)基特殊選擇性培養(yǎng)基的設(shè)計需考慮以下幾方面：特殊選擇性培養(yǎng)基的設(shè)計需

47、考慮以下幾方面：改變碳源和氮源。改變碳源和氮源。選用特定微生物所能利用選用特定微生物所能利用( (不一定最好的不一定最好的) )，而其，而其 他微生物不能利用的碳源或氮源他微生物不能利用的碳源或氮源。如分離豆科植物根瘤菌往往以甘。如分離豆科植物根瘤菌往往以甘 露蜜醇作碳源，分離土壤自生固氮菌則培養(yǎng)基中不加任何氮源；露蜜醇作碳源，分離土壤自生固氮菌則培養(yǎng)基中不加任何氮源；利用抗菌素和其他抑制性物質(zhì)。由于抗菌素的發(fā)展，目前已經(jīng)有許利用抗菌素和其他抑制性物質(zhì)。由于抗菌素的發(fā)展，目前已經(jīng)有許 多作用較?；目咕?，抗菌素的單用或混用已經(jīng)廣泛用于配制選多作用較專化的抗菌素，抗菌素的單用或混用已經(jīng)廣泛用于

48、配制選 擇性培養(yǎng)基；擇性培養(yǎng)基；利用微生物對化學(xué)物質(zhì)濃度的耐性，如對食鹽溶液濃度的抗性等；利用微生物對化學(xué)物質(zhì)濃度的耐性，如對食鹽溶液濃度的抗性等；改變培養(yǎng)基的表面張力和氧化還原性狀；改變培養(yǎng)基的表面張力和氧化還原性狀；培養(yǎng)基中加染料或指示劑等，使菌落和培養(yǎng)基表現(xiàn)特定的顏色。培養(yǎng)基中加染料或指示劑等，使菌落和培養(yǎng)基表現(xiàn)特定的顏色。以以玉米蔫萎病細(xì)菌玉米蔫萎病細(xì)菌(Erwinia stewartii)的分離的分離為例，說明一種選擇為例，說明一種選擇性培養(yǎng)基的設(shè)計過程和各種成分的作用性培養(yǎng)基的設(shè)計過程和各種成分的作用甘油 30ml (對其他微生物不是良好的碳源)檸檬酸鐵銨 10.0g (氮源，增加

49、氧化還原電位)氯化鈉 15.0g (耐鹽的能力)牛磺膽酸鈉 3.0g (降低表面張力， 抑制部分革蘭氏反應(yīng)陽性和陰性的細(xì)菌)氯化鈣 0.0lg (礦物質(zhì)營養(yǎng))硫酸鎂0.1g(礦物質(zhì)營養(yǎng))瓊膠 17.0g蒸餾水 加到最后的容量是1000ml 這種培養(yǎng)基有良好的選擇性，能夠用來從土壤中分離得到玉米這種培養(yǎng)基有良好的選擇性，能夠用來從土壤中分離得到玉米蔫萎病細(xì)菌。蔫萎病細(xì)菌。 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn), ,在上述培養(yǎng)基中再加制霉素在上述培養(yǎng)基中再加制霉素(200(200單位單位m1)m1)或或放線菌酮放線菌酮(20(20單位單位m1)m1)，可以抑制真菌的生長。，可以抑制真菌的生長。 如在培養(yǎng)基

50、中再加如在培養(yǎng)基中再加0.02%0.02%的苯胺黑，玉米蔫萎病細(xì)菌吸收這種黑的苯胺黑，玉米蔫萎病細(xì)菌吸收這種黑色素，菌落呈紫黑色?？梢耘c其他雜菌區(qū)別色素，菌落呈紫黑色?？梢耘c其他雜菌區(qū)別培養(yǎng)基酸度調(diào)節(jié)到培養(yǎng)基酸度調(diào)節(jié)到pH7第七章 滅 菌微生物學(xué)上，滅菌和消毒的含義是不同的。微生物學(xué)上，滅菌和消毒的含義是不同的。滅菌：滅菌：是指用物理或化學(xué)的方法，是指用物理或化學(xué)的方法，完全除去或者殺死完全除去或者殺死器物表面和內(nèi)器物表面和內(nèi) 部的部的一切微生物一切微生物。消毒：消毒：是指是指消滅或減少病原微生物以防治侵染消滅或減少病原微生物以防治侵染，而不是消滅所有的，而不是消滅所有的 微生物。消毒還有其它

