1、第十一章第十一章吩噻嗪類藥物的分析吩噻嗪類藥物的分析一、基本結(jié)構(gòu)1. 硫氮雜蒽母核SNRR10123456789R R：具有具有2 23 3碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物RR：-H-H，-Cl-Cl，-CF-CF3 3，-COCH-COCH3 3吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的為苯并噻嗪的衍生物，分子衍生物，分子結(jié)構(gòu)中均含有結(jié)構(gòu)中均含有硫氮雜蒽母核，硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)如下：基本結(jié)構(gòu)如下： 第一節(jié)第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)SNCl(CH2)3NCH3CH3HCl氯丙嗪SNCH2CHNCH3CH3C

2、H3HCl異丙嗪NSClCH2NNOH奮乃靜奮乃靜鹽酸氟奮乃靜鹽酸三氟拉嗪NSCF3CH2NNCH3鹽酸硫利達(dá)嗪NSSCH3NCH31.1.弱堿性弱堿性: :NSRR具有弱堿性，極弱具有弱堿性，極弱脂肪烴氨基、呱嗪及呱啶等脂肪烴氨基、呱嗪及呱啶等衍生物所含氮原子堿性較強(qiáng)，衍生物所含氮原子堿性較強(qiáng)，可用于鑒別和含量測(cè)定可用于鑒別和含量測(cè)定二、主要性質(zhì)：二、主要性質(zhì)：硫氮雜蒽環(huán)上硫原子為硫氮雜蒽環(huán)上硫原子為2 2價(jià)，易氧化呈色。母核易被氧化價(jià)，易氧化呈色。母核易被氧化成等不同的產(chǎn)物，隨取代基的不同，呈現(xiàn)不同的顏色。成等不同的產(chǎn)物，隨取代基的不同，呈現(xiàn)不同的顏色。2.2.氧化呈色氧化呈色：NSRR易

3、被硫酸、硝酸、過氧化氫、三易被硫酸、硝酸、過氧化氫、三氯化鐵氧化，可用于鑒別和含量氯化鐵氧化，可用于鑒別和含量測(cè)定，過程與產(chǎn)物比較復(fù)雜測(cè)定，過程與產(chǎn)物比較復(fù)雜NSRRONSRROO3.3.與金屬離子配合呈色：與金屬離子配合呈色：硫氮雜蒽環(huán)上硫原子有兩對(duì)硫氮雜蒽環(huán)上硫原子有兩對(duì)孤對(duì)電子，易與金屬離子絡(luò)合呈色。其氧化產(chǎn)物砜和孤對(duì)電子，易與金屬離子絡(luò)合呈色。其氧化產(chǎn)物砜和亞砜無此反應(yīng)。亞砜無此反應(yīng)。pH2PdCl2RRNS2Cl-SSPd2+ 4.4.紫外和紅外吸收：紫外和紅外吸收：含含S S、N N的三環(huán)共軛的大的三環(huán)共軛的大 體系。體系。S S、N N與苯環(huán)形成與苯環(huán)形成p-p- 共軛。共軛。紫

4、外吸收紫外吸收主要由主要由母核三環(huán)的母核三環(huán)的系統(tǒng)系統(tǒng)所產(chǎn)生，一般具所產(chǎn)生，一般具三個(gè)峰值三個(gè)峰值。204204209209nmnm（205nm205nm附附近）、近）、250250265265nmnm（254nm254nm附近）和附近）和300300325325nmnm（300nm300nm附近）。附近）。最強(qiáng)峰多在最強(qiáng)峰多在 250 250265265nmnm。 2 2位上取代基（位上取代基（RR）不同，會(huì)引起吸收峰發(fā)生位移。結(jié)不同，會(huì)引起吸收峰發(fā)生位移。結(jié)構(gòu)中構(gòu)中2 2價(jià)硫，易氧化，產(chǎn)物砜及亞砜有四個(gè)吸收峰。價(jià)硫，易氧化，產(chǎn)物砜及亞砜有四個(gè)吸收峰。5.5.紅外吸收光譜特性紅外吸收光譜特性

