1、一、多糖的檢測方法（1）粗多糖的苯酚-硫酸分光光度測定法（2）葡聚糖的分光光度測定法（3）硫酸軟骨素的分光光度測定法二、皂苷類化合物的檢測方法（1）總皂苷的分光光度測定法（2）絞股藍皂苷的分光度測定法三、黃酮及苷類化合物的檢測方法（1）總黃酮的風光光度測定法（2）原花青素的分光光度測定法（3）原花青素的鐵鹽催化比色測定法四、酶、激素及內源性物質的檢測方法（1）超氧化物歧化酶的氮藍四唑測定法（2）超氧化物歧化酶的連苯三酚自氧化測定法（3）氯化高鐵血紅素的分光光度測定法五、其他類化合物的檢測方法（1）總蔥醌的分光光度測定法（2）幾丁胺糖的脫乙酰度滴定法（3）總三萜的分光光度測定法第一章概論（第3頁

2、）表1-1常見的保健食品的功效成分（標志性成分）、保健功能及主要來源功效成分（標志性成分）保健功能主要來源黃酮類銀杏黃酮、山楂黃酮輔助降血脂、提高缺氧耐受力、抗氧化、增強免疫力、保護心血管系統(tǒng)、保護腦神經系統(tǒng)銀杏葉、山楂、蜂膠、葛根、沙棘、紅花、荷葉、甘草、桑葉、陳皮、花粉、桑葚、黃芪、淫羊藿、魚腥草多糖類靈芝多糖、香菇多糖緩解體力疲勞、增強免疫力、輔助降血糖、輔助降血脂靈芝、香菇、枸杞、銀耳、灰樹花、人參、西洋參、昆布、木耳、山藥、黃芪、茯苓、豬苓、黃精、苦瓜皂苷類紅景天苷、人參皂苷緩解體力疲勞、增強免疫力、抗氧化、抗輻射、提高缺氧耐受力、輔助降血糖、保護心血管系統(tǒng)人參、西洋參、紅景天、絞股

3、藍、三七、山藥、黃芪、酸棗仁、桔梗、遠志、知母、甘草、大豆、蒺藜、太子參蔥醌類通便、美容、減肥、增強免疫力蘆薈、大黃、決明子、何首烏花冃糸抗氧化、增強免疫力、抗輻射、保護心血管系統(tǒng)葡萄子、葡萄皮、越橘、黑加侖、玫瑰茄、甘藍、桑葚、紫甘薯、茶葉三萜類靈芝三萜、角鯊烯抗氧化、增強免疫力、抗輻射、緩解體力疲勞、輔助降血脂、輔助保護化學性肝損傷、改善睡眠、改善記憶靈芝、赤芝、紫芝（抱子粉）、甘草、黃芪、人參、澤瀉、積雪草、山楂、女貞子、苦茶、五味子、深海魚油（金槍魚、沙丁魚、鯊魚、鮭魚）殼聚糖（幾丁聚糖）增強免疫力、輔助降血脂、輔助降血糖、輔助保護骨粘膜蝦、蟹殼的提取物硫酸軟骨素輔助降血脂、增強免疫力

4、、保護骨關節(jié)、參與制造骨骼動物的軟骨（第73頁）第三章保健食品中功效成分的檢測方法第一節(jié)多糖的檢測方法一、粗多糖的苯酚一硫酸分光光度測定法1、方法提要多糖經乙醇沉淀分離后，去除其他可溶性糖及雜質的干擾，再與苯酚一硫酸作用成橙紅色化合物，其呈色度與溶液中的糖的濃度成正比，在485nm波長下比色定量。4、測定步驟（1）樣品提?。悍Q取混合均勻的固體樣品1.02.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，與沸水浴中加熱1小時（如保健食品添加的已是多糖提取物，則加熱15min）,冷卻至室溫后補加水至刻度線（V"，混勻后過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀粗多糖。在這里必須強調的是不少保健