51、作用，如進(jìn)行分離工作時，植物組織微生物。消毒還有其它作用，如進(jìn)行分離工作時，植物組織 往往要經(jīng)過表面消毒，目的是消滅組織表面的雜菌而保存組往往要經(jīng)過表面消毒，目的是消滅組織表面的雜菌而保存組 織內(nèi)的病原菌。織內(nèi)的病原菌。第一節(jié)：滅菌的原理和方法第一節(jié)：滅菌的原理和方法滅菌方法熱力滅菌過濾滅菌化學(xué)滅菌輻射滅菌熱力滅菌：熱力滅菌： 干熱滅菌：溫度一般在160180間，不宜超過180，常用的溫度 是165。其應(yīng)用很有限，高溫處理易于破損的和含水的 物品，都不能干熱滅菌。 移殖環(huán)接菌、烘箱加熱等。 濕熱滅菌：主要指高壓蒸汽滅菌，其效率比干熱滅菌高。例如，培養(yǎng) 皿用干熱滅菌要在160處理1h，濕熱滅菌則

52、只要在121 處理20min。 濕熱滅菌的作用是濕熱的滲透力較強，易使蛋白質(zhì)的凝固。加壓的作用是提高蒸汽的溫度，滅菌器內(nèi)的壓力增高, 水的沸點和蒸汽的溫度也增高。滅菌時的排氣非常重要，假如空氣沒有完全排除，壓力表上指出的數(shù)值包括空氣的壓力。為了避免由于空氣排除不完全而出現(xiàn)差錯，保證完全滅菌，有的高壓滅菌器上還有溫度計，可以看到達(dá)到要求的溫度。高壓滅菌器的用法和注意事項如下：高壓滅菌器的用法和注意事項如下：檢查滅菌器中存水的量。加水到指定的標(biāo)度；檢查滅菌器中存水的量。加水到指定的標(biāo)度；需要滅菌的器物放在滅菌器內(nèi)。將蓋密閉，打開氣門；需要滅菌的器物放在滅菌器內(nèi)。將蓋密閉，打開氣門；加熱。等空氣完全

53、排除后（蒸汽從氣門有力的沖出），關(guān)閉氣門；加熱。等空氣完全排除后（蒸汽從氣門有力的沖出），關(guān)閉氣門；當(dāng)壓力上升到所需要的的指標(biāo)后，開始計算滅菌的時間，滅菌過當(dāng)壓力上升到所需要的的指標(biāo)后，開始計算滅菌的時間，滅菌過 程中保持壓力不變；程中保持壓力不變；達(dá)到需要滅菌的時間，停止加熱，稍微打開氣門，排除蒸汽使壓達(dá)到需要滅菌的時間，停止加熱，稍微打開氣門，排除蒸汽使壓 力慢慢下降；力慢慢下降；當(dāng)壓力降到內(nèi)外相等時，才能打開高壓滅菌器的蓋。當(dāng)壓力降到內(nèi)外相等時，才能打開高壓滅菌器的蓋。高壓滅菌器的使用，最重要的是高壓滅菌器的使用，最重要的是注意排氣注意排氣，滅菌前要完全排除容器內(nèi)，滅菌前要完全排除容器內(nèi)