5、: :由于取代基由于取代基R R和和RR的不同，具的不同，具有不同的紅外光譜，已被藥典用于不同品種鑒別。有不同的紅外光譜，已被藥典用于不同品種鑒別。第二節(jié)第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)法一、化學(xué)法（一）與生物堿沉淀試劑反應(yīng)（一）與生物堿沉淀試劑反應(yīng) 吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物10位的含氮取代基有堿性，可與生物堿位的含氮取代基有堿性，可與生物堿沉淀試劑反應(yīng)沉淀試劑反應(yīng)（二）氧化顯色反應(yīng)：（二）氧化顯色反應(yīng)： )(紅色櫻紅呈色母核氧化劑 氧化劑氧化顯色：氧化劑氧化顯色：H H2 2SOSO4 4、溴水、溴水、FeClFeCl3 3、H H2 2O O2 2 吩噻嗪環(huán)為一良好電子給予體吩噻嗪環(huán)為一良

6、好電子給予體。相繼失去電子。相繼失去電子形成幾個(gè)不同的氧化階，而形成自由基型產(chǎn)物（形成幾個(gè)不同的氧化階，而形成自由基型產(chǎn)物（自自由基、半醌自由基由基、半醌自由基）和非離子型氧化產(chǎn)物（）和非離子型氧化產(chǎn)物（亞砜、亞砜、砜、砜、3-3-羥基吩噻嗪、吩噻酮等）羥基吩噻嗪、吩噻酮等）故可被多種氧化劑故可被多種氧化劑氧化而呈色。氧化而呈色。v 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 藥物名稱藥物名稱 硫硫 酸酸 硝硝 酸酸 過氧化氫過氧化氫 鹽酸氯丙嗪鹽酸氯丙嗪 顯紅色顯紅色, , 漸變淡黃色漸變淡黃色 鹽酸異丙嗪鹽酸異丙嗪 顯櫻桃紅色顯櫻桃紅色, ,放置放置 生成紅色沉淀生成紅色沉淀, ,加熱即溶解加熱即溶解, , 后顏色

7、漸變深后顏色漸變深 溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色 奮乃靜奮乃靜 顯深紅色顯深紅色; ;放置后放置后 紅色漸褪去紅色漸褪去 鹽酸氟奮乃靜鹽酸氟奮乃靜 顯淡紅色顯淡紅色, , 溫?zé)釡責(zé)?后變成紅褐色后變成紅褐色 鹽酸三氟拉嗪鹽酸三氟拉嗪 生成微帶紅色的白色沉淀生成微帶紅色的白色沉淀; ; 放放 置后置后, , 紅色變深紅色變深, , 加熱后變黃色加熱后變黃色 鹽酸硫利達(dá)嗪鹽酸硫利達(dá)嗪 顯藍(lán)色顯藍(lán)色 例：鹽酸氯丙嗪例：鹽酸氯丙嗪 ChPChP（20102010） 鑒別鑒別 （1 1）取本品）取本品 10mg10mg，加水，加水 1ml1ml溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸5 5滴，即顯紅

8、色，漸變成行色。滴，即顯紅色，漸變成行色。 例：鹽酸氯丙嗪（糖衣）片例：鹽酸氯丙嗪（糖衣）片 ChPChP（20102010） 鑒別鑒別 （1 1）取本品，除去糖衣，研細(xì)，稱取細(xì)粉適量，）取本品，除去糖衣，研細(xì)，稱取細(xì)粉適量，加水加水1ml,1ml,振搖使鹽酸氯丙嗪溶解，濾過；濾液照鹽酸氯振搖使鹽酸氯丙嗪溶解，濾過；濾液照鹽酸氯丙嗪項(xiàng)下的鑒別試驗(yàn)，顯相同反應(yīng)。丙嗪項(xiàng)下的鑒別試驗(yàn)，顯相同反應(yīng)。 （三）（三）與鈀離子絡(luò)合顯色與鈀離子絡(luò)合顯色Pd2+SS2Cl-NSRRPdCl2pH2利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與成有色絡(luò)合