5、品添加了淀粉、糊精，一定要做相應的處理，否則結果偏高。添加淀粉的樣品需加a-淀粉酶及糖化酶（如葡萄糖苷酶）處理。添加糊精的樣品需加糖化酶（如葡萄糖苷酶）處理。處理的原則是將這類非活性多糖的碳水化合物全部酶解成單糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以達到分離的目的。1）添加淀粉或淀粉+糊精的樣品：可取50mL樣品提取液置于100mL具塞錐形瓶中，冷卻至60C以下，力口1mL10%淀粉酶液（Singma公司的液狀淀粉酶可直接加0.10.2mL）和0.5mL0.2M磷酸鹽緩沖液，加塞，至55C60C酶解1小時，再加適量的糖化酶（如葡萄糖苷酶）（約為樣液體積的1%）于60C以下再水解60min后取出

6、（用電業(yè)檢驗是否水解完全，如不完全可延長水解時間至酶解液加碘液不變藍色為止），于電爐上小心加熱至沸（滅酶），冷卻，定容，過濾，取濾液沉淀粗多糖。2）添加糊精的樣品：如上法處理（免加淀粉酶）（2）沉淀粗多糖：準確吸取上濾液（或液體樣品）5.0mL（V2），置于50mL離心管中（或2.0mL于15mL具塞離心管中），加入無水乙醇20mL（或8mL），混勻，于4C冰箱靜置4小時以上，以4000r/min離心5min，棄去上清液，殘渣用80%（V/V）乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復操作3次。殘渣用水溶解并定容至1025mL（V3）（根據濃度而定）。（3）標準曲線的繪制：準確吸取葡萄糖標準使

7、用液0mL、0.10mL、0.20mL、0.40mLL0.60mL、0.80mL、1.00mL（相當于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.8mg、0.10mg）置于25mL比色管中，補加水至2.0mL,加入5%苯酚溶液1.0mL,在旋渦混合器上混勻，小心加入濃硫酸10mL,在旋渦混合器上小心混勻，至沸水浴中2min，冷卻至室溫，用分光光度計在485nm波長處以試劑空白為參比，1cm比色皿測定吸光度值。以葡萄糖質量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。（4）樣品測定：準確吸取上液適量（V4）（含糖0.020.08mg）置于25mL比色管中，補加水至2.0

8、mL,然后按（3）法測定吸光度值。從標準曲線上查出葡萄糖含量，計算樣品中粗多糖含量。6、注釋（1）本方法線性范圍在0.010.1mg/mL，線性方程為y=0.3095x+0.0004，r=0.9989,若工作需要標準曲線可延長至0.20mg/mL。（2）本法測定樣品中多糖時，提取時間以1小時為宜，以免因提取時間過長引起糖結構變化甚至使碳鍵斷裂而導致所測多糖含量偏低。（3）比色法測定多糖并非特異性反應，本法靈敏度高，出現(xiàn)測定結果平行性偏差較大，主要是操作不夠嚴謹所致，反復幾次的沉淀、洗滌、棄去上清液、樣液的轉移等都是造成測定結果偏差的原因。實際操作時每個樣品要多做幾個平行樣，并盡量取用幾個近似值

9、的均值報告結果。由不同材料組成的保健品所形成乙醇沉淀物的結構也不同，用80%的乙醇洗滌沉淀物時（如在15mL離心管中操作）可先加少量（0.5mL）在旋渦混合器或超聲波振蕩器中以增大撞擊及分散沉淀物的強度，盡量將沉淀物打散，然后再加數(shù)毫升80%乙醇洗滌，對于一些粘黏包裹狀的沉淀物，也可先加少量水溶解，然后再加80%的濃度洗滌，力求將附在沉淀物的雜質除去。（4）關于乙醇的濃度：由于保健食品組方的復雜性，不同分子量得多糖所用的乙醇濃度沉淀效果是不同的，通常使用80%乙醇濃度不一定完全使用于所有的保健品中粗多糖測定，最好能在75%、80%、85%、90%、95%的乙醇濃度之間做預實驗以優(yōu)選最佳的乙醇濃

