1、Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design學(xué) 生：謝 欣導(dǎo) 師：彭 成（教授） 韓 波（副教授）專 業(yè)：藥 理 學(xué)青黛中靛紅的結(jié)構(gòu)改造及抑菌活性研究Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design目錄CONTENTS預(yù)期結(jié)果和安排3 3經(jīng)費(fèi)預(yù)算4 4選題背景和意義1 1研究內(nèi)容和方案2 2Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design目錄CONTENTS預(yù)期結(jié)果和安排3 3經(jīng)費(fèi)預(yù)算4 4選題

2、背景和意義1 1研究內(nèi)容和方案2 2Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design選題的背景 青黛，由各種產(chǎn)藍(lán)植物青黛，由各種產(chǎn)藍(lán)植物如藕藍(lán)，馬藍(lán)，寥藍(lán)，木藍(lán)如藕藍(lán)，馬藍(lán)，寥藍(lán)，木藍(lán)等莖葉發(fā)酵加工制成，可內(nèi)等莖葉發(fā)酵加工制成，可內(nèi)服及外敷，有清熱、涼血、服及外敷，有清熱、涼血、解毒之效。解毒之效。 現(xiàn)代藥理研究現(xiàn)代藥理研究:抗菌抗菌，抗，抗炎，調(diào)節(jié)免疫，保護(hù)腎臟，炎，調(diào)節(jié)免疫，保護(hù)腎臟，抗腫瘤，保肝利膽之功效?？鼓[瘤，保肝利膽之功效。Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertan

3、ker Design選題的背景靛玉紅青黛酮靛藍(lán)色胺酮其他靛紅青黛化學(xué)研究 有文獻(xiàn)顯示，青黛中的有文獻(xiàn)顯示，青黛中的靛紅靛紅和色胺酮為其有效抑菌成分。但目前對(duì)靛紅和色胺酮為其有效抑菌成分。但目前對(duì)靛紅及其衍生物的研究較少。及其衍生物的研究較少。Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design選題的背景靛紅，又名吲哚醌，屬于吲哚類生物堿，是中靛紅，又名吲哚醌，屬于吲哚類生物堿，是中藥青黛的主要活性成分，也是存在于海洋生物藥青黛的主要活性成分，也是存在于海洋生物龍蝦及人體的內(nèi)源性天然活性化合物。龍蝦及人體的內(nèi)源性天然活性化合物。藥理活

4、性：藥理活性：抗菌抗菌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低膽固、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低膽固醇、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、抗癌、預(yù)警醇、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、抗癌、預(yù)警帕金森病及調(diào)節(jié)腦內(nèi)乙酰膽堿和多巴胺的平衡帕金森病及調(diào)節(jié)腦內(nèi)乙酰膽堿和多巴胺的平衡等。等。Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design研究的目的和意義 通過對(duì)青黛中靛紅的分離、提取，運(yùn)通過對(duì)青黛中靛紅的分離、提取，運(yùn)用現(xiàn)代化學(xué)合成手段，結(jié)合當(dāng)今國際前沿用現(xiàn)代化學(xué)合成手段，結(jié)合當(dāng)今國際前沿的合成技術(shù)，對(duì)靛紅進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，并對(duì)的合成技術(shù)，對(duì)靛紅進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，并對(duì)改造后的產(chǎn)物進(jìn)行抑

5、菌活性研究。改造后的產(chǎn)物進(jìn)行抑菌活性研究。目目的的意意義義 應(yīng)用現(xiàn)代有機(jī)化學(xué)合成技術(shù)研究我國應(yīng)用現(xiàn)代有機(jī)化學(xué)合成技術(shù)研究我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥，以期得到具有活性較高、毒的傳統(tǒng)醫(yī)藥，以期得到具有活性較高、毒性較小的手性先導(dǎo)化合物。性較小的手性先導(dǎo)化合物。Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design目錄CONTENTS預(yù)期結(jié)果和安排3 3經(jīng)費(fèi)預(yù)算4 4選題背景和意義1 1研究內(nèi)容和方案2 2Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design研究流程分離分離 水煎水煎-乙醚提