9、物，如與癸氟奮乃靜癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。形成紅色絡(luò)合物。該反應(yīng)被該反應(yīng)被ChP（2010）用于吩噻嗪類藥物及其制劑）用于吩噻嗪類藥物及其制劑的鑒別。不受氧化產(chǎn)物亞砜和砜的干擾的鑒別。不受氧化產(chǎn)物亞砜和砜的干擾（四）含鹵素取代基的反應(yīng)（四）含鹵素取代基的反應(yīng)1.焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)2.顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物2位的含氟取代基，可經(jīng)位的含氟取代基，可經(jīng)有機(jī)破壞后，分解后的氟化物，在酸性條件下，與有機(jī)破壞后，分解后的氟化物，在酸性條件下，與茜草鋯試液反應(yīng)呈色。茜草鋯試液反應(yīng)呈色。（五）氯化物的鑒別反應(yīng)（五）氯化物的鑒別反應(yīng)1.硝酸銀的沉淀反應(yīng)硝酸銀的沉淀反應(yīng)2.氧化還原反應(yīng)氧化還原

10、反應(yīng)1 1、特征的紫外吸收：、特征的紫外吸收： 二、光譜法二、光譜法 鹽酸氯丙嗪及其制劑的有關(guān)物質(zhì)檢查鹽酸氯丙嗪及其制劑的有關(guān)物質(zhì)檢查COOHNH2COOHN2ClCOOHCl重氮化NaNO2,HClCu2Cl2ClH2NCOOHNHClCOOHClCu,縮合脫羧Fe第三節(jié)有關(guān)物質(zhì)的檢查第三節(jié)有關(guān)物質(zhì)的檢查NSClNSClNHCl環(huán)合S,I23-氯二苯胺 ()HH2-氯-10H-吩噻嗪 ()NSClH分離異構(gòu)體C6H5Cl,Cl縮合ClCH2CH2N(CH3)2,NaOHNH3CCH3CH2NSCl成鹽HCl,C2H5OHNH3CCH3CH2NSClHClNH3CHCH2NSCl3-(2-氯-

11、10H-吩噻嗪-10-基)-N-甲基-1-丙胺()NH3CCH2NSClNCH3CH3N-3-(2-10H-吩 噻 嗪 -10-基 )丙 基 -N,N,N-三 甲 基 -1,3-丙 二 胺 ( )其他烷基化吩噻嗪類化合物NH3CCH3CH2NSClO3-(2-氯-10H-吩噻嗪-10-基)-N,N-二甲基-1-丙胺S-氧化物()貯藏不當(dāng)產(chǎn)生的氧化物NH3CCH3CH2NSCl3-(2-氯-10H-吩噻嗪-10-基)-N,N-二甲基-1-丙胺N-氧化物()ONoImage主成分自身對(duì)照法離子對(duì)試劑，增加氯丙嗪的保留同時(shí)檢查多個(gè)有關(guān)物質(zhì)第四節(jié)第四節(jié) 含量測(cè)定含量測(cè)定酸堿滴定法酸堿滴定法 非水溶液滴

12、定法非水溶液滴定法 乙醇乙醇- -水溶液中的氫氧化鈉滴定法水溶液中的氫氧化鈉滴定法紫外分光光度法紫外分光光度法高效液相色譜法高效液相色譜法 吩噻嗪類原料藥物含量測(cè)定大多利用其側(cè)鏈脂吩噻嗪類原料藥物含量測(cè)定大多利用其側(cè)鏈脂肪胺堿性，國(guó)內(nèi)外藥典多采用非水滴定法測(cè)定本類藥肪胺堿性，國(guó)內(nèi)外藥典多采用非水滴定法測(cè)定本類藥物及其鹽酸鹽原料藥的含量。物及其鹽酸鹽原料藥的含量。非水溶液滴定法非水溶液滴定法一、酸堿滴定法一、酸堿滴定法【 ChPChP鹽酸氯丙嗪含量測(cè)定鹽酸氯丙嗪含量測(cè)定】 取本品約取本品約0.2g0.2g精精密稱定加密稱定加冰醋酸冰醋酸10ml10ml與醋酐與醋酐30ml30ml溶解后，照溶解后