10、度。（5）關于酶解1 ）淀粉酶的水解具有專一性，她只水解淀粉而不會水解其他多糖，在淀粉酶的作用下，使淀粉水解成低分子糊精和麥芽糖，再在糖化酶（如葡萄糖苷酶）的作用下變成葡萄糖。酶的用量應根據酶的活力而定。2 ）糖化酶是幾種酶的簡稱（學名a-1,4-葡萄糖水解酶），包括葡萄糖苷酶、淀粉葡萄糖苷酶（簡稱為葡萄糖苷酶）、普魯蘭酶。藥用輔料的淀粉一般都是直鏈淀粉，用a-淀粉酶+葡萄糖苷酶（作用于直鏈淀粉，1,4糖苷鍵）處理就可，如要作用于支鏈淀粉，需同時加入普魯蘭酶（作用于1,6-糖苷鍵）才能完全變?yōu)槠咸烟恰?）酶的活性對酶解的效果影響較大（6）多糖還原糖換算系數(shù)0.9之解釋（7）粗多糖測定最終報告結

11、果要標示以葡萄糖計或葡聚糖計，因兩者測定值相差很大。（第82頁）四、葡聚糖的分光光度測定法本方法適用于各類食品中以葡聚糖為主要結構、相對分子質量1*104以上的水溶性粗多糖的測定。本方法的最低檢出濃度為5.0mg/L。1、方法提要食品中相對分子質量大于1*104的高分子物質在80%乙醇溶液中沉淀，與水溶液中單糖和低聚糖分離，用堿性二價銅試劑選擇性地從其他高分子物質中沉淀具有葡聚糖結構的多糖，用苯酚硫酸反應以碳水化合物形式比色測定其含量，其顯色強度與粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此計算食品中粗多糖的含量。4、測定步驟（1）樣品處理1）樣品提?。悍Q取混合均勻的固體樣品2.0g，置于100mL容量瓶

12、中，加水80mL左右，與沸水浴中加熱2小時，冷卻至室溫后補加水至刻度線,混勻后過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。2）沉淀粗多糖：準確吸取1）項終濾液5.0mL或液體樣品5.0mL，置于50mL離心管中，加入無水乙醇20mL,混勻5min后，以3000r/min離心5min，棄去上清液，殘渣用80%（體積分數(shù)）乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復操作34次。殘渣用水溶解并定容至5.0mL，混勻后供沉淀葡聚糖。3）沉淀葡聚糖：準確吸取2）項終溶液2mL，置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧化鈉溶液2.0mL、銅試劑溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷卻，以3000r/min

13、離心5min，棄去上清。殘渣用洗滌液數(shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復操作3次，殘渣用10%（體積分數(shù)）硫酸溶液2.0mL溶解并移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度線，混勻。（2）標準曲線的繪制：準確吸取葡聚糖標準使用液0mL、0.10mL、0.20mL、0.40mLL0.60mL、0.80mL、1.00mL（相當于葡聚糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg0.61mg、0.10mg）置于25mL比色管中，準確補加水至2.0mL,加入50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋渦混合器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL,在旋渦混合器上小心混勻，至沸水浴中2min，冷卻至室溫，用

14、分光光度計在485nm波長處以試劑空白為參比，1cm比色皿測定吸光度值。以葡聚糖質量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。（3）樣品測定：準確吸取樣品測定液2.0mL，置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋渦混合器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL,在旋渦混合器上小心混勻，至沸水浴中2min，冷卻至室溫，用分光光度計在485nm波長處以試劑空白為參比，1cm比色皿測定吸光度值。從標準曲線上查出葡聚糖含量，計算樣品中粗多糖含量。同時做樣品空白試驗。6、準確度與精密度在不同食品中進行不同濃度的加標回收試驗，回收率為87.8%110.87%，不同實驗室對同一樣品進行10此測

15、定結果的相對標準偏差為5.8%。7、注釋本方法測定的水溶性多糖含有10個以上單糖殘基。經過五個檢測單位的驗證，本方法所測定的結果一葡聚糖計。（3）干擾因素試驗證明，在樣品中加入與粗多糖燈亮的乳糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、葡萄糖及2倍量得淀粉、糊精，不影響樣品中粗多糖的測定結果。但在測定過程中應避免糖和其他碳水化合物的污染，因為苯酚硫酸與糖和碳水化合物起反應。（6）某些保健食品中功效成分為醇溶性多糖，可參照本方法進行測定，但樣品預處理時將乙醇改為丙酮即可。（7）液體樣品中粗多糖含量低時，可取樣50.0mL加熱濃縮至5.0mL后，再依法操作測定。（8）洗滌粗多糖沉淀時，一定要將離心管壁上玷污的其他糖分