54、的空氣。滅菌后，排氣的快慢要適當(dāng)，排得太快，滅菌器中的培養(yǎng)基的空氣。滅菌后，排氣的快慢要適當(dāng)，排得太快，滅菌器中的培養(yǎng)基會沸騰而沖脫或沾濕棉花塞。排得太慢，培養(yǎng)基受高溫處理的時間長，會沸騰而沖脫或沾濕棉花塞。排得太慢，培養(yǎng)基受高溫處理的時間長，對有些培養(yǎng)基是不利的對有些培養(yǎng)基是不利的2.過濾滅菌過濾滅菌: 液體如含有易被高溫處理破壞的物質(zhì)，可用細(xì)菌不能通過的細(xì)菌液體如含有易被高溫處理破壞的物質(zhì)，可用細(xì)菌不能通過的細(xì)菌 濾器過濾，得到無菌的濾液。細(xì)菌濾器可由瓷質(zhì)、硅藻土、石棉濾器過濾，得到無菌的濾液。細(xì)菌濾器可由瓷質(zhì)、硅藻土、石棉 或玻璃制成或玻璃制成。3輻射滅菌 輻射對微生物的影響，因劑量而不

55、同。劑量高的，可以殺死微生輻射對微生物的影響，因劑量而不同。劑量高的，可以殺死微生 物物, ,所以輻射也用來滅菌和消毒。輻射滅菌的機制，可能是所以輻射也用來滅菌和消毒。輻射滅菌的機制，可能是影響影響 細(xì)胞的脫氧核糖核酸；或者是破壞細(xì)胞的酶系統(tǒng)細(xì)胞的脫氧核糖核酸；或者是破壞細(xì)胞的酶系統(tǒng)。 紫外線輻射：紫外線輻射：其能量和穿透力都很低，幾乎不能穿透固體物質(zhì)，對其能量和穿透力都很低，幾乎不能穿透固體物質(zhì)，對液體的穿透力也很差。紫外線殺菌取有效的波長在液體的穿透力也很差。紫外線殺菌取有效的波長在240-280nm240-280nm，一般，一般紫紫外線燈管的波長是外線燈管的波長是253.7nm253.7

56、nm。第二節(jié)第二節(jié) 各種材料的滅菌處理各種材料的滅菌處理1 1玻璃器皿的滅菌玻璃器皿的滅菌以干熱在烘箱中加熱至以干熱在烘箱中加熱至160-170處理處理1h或或150處理處理2h, 或用高壓或用高壓滅菌器在滅菌器在121處理處理20min左右進(jìn)行滅菌，但以連續(xù)用同一方法滅菌左右進(jìn)行滅菌，但以連續(xù)用同一方法滅菌為好，否則玻璃容易破裂或模糊。為好，否則玻璃容易破裂或模糊。干熱滅菌時溫度過高，超過干熱滅菌時溫度過高，超過180時，棉花和紙張會烤焦，棉花塞時，棉花和紙張會烤焦，棉花塞變?yōu)楹稚头置谟椭垙垊t容易破碎。變?yōu)楹稚头置谟椭垙垊t容易破碎。器皿放入烘箱以前必須器皿放入烘箱以前必須完全

57、干燥，以免引起玻璃的破碎或其中有些成分的分解完全干燥，以免引起玻璃的破碎或其中有些成分的分解。滅菌時要。滅菌時要使溫度慢慢上升，滅菌后待溫度逐漸下降到使溫度慢慢上升，滅菌后待溫度逐漸下降到60以下才能打開箱門以下才能打開箱門,避免玻璃器皿因突然冷縮而破碎。避免玻璃器皿因突然冷縮而破碎。臨時需用或加熱易于損壞的玻璃器皿滅菌，可用濃鉻酸洗滌液、臨時需用或加熱易于損壞的玻璃器皿滅菌，可用濃鉻酸洗滌液、0.1%0.1%的升汞溶液、的升汞溶液、5%5%的福爾馬林或的福爾馬林或70%70%的酒精等藥劑。的酒精等藥劑。藥劑滅菌后藥劑滅菌后的器皿，要用滅菌水洗滌幾次后再用。的器皿，要用滅菌水洗滌幾次后再用。2 2培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基滅菌一般都是用加壓蒸汽培養(yǎng)基滅菌一般都是用加壓蒸汽(121(121，20min