13、，照電位電位滴定法滴定法，用高氯酸，用高氯酸 (0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定液滴定，并將滴滴定液滴定，并將滴定結(jié)果用定結(jié)果用空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)校正。校正。 每每1ml1ml高氯酸滴定液高氯酸滴定液(0.1mol/L) (0.1mol/L) 相當(dāng)于相當(dāng)于35.53mg35.53mg鹽酸鹽酸氯丙嗪。氯丙嗪。氯丙嗪的堿性較弱，氯丙嗪的堿性較弱，醋酐解離生成醋酐解離生成醋酐合乙酰氧離子比醋酸合質(zhì)子的醋酐合乙酰氧離子比醋酸合質(zhì)子的酸性強(qiáng)，更利于增加氯丙嗪的堿性酸性強(qiáng)，更利于增加氯丙嗪的堿性注意：注意：滴定劑的穩(wěn)定性滴定劑的穩(wěn)定性 非水溶液滴定法所用的溶劑為醋非水溶液滴定法所用的溶劑為醋酸，具

14、有揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，故高氯酸滴定液酸，具有揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，故高氯酸滴定液的濃度受溫度的影響。若滴定樣品與標(biāo)定的濃度受溫度的影響。若滴定樣品與標(biāo)定HClOHClO4 4溶液溶液時(shí)的溫度不一致，溫差超過時(shí)的溫度不一致，溫差超過1010時(shí)時(shí), ,應(yīng)重新標(biāo)定；溫應(yīng)重新標(biāo)定；溫差未超過差未超過1010時(shí)，應(yīng)將高氯酸滴定液的濃度用下列時(shí)，應(yīng)將高氯酸滴定液的濃度用下列公式加以校正：公式加以校正：N測(cè)=N標(biāo) / 1+0.0011（t測(cè)-t標(biāo)）乙醇乙醇- -水溶液中的氫氧化鈉滴定法水溶液中的氫氧化鈉滴定法 吩噻嗪類藥物的鹽酸鹽的水溶液吩噻嗪類藥物的鹽酸鹽的水溶液顯酸性顯酸性，在乙醇，在乙醇- -水溶液

15、中，可采用氫氧化鈉滴定液測(cè)定其含量。水溶液中，可采用氫氧化鈉滴定液測(cè)定其含量。ChP鹽酸異丙嗪含量測(cè)定采用此法鹽酸異丙嗪含量測(cè)定采用此法操作：操作：取取1010片，除去糖衣后，精稱，研細(xì)片，除去糖衣后，精稱，研細(xì)稱取粉稱取粉末適量末適量加水、鹽酸溶解加水、鹽酸溶解過濾，取濾液于過濾，取濾液于249249nmnm處處測(cè)定。測(cè)定。已知：鹽酸異丙嗪已知：鹽酸異丙嗪E=910E=910，即可計(jì)算，即可計(jì)算優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：不需標(biāo)準(zhǔn)品不需標(biāo)準(zhǔn)品缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：儀器精密度要求高儀器精密度要求高測(cè)定中注意問題測(cè)定中注意問題：避光、防止氧化。避光、防止氧化。1.1.直接分光光度法：直接分光光度法：v鹽酸異丙嗪片的測(cè)定鹽

16、酸異丙嗪片的測(cè)定二、紫外分光光度法二、紫外分光光度法 鹽酸異丙嗪：片劑鹽酸異丙嗪：片劑測(cè)定波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)為249249nmnm（ 為為910910）；）；注射液注射液為了消除抗氧劑維生為了消除抗氧劑維生素素C C（ max max 243nm243nm）對(duì)測(cè)定的干擾，測(cè)定波長(zhǎng)改對(duì)測(cè)定的干擾，測(cè)定波長(zhǎng)改為為299299nmnm（ 為為108108）。）。 1%1cmE1%1cmE 同理，同理，鹽酸氯丙嗪片劑鹽酸氯丙嗪片劑測(cè)定波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)為254254nmnm（ 為為915915）；）；注射液注射液測(cè)定波長(zhǎng)改為測(cè)定波長(zhǎng)改為306306nmnm（ 為為115115）。）。 1%1cmE1%1cmE