6、取乙醚提取-層析柱分離層析柱分離-重結(jié)晶重結(jié)晶合成合成活性研究活性研究 濾紙片抑菌圈初試濾紙片抑菌圈初試 最小抑菌濃度的測(cè)定最小抑菌濃度的測(cè)定Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design提取分離青黛（粉末）青黛（粉末）青黛水煎液青黛水煎液酸性濃縮液酸性濃縮液加蒸餾水沸水加熱1h，過濾，重復(fù)3次，合并濾液濃縮至2L，以濃鹽酸調(diào)pH值至2-3濃縮醚液濃縮醚液乙醚提取3次脫水棕黃色段棕黃色段Rf=0.48Rf=0.48段段橙紅色橙紅色針晶針晶于200g硅膠柱進(jìn)行柱層析，氯仿-丙酮(95：5)沖洗于100g硅膠柱進(jìn)行層析，氯仿-丙酮

7、(9：l)展開，乙醚洗脫蒸干，以水重結(jié)晶Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design結(jié)構(gòu)改造-合成思路3-位取代螺環(huán)化合物Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design結(jié)構(gòu)改造-合成思路氧雜螺環(huán)化合物六元氮雜螺環(huán)化合物具有更多手性中心和取代基的全碳環(huán)螺環(huán)化合物Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design結(jié)構(gòu)改造-氧雜螺環(huán)化合物合成初步擬定合成路線：初步擬定合成路線：Tankertanker

8、 DesignTankertanker DesignTankertanker Design結(jié)構(gòu)改造-氧雜螺環(huán)化合物合成反應(yīng)條件篩選及優(yōu)化：反應(yīng)條件篩選及優(yōu)化：溶劑溶劑催化劑催化劑溫度溫度時(shí)間時(shí)間Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design結(jié)構(gòu)改造-氧雜螺環(huán)化合物合成試劑購買 包含不同基團(tuán)的原料，R1、R2、PG多樣化底物制備 將購買到的R1、R2、PG進(jìn)行排列組合，得到不同底物催化劑制備 二苯基脯氨醇硅醚的制備 氯鉻酸吡啶的制備合成實(shí)驗(yàn)流程：合成實(shí)驗(yàn)流程：靛紅衍生物的靛紅衍生物的合成及鑒定合成及鑒定HPLC 13C NMR1

9、H NMRTankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design抑菌活性研究濾紙片抑菌圈初試圖示：濾紙片抑菌圈初試圖示：培養(yǎng)皿固體培養(yǎng)基菌懸液濾紙片（浸有不同產(chǎn)物）（浸有不同產(chǎn)物）抑菌圈Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design抑菌活性研究 濾紙片抑菌圈初試流程：濾紙片抑菌圈初試流程： 牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、蒸餾水 l.5kg/cm2壓力下，滅菌20min培養(yǎng)基的制備 菌種的選擇：大腸桿菌、銅綠假單胞菌 活化后制成菌數(shù)約106CFu/ml的菌懸液菌懸液的制

10、備 浸有不同濃度產(chǎn)物的濾紙片在平皿內(nèi)間隔一定的距離貼4片，放入培養(yǎng)箱中35培養(yǎng) 取游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑，同樣的方法平行測(cè)試3次，求4個(gè)抑菌圈直徑平均值抑菌圈直徑的測(cè)量Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design抑菌活性研究 濾紙片抑菌圈初試分組：濾紙片抑菌圈初試分組：空白組 二甲基亞砜靛紅組 不同濃度的靛紅二甲基亞砜溶液產(chǎn)物組 不同濃度的靛紅衍生物二甲基亞砜溶液Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design抑菌活性研究 最小抑菌濃度（最小抑菌濃度（MICM

