1、高熹1686151400012016年10月17日人體性染色質(zhì)體的觀察實驗報告一、實驗?zāi)康?、掌握人體性染色質(zhì)的檢測方法；2、觀察人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位；為進一步研究人體染色體的畸變與疾病提供參考條件；3、了解雌性哺乳動物X染色體失活假說和劑量補償效應(yīng)的機制。二、背景知識二十世紀(jì)六十年代，M.L.Barr等研究發(fā)現(xiàn)雌貓神經(jīng)細胞核膜內(nèi)凝縮的深染小體性染色質(zhì)體(sex-chromatinbody)或巴氏小體(Barrbody),而雄性個體細胞中則沒有。進一步研究發(fā)現(xiàn)：所有哺乳類雌體細胞中都可以見到這一結(jié)構(gòu)。此后研究發(fā)現(xiàn)這種與性別有關(guān)的兩型現(xiàn)象在有袋類、食肉類和靈長類等動物的多數(shù)組織細胞中

2、存在，而在嚙齒類中在少數(shù)組織中可以觀察到。三、實驗原理在雌性個體的細胞中的2條染色體，在間期，有一條呈松散狀態(tài)，參加細胞生理活動；另一條保持異固縮狀態(tài)，我們稱之為Barr小體。由于Barr小體是處于失活狀態(tài)，所以一般位于細胞核內(nèi)邊緣。形狀多樣(微凸形、三角形、卵形、短棒形等)。一般，在正常女性細胞中可能出現(xiàn)一個Barr小體，正常男性細胞中不可能出現(xiàn)Barr小體；(正常女性口腔粘膜細胞中約30-50喻一個Barr小體。在不同實驗室中計數(shù)的差別較大，而在男性中則僅只偶爾可見不典型者一一這是環(huán)境引起代謝的暫時現(xiàn)象，約2犯下)。高熹1686151400012016年10月17日對于性染色體畸變的個體。

3、Barr小體數(shù)=細胞內(nèi)X染色體數(shù)-1。Barr小體特征及位置：它是處于失活狀態(tài)的X染色體，一般位于細胞核膜內(nèi)側(cè)邊緣的一個深染區(qū)（較細胞核要?。?，形狀多樣。劑量補償效應(yīng)：是指XY型性別決定的生物，由X染色體上的基因決定的性狀在兩性的表現(xiàn)幾乎相同。即X染色體上的基因的表達產(chǎn)物在雌、雄細胞中是等量的。哺乳動物X染色體隨機失活或父源X染色體失活有袋動物父源X染色體失活黑腹果蠅雄性個體X染色體基因表達水平加倍秀麗線蟲雌性個體兩條X染色體基因表達水平減半補償?shù)膶崿F(xiàn)途徑：X染色體轉(zhuǎn)錄速率的差異性，雄性細胞中的X染色體轉(zhuǎn)錄速率）雌性細胞中2條X染色體的轉(zhuǎn)錄速率；雌性細胞中有一條X染色體失活。四、實驗器材、材料

4、和試劑1、器材：生物顯微鏡、鐐子、漱口杯、牙簽、載玻片、蓋玻片、染色缸、解剖針。2、實驗材料：實驗者的口腔黏膜或帶有毛囊的頭發(fā)。3、試劑：50%70%95濃醇、二甲苯、5mol/LHCL、1臉堇水溶液、蒸儲水、封固劑、乙醍、醋酸地衣紅燃料或45溫酸。五、實驗步驟高熹1686151400012016年10月17日1、取材1)口腔黏膜材料載玻片用去污劑徹底清洗，蒸儲水徹底沖洗后再經(jīng)過70溫醇沖洗，在火焰上烘干保存?zhèn)溆?。以防操作過程中上皮細胞脫落。取材前，自來水漱口三次，去除口腔中的細菌和已經(jīng)退化的黏膜上皮細胞。防止口腔中的細菌被硫堇溶液染色與細胞發(fā)生混淆。取材時，張開嘴，用牙簽輕輕刮面頰內(nèi)壁，將掛

5、下來的細胞在絕對結(jié)晶的載玻片上涂成一個占較大面積的薄層，空氣中干燥30min后進行染色。2)毛囊材料取發(fā)根細胞：拔取一根帶有毛囊的頭發(fā)，置于載玻片上，滴加固定液于毛囊上，固定1min左右，空氣干燥。2、染色1)口腔黏膜材料將涂片依次放入95%70%50溫醇和蒸儲水的染色缸中，每種濃度的溶液浸泡2min。涂片自蒸儲水中取出后，放入5mol/LHCL染色缸中，大約5s。將酸解的涂片放入蒸儲水的染色缸中10-15s去算，最好重復(fù)一至兩次，PH會影響染色效果。在1%勺硫堇水溶液染色缸處理10-15min。染色后經(jīng)蒸儲水洗后一次在下列酒精溶液中脫水：50叱酉I30s,70%L酉130s,95叱醇30s,