16、和碳水化合物用80%乙醇洗凈，否則結果偏高。8、關于保健食品粗多糖測定方法分光光度法的說明多糖因單體組成、結構、聚合度、物化性質等各異，故測定方法不同，此法適用于測定高分子量的糖類物質（>10000Da）多糖的定義是聚合度大于9的糖（第110頁）十一、硫酸軟骨素的分光光度測定法本方法硫酸軟骨素的檢出限為0,01mg/L。1、方法提要結晶紫是一種陽離子染料，在酸性條件下帶正電荷，易與帶酸性基團的生物大分子發(fā)生靜電作用而形成離子配合物，已用于脫氧核糖核酸、干擾素等的分光光度法分析。結晶紫結構中的氨基帶正電荷，硫酸軟骨素的磺酸基和羧基帶負電荷，兩者通過靜電引力和輸水作用力形成絡合物，產生變色效

17、應，吸光度降低。吸光度的降低量與硫酸軟骨素含量線性相關。4、測定步驟（1）樣品處理：精密稱取內容物25mg，置于100mL量瓶中，加水適量，超聲處理10min加水定容至100mL,過濾，取續(xù)濾液4mL,置于100mL量瓶中，加水至刻度，得樣品溶液。（2）分光光度法測定：取供試品溶液1mL，置于10mL具塞刻度試管中，加入pH5.0的醋酸一醋酸鈉緩沖液1.0mL和結晶紫并粗三溶液0.6mL，加水至10.0mL，搖勻，30C水浴保溫20min,放至室溫。以水為參比，于588nm波長下測定吸光度。6注釋硫酸軟骨素是提取于動物軟骨的黏多糖類物質，在心血管疾病、關節(jié)病的防治等方面具有重要作用。硫酸軟骨素

18、除了作為藥用品外，大量的是作為改善關節(jié)病的補充品，作為健康食品應用，在美國已經風行多年，經過多年的應用，已經證明硫酸軟骨素對改善老年退行性關節(jié)炎、風濕性關節(jié)炎有一定的效果。（第113頁）第二節(jié)皂苷類化合物的測定方法一、總皂苷的分光光度測定法1 、方法提要樣品中總皂苷經提取、PT大孔吸附樹脂柱預分離后，在酸性條件下，香草醛與人參皂苷生成有色化合物，以人參皂苷Re為對照品，于560nm處比色測定。4、測定步驟（1）樣品處理1）固體樣品：稱取1.0g左右樣品置于100mL燒杯中，加入2040mL85%乙醇，超聲波振蕩30min，再定容至50mL,搖勻，放置，吸取上清液1.0mL,揮干后以水溶解殘渣，

19、進行柱分離。2）液體樣品：含乙醇的酒類樣品：準確吸取1.0mL樣品放于蒸發(fā)皿中，蒸干，用水溶解殘渣，用此液進行柱層析。非乙醇類液體樣品：準確吸取1.0mL樣品（如濃度高或顏色深，需稀釋一定體積后再取1.0mL）,直接進行柱分離。（2）柱層析：以PT大孔吸附樹脂柱進行層析分離，準確吸取上述已處理好的樣品溶液0.2mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性雜質，棄去洗脫液，再用20mL85%乙醇洗脫總皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，以此作顯色用。（3）顯色：在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準確加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，轉動蒸發(fā)皿，使殘渣溶解，再加入0.8mL高氯酸，混勻后移入10mL