11、IC）的測(cè)定）的測(cè)定空白組藥物組（濃度作對(duì)倍稀釋）濃度1濃度2濃度3濃度4含藥肉湯不含藥肉湯供試菌液供試菌液37孵育18-24小時(shí)，以不顯示混濁、細(xì)菌未生長的那一管藥液稀釋度作為MIC。Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design目錄CONTENTS預(yù)期結(jié)果和安排3 3經(jīng)費(fèi)預(yù)算4 4選題背景和意義1 1研究內(nèi)容和方案2 2Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design預(yù)期結(jié)果ndnd2 2 合成一系列的靛紅衍生物st st1 1 成功分離青黛中的靛紅成分rd

12、rd3 3 找出具有高抑菌活性的手性先導(dǎo)化合物 與對(duì)照品吲哚醌與對(duì)照品吲哚醌進(jìn)行薄層層析對(duì)比，進(jìn)行薄層層析對(duì)比，以以RfRf值是否相同值是否相同為為產(chǎn)品評(píng)價(jià)指標(biāo)。產(chǎn)品評(píng)價(jià)指標(biāo)。 根據(jù)可以購根據(jù)可以購買的底物合成買的底物合成R R1 1* *R R2 2* *PG=NPG=N種種靛紅衍生物。靛紅衍生物。Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design2011.12實(shí)驗(yàn)安排對(duì)青黛中吲哚醌進(jìn)行分離提取2012.1底物和催化劑制備2012.5產(chǎn)物的合成及鑒定2012.10抑菌活性實(shí)驗(yàn)最小抑菌濃度實(shí)驗(yàn)2013.12013.3Tankert

13、anker DesignTankertanker DesignTankertanker Design前期研究基礎(chǔ) 反應(yīng)條件篩選：反應(yīng)條件篩選： 部分產(chǎn)物：部分產(chǎn)物：Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design前期研究基礎(chǔ)Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design前期研究基礎(chǔ)Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design前期研究基礎(chǔ)Tankertanker DesignTankertank

14、er DesignTankertanker Design前期研究基礎(chǔ)Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design目錄CONTENTS預(yù)期結(jié)果和安排3 3經(jīng)費(fèi)預(yù)算4 4選題背景和意義1 1研究內(nèi)容和方案2 2Tankertanker DesignTankertanker DesignTankertanker Design經(jīng)費(fèi)預(yù)算測(cè)試費(fèi)用：測(cè)試費(fèi)用：3 3萬。包括核磁共振測(cè)試萬。包括核磁共振測(cè)試1.51.5萬，高效液相測(cè)試萬，高效液相測(cè)試1 1萬，理論計(jì)萬，理論計(jì)算算0.50.5萬。萬。菌種費(fèi)用：菌種費(fèi)用：1 1萬。萬。出版物出

15、版物/ /文獻(xiàn)文獻(xiàn)/ /信息傳播費(fèi)：信息傳播費(fèi)：0.50.5萬。包括：文件檢索、復(fù)印打印、期刊萬。包括：文件檢索、復(fù)印打印、期刊版面費(fèi)等。版面費(fèi)等。原料費(fèi)用：合成各種催化劑、底物等化工原材料，原料費(fèi)用：合成各種催化劑、底物等化工原材料，2 2萬。萬。試劑費(fèi)用：各種分析純的反應(yīng)溶劑、色譜純的試劑費(fèi)用：各種分析純的反應(yīng)溶劑、色譜純的HPLCHPLC溶劑等，溶劑等，1 1萬。萬。其他費(fèi)用：新購置或更換一些手性色譜柱，各種玻璃反應(yīng)儀器、勞保其他費(fèi)用：新購置或更換一些手性色譜柱，各種玻璃反應(yīng)儀器、勞保用品等用品等0.50.5萬。萬。包括：磁力攪拌器、真空水泵、真空油泵等小型反應(yīng)儀、超凈無菌工包括：磁力攪拌器、真空水泵、真空油泵等小型反應(yīng)儀、超凈無菌工作臺(tái)，真空干燥箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、