6、無水乙醇30s。高熹1686151400012016年10月17日在二甲苯中透明1min,然后取出多余的二甲苯。2）發(fā)根細胞去下毛囊，棄發(fā)干，加一滴醋酸地衣紅染液后蓋上蓋玻片，然后文火微熱，靜置5min后蓋一濾紙壓片。或者在材料上滴一滴45濃酸或5mol/LHCL解離5min后吸掉多余乙酸。用潔凈的解剖針針頭將毛囊的組織分散均勻，待晾干后將載玻片放入硫堇溶液中染色20min。取出載玻片移入75濃醇中作用30s。取出載玻片晾干待鏡檢。六、實驗結(jié)果及分析高熹1686151400012016年10月17日1、鏡檢制片時，先用低倍鏡找到細胞，再用高倍鏡觀察并計數(shù)性染色質(zhì)體。應(yīng)該注意核質(zhì)是網(wǎng)狀或細顆粒狀

7、分布；核膜清晰、核無缺損；染色適度；周圍無雜菌。2、性染色質(zhì)體位于核膜的內(nèi)驗，應(yīng)為深藍色，直徑大于1um在口腔黏膜上皮細胞中很難辨認非邊緣X染色質(zhì)體。3、性染色質(zhì)體偶爾也在雄性細胞中觀察到，概率很小。七、注意事項1、刮口腔上皮細胞前要漱口。2、涂片略干再加改良苯酚口紅。3、染色時間不要太長，否則核質(zhì)著色深，X染色質(zhì)體不易區(qū)分。4、毛囊細胞要充分解離，壓片前可先用解剖針敲片，使細胞解離。八、思考題1、掌握概念：巴氏小體、性染色質(zhì)、X小體、劑量補償效應(yīng)。巴氏小體：在哺乳動物體細胞核中，除一條X染色體外，其余的X染色體常濃縮成染色較深的染色質(zhì)體，此即為巴氏小體。又稱X小體，通常位于間期核膜邊緣。性染

8、色質(zhì)：性染色質(zhì)指高等哺乳動物體細胞核內(nèi)的一種可被堿性染料染成深色的小體，性染色質(zhì)檢查可初篩性染色體病及鑒別性別，對兩性畸形可輔助診斷。X小體：緊貼細胞核膜內(nèi)面的團塊狀結(jié)構(gòu)，直徑約1umi染色程度較其他染色質(zhì)深。劑量補償效應(yīng)：使細胞核中具有兩份或兩份以上基因的個體和只高熹1686151400012016年10月17日有一份基因的個體出現(xiàn)相同表型的遺傳效應(yīng)。一個細胞核中某一基因的數(shù)目稱為基因劑量。在以性染色體決定性別的動物中，常染色體上的基因劑量并無差別，因為雌雄兩性動物的常染色體的形態(tài)和數(shù)目都相同。但是對于性染色體來講，包括人類在內(nèi)的哺乳動物雌性個體的每一體細胞中有兩條X染色體，所以在X染色體上

9、的基因劑量有兩份，而雄性個體只有一條X染色體，基因劑量只有一份。2、查閱文獻指出巴氏小體研究的新進展。羊水脫落細胞巴氏小體探究文獻記載口腔黏膜細胞中，巴氏小體百分率男性w5%18%c女性w42%本試驗結(jié)果中男胎巴氏小體w3%T22例，8%w女胎w36%自15例，女胎巴氏小體明顯低于文獻，從表中可以看出男女巴氏小體百分率仍呈現(xiàn)出明顯分界線，說明羊水脫落細胞巴氏小體與胎兒性別密切相關(guān)3,準(zhǔn)確率達92.5%,只是與口腔黏膜細胞判斷標(biāo)準(zhǔn)不一樣。尤其兩者中間出現(xiàn)的3%：巴氏小體8%±渡值，其間男胎女胎均有，此區(qū)間不可以作為判斷的依據(jù)。出現(xiàn)以上差異，有可能與實驗對象及材料不同有關(guān)，其次鏡檢者的實際經(jīng)驗，對可數(shù)細胞的認定不一樣，也可出現(xiàn)差異，口腔間期細胞較多，羊水脫落細胞退化程度較高，間期細胞相對較少，也是出現(xiàn)差異的因