20、比色管中，塞緊蓋子，于60C以下水浴加溫15min取出，冷卻后準確加入冰乙酸5.0mL，搖勻后以1.0cm比色皿與560nm處與人參皂苷Re標準管同時比色。（4）標準曲線繪制：人參總皂苷濃度在40200“g/mL之間與吸光度值呈線性關系，相關系數(shù)（r）0.999.6、注釋回收率：90%105%。（第122頁）第三節(jié)黃酮類及苷類化合物的檢測方法一、總黃酮的分光光度測定法本方法總黃酮檢出限為3.5“g/mL。1、方法提要黃酮類化合物是具有苯駢吡喃環(huán)結構的一類天然化合物的總稱，一般都具有4位羰基，且呈黃色。黃酮類化合物多分布于植物中，大多數(shù)以苷的形式存在。黃酮類化合物中的3-羥基、4-羥基或5-羥基

21、或鄰二位酚羥基與鋁鹽進行絡合反應，在堿性條件下生成紅色的絡合物。4、測定步驟（1）樣品處理1）固體樣品：稱取12g干燥的固體樣品，用濾紙包緊，置于平底燒瓶中加入50100mL70%乙醇溶液，浸潤后，在80C水浴下回流2h，至黃酮類化合物基本提取完全。粗提取液冷卻后，減壓抽濾，并用少量70%乙醇溶液洗滌殘渣，合并濾液。在50C下減壓蒸餾，除去其中的乙醇，直至燒瓶內溶液呈無醇味。倒數(shù)燒瓶內溶液，并用30mL熱水分3次洗滌燒瓶，抽濾后，將濾液導入分液漏斗中，以75mL氯仿分3次萃取脫脂，待完全分層后，收集下層水溶液并定容至50mL。稱取12g經預處理的聚酰胺樹脂粉末，濕法裝柱，用水飽和。吸取上述脫脂

22、后的水溶液12mL，沿層析柱慢慢滴入柱內，放置一定時間，待測液被充分吸附后，用70%乙醇或甲醇洗脫，流速為1.0mL/min,至流出液基本無色，一般收集10mL即可。上述洗出液用洗脫劑（70%乙醇或甲醇）定容后即可用于測定。2）液體樣品：準確吸取樣品3.0mL，定容至50mL后，直接以75mL氯仿分3次萃取脫脂，其余步驟同上。（2）標準曲線的繪制：準確吸取蘆丁標準溶液0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、0.62mL（相當于蘆丁0“g、75“g、150“g、300“g、450“g、600“g），分別移入10mL亥度比色管中，加入30%乙醇液至5mL,各加5%亞硝酸鈉溶

23、液0.3mL，振搖后放置5min，加入10%硝酸鋁溶液0.3mL,搖勻后放置60min，力口1.0mol/L氫氧化鈉溶液2mL,用30%乙醇定容至亥度，以零管為空白，搖勻后用1cm的比色皿，在510nm處測定吸光度，繪制蘆丁含量（“g）與吸光度的標準曲線。（3）樣品測定：根據樣品中總黃酮含量高低，取適宜體積待測液，按標準曲線制備操作步驟與510nm處進行吸光度的測定（樣品如有沉淀，應過濾后測定）。蘆丁濃度在0.00750.060mg/mL范圍內呈直線關系。6、注釋（1）方法精密度：對同一樣品在相同條件下，重復測定6次，其相對標準差為4.4%。（2）方法回收率：對總黃酮含量為1.52%的減肥茶加

24、入相似濃度的蘆丁標準品進行回收試驗，其平均回收率為103.2%。（3）對于以葡萄、山楂等有色水果味原料的樣品，可用未加鋁鹽試劑的樣液為空白或采用標準加入法進行測定，以避免樣液顏色對測定干擾而引起結果偏高。（第131頁）六、原花青素的分光光度測定法本法適用于各種植物組織、器官及其制劑（如葡萄子與松樹皮提取物）中原花青素含量的測定。1、方法提要原花青素（也稱縮合單寧）是黃烷3醇的寡聚體與多聚體，屬多份類化合物。與其他酚類化合物不同，黃烷醇（縮合單寧、單體、雙體等）在酸性介質中可與香草醛反應，生成在500nm處有最大吸收的有色物質，可通過比色測其含量。如無提純的原花青素，可用兒茶素代替4、測定步驟（

25、1）樣品中原花青素液的制備：植物材料經4倍體積丙酮+水（7+3，體積比）或者經60%甲醇提取，40C以下減壓蒸餾去除有機溶劑，水相再經乙醚洗滌后沉淀。冰凍干燥的固體原青花素制劑，直接溶于水中（先加少量甲醇助溶），制成原青花素液。原青花素液與5C下暗環(huán)境中保存?zhèn)溆?。?）樣品測定：用錫箔將試管（14mm*120mm）包裹嚴，僅留試管口用于加樣。向管內加入試樣0.5mL，再加3.0mL4%香草醛甲醇液混合，然后加入1,5mL濃鹽酸，徹底混勻，室溫下顯色15min，也可在暗環(huán)境下進行以上操作。最后在500nm處比色。（0.1mg原花青素在500nm處的吸收值為0,55）6、注釋（1）本方法的檢測范圍

26、為（5500）*10-3mg/0.5mL樣液。精密度與準確度大于1*10-3mg。（2）反應試管應用清潔劑浸泡24小時，徹底洗滌干凈。（3）進行比色時，用水作空白對照。（4）500nm處的OD值應控制在3以下。（5）試樣中花青素含量較高時，應從香草醛存在下所測A500nm值中減去無香草醛時所測值。（6）顯色液應避光放置。（第133頁）七、花青素的鐵鹽催化比色測定法1、方法提要原花青素氧化后能生成紅色的花青素。通常用鐵鹽催化比色法測定總量，利用硫酸高鐵銨的催化作用，以鹽（od550），與原花青素化學對照品比較，便可定量計算出樣品中原花青素的含量。4、測定步驟（1）標準曲線的繪制:分別移取上述不同

27、濃度系列使用液1.00mL置于10mL刻度試管中，加入9mL上述反應混合液，置于沸水與中加熱，待水浴溫度恢復至（99+1）C時開始計時，并塞緊塞子（勿搖勻），準確加熱40min后，立即取出，用冰水快速冷卻至室溫，以正丁醇定容至刻度線，塞緊后充分搖勻，在550nm處以空白管調零扣除背景，測定吸光度值OD550，并以最小二乘法繪制原青花素濃度（“g）吸光值OD55o曲線。（2）待測樣品液的制備：準確稱取膠囊內容物0.51.0g，加污水乙醇（遇醇溶性較差的樣品，可加入少量的蒸餾水促進溶解），溶解（對于軟膠囊取整粒稱重后再用小刀割破，用超聲波以乙醇多次提?。?定容至100mL,搖勻，即得到樣品儲備液。

28、再移取0.51mL儲備液（根據提取物濃度高低確定具體的量，使待測液原花青素濃度在0.050.20mg/mL范圍內）定容至50mL,搖勻得到待測樣品液。（3）樣品測定：移取1.00mL待測液依照上述標準曲線繪制同樣操作，測定OD550，查標準曲線，并計算原花青素的含量。6注釋（1）線性范圍：本法原花青素濃度在26.00416.0Mg范圍內，最低檢出限為4“g。（2）準確性：添加濃度為52.00208.0“g的標準（OD550在0.1570.520范圍內），3次測定平均回收率在90.64%109.5%。（3）精密度（重現(xiàn)性）：同一樣品液8次測定，相對標準差為2.13%2.98%。（4）干擾物質：常

29、見的維生素，蘆丁、類胡蘿卜素、食品抗氧化劑、各類油脂基體未見明顯干擾，由于多糖、蛋白質不溶于無水乙醇，故不會干擾測定。（第151頁）第四節(jié)酶、激素及內源性物質的檢測方法七、氯化高鐵血紅素的分光光度測定法本方法氯化高鐵血紅素的最低檢出濃度為0.15Mg/mL。1、方法提要氯化高鐵血紅素是以新鮮豬血經冰醋酸法提取加工而成的動物性補鐵劑，能被人體黏膜上皮細胞分解為原卟啉及二價鐵，從而進入血液被機體吸收和利用。氯化高鐵血紅素制品以氫氧化鈉溶液溶解和定容后，定量。4、測定步驟（1）樣品處理1）固體樣品（膠囊或片劑）鈉，使氯化高鐵血紅素充分溶解從而進入血液被機體吸收和利用。以1cm比色皿于波長385nm處

30、進行檢測準確稱取一定量樣品，一邊研磨，一邊加入（注意不能加熱溶解，否則引起結果偏高）與標準品比較進行0.1mol/L氫氧化，定容后備檢測。2 ）液體樣品：搖勻后準確吸取一定量樣品，用0.1mol/L氫氧化鈉稀釋后待測定。（2）標準曲線繪制：準確稱取經105C干燥至恒重的氯化高鐵血紅素標準品10.00mg，用0.3mol/L氫氧化鈉充分溶解并定容至100mL,容量瓶中。吸取此儲備液10mL，加于100mL容量瓶中，加入0.1mol/L氫氧化鈉定容至刻度，搖勻，配成10Mg/mL的標準使用液。分別準確吸取標準使用液0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL至10mL比色刻度

31、試管中，加0.1mol/L氫氧化鈉至刻度，以零管作空白調零，于385nm處測定吸光度，并繪制氯化高鐵血紅素含量吸光度標準曲線。氯化高鐵血紅素濃度在1.27.0Mg/mL范圍內吸光度與濃度呈直線關系（3）樣品測定：取上述樣品處理液依照標準曲線操作步驟測定385nm處的吸光度值，依據標準曲線查得氯化高鐵血紅素含量。（第201頁）第九節(jié)、其他化合物的檢測方法四、總蒽醌的分光光度測定法1、方法提要蒽醌類化合物經酸水解用氯仿提取后，再用稀堿液萃取，與1,8二羥基蒽醌對照品比較，在分光光度計530nm處比色定量。4、測定步驟（1）樣品處理：準確稱取均勻的樣品粉末0.52g或適量，液體樣品可取10mL左右（

32、視含量而定），置于200mL帶冷凝管的錐形瓶中，加5mol/L硫酸40mL，加熱回流水解2小時，稍冷后加氯仿30mL，水浴加熱回流1小時，分離出氯仿液，再加氯仿30mL，加熱回流水解30min，分離出氯仿液，再加氯仿20mL，如此反復，提取至氯仿無色位置，收集氯仿提取液過濾，將濾液移至容量瓶中，用氯仿定容至刻度（V1）,搖勻，精密吸取一定量（10mL左右）（V2）置分液漏斗中，用混合堿液（每次5mL）萃取至無色，將萃取液移至50mL量瓶中，用混合堿液調至刻度。6、注釋（1）總蒽醌包括游離蒽醌和結合蒽醌，游離蒽醌測定，樣品直接用氯仿提取至無色，再用混合堿液多次萃取氯仿提取液制得供試品溶液，而結合

33、蒽醌測定系先用5mol/L的硫酸水解，再用氯仿提取，再用混合堿液多次萃取氯仿提取液質的供試品溶液。（2）本方法線性范圍為0.1160.580mg/mL（3）本方法的平均回收率為97.0%（n=3）。（4）精密度RSD=1.2%（n=5）。（5）比色時注意比色液中是否混有氯仿微粒的干擾，而影響測定結果。（第224頁）十四、幾丁胺醣的脫乙酰度滴定法1、方法提要幾丁胺醣又稱殼聚糖、脫乙酰甲殼素、甲殼胺，由甲殼素在80C120C下經強堿長時間脫去乙?；玫?，化學名稱為（1,4）-2-氨基-2-脫氧-B-D葡聚糖。脫乙酰度為鑒定幾丁胺醣純度的重要指標。利用幾丁胺醣呈弱堿性的特點，用過量的鹽酸中和溶解，再以甲基橙為指示劑，以氫氧化鈉滴定中和剩余的鹽酸，可間接測定幾丁胺醣消耗鹽酸的量，從而計算出其脫乙酰度。4、測定步驟準確稱取0.25g幾丁胺醣樣品，置于100mL燒杯中，加入0.1mol/L鹽酸40mL，在室溫下用平頭玻棒搗碎試樣，并攪拌使其充分溶解，放置2小時，加一滴0.1%甲基橙作指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉滴定至紅色剛好消失，保持1min，計算消耗的氫氧化鈉標準溶液的體積。注：平行測定結果不大于0.2%，計算結果精確至小數(shù)點后一位。（第231頁）十八、總三萜的分光光