17、v鹽酸異丙嗪注射劑的測(cè)定鹽酸異丙嗪注射劑的測(cè)定波長(zhǎng)的選擇波長(zhǎng)的選擇1 1、鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定，選擇在、鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定，選擇在299nm299nm波長(zhǎng)處測(cè)定，其原因是波長(zhǎng)處測(cè)定，其原因是 （C C）A A、299nm299nm處是它的最大吸收波長(zhǎng)處是它的最大吸收波長(zhǎng) B B、為了排除其氧化產(chǎn)物的影響、為了排除其氧化產(chǎn)物的影響C C、為了排除抗氧劑的干擾、為了排除抗氧劑的干擾 D D、在、在299nm299nm處，它的吸收值最穩(wěn)定處，它的吸收值最穩(wěn)定E E、在、在299nm299nm處測(cè)定誤差最小處測(cè)定誤差最小2. 2. 提取后分光光度法提取后分光光度法 鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯

18、丙嗪注射液計(jì)算。為以，測(cè)定鹽酸氯丙嗪乙醚層氯丙嗪鹽酸氯丙嗪鹽酸萃取乙醚提取氨水堿化 915 E 1254 1%1cmmaxAnm3.3.提取后雙波長(zhǎng)分光光度法：提取后雙波長(zhǎng)分光光度法：用于校正樣品中氧化產(chǎn)物對(duì)測(cè)定影響用于校正樣品中氧化產(chǎn)物對(duì)測(cè)定影響（1 1）原理）原理 在待測(cè)組分（在待測(cè)組分（a a）的最大吸收波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)，的最大吸收波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)， 1 1）處測(cè)定待測(cè)組分和干擾組分（）處測(cè)定待測(cè)組分和干擾組分（b b）吸收度的總吸收度的總和；另選一適當(dāng)波長(zhǎng)（參比波長(zhǎng)，和；另選一適當(dāng)波長(zhǎng)（參比波長(zhǎng)， 2 2）測(cè)定吸收度，）測(cè)定吸收度，并使干擾組分在測(cè)定波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)處的吸收度相并使干擾組分在

19、測(cè)定波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)處的吸收度相等，即等，即 ，而待測(cè)組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收，而待測(cè)組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度的差值足夠大。度的差值足夠大。bbAA21abbaaababababaCAAAlCAAAAAAAAA )()()(212121221121（2 2）定量依據(jù)）定量依據(jù) 樣品在二波長(zhǎng)下吸收度差值（樣品在二波長(zhǎng)下吸收度差值（ A A）：）： 即，吸收度差值（即，吸收度差值（ A A）僅與待測(cè)組分的濃度有關(guān)，僅與待測(cè)組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，干擾組分的干擾被消除。而與干擾組分無關(guān)，干擾組分的干擾被消除。 雙波長(zhǎng)分光光度法雙波長(zhǎng)分光光度法波長(zhǎng)選擇：波長(zhǎng)選擇：測(cè)定波長(zhǎng)測(cè)定波長(zhǎng) 測(cè)，參比波長(zhǎng)測(cè)

20、，參比波長(zhǎng) 參參A A標(biāo)標(biāo) 測(cè) 參A A樣樣A樣=A測(cè) - A參 A標(biāo)= A測(cè) - A參C樣= C標(biāo)A樣A標(biāo) 干擾組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相等干擾組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相等 待測(cè)組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相差足夠大待測(cè)組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相差足夠大 （3 3）必要條件）必要條件（4 4）應(yīng)）應(yīng)用用 氯丙嗪的最大吸收波長(zhǎng)為氯丙嗪的最大吸收波長(zhǎng)為254254nm,nm,其氧化產(chǎn)物在其氧化產(chǎn)物在此波長(zhǎng)也有吸收此波長(zhǎng)也有吸收, ,同時(shí)在同時(shí)在277277nmnm處氧化產(chǎn)物也有吸收處氧化產(chǎn)物也有吸收, ,且其吸收度與在且其吸收度與在254254nmnm處吸收度相等處吸收度相等, ,而氯丙嗪在此而氯丙嗪在此波

21、長(zhǎng)處無吸收。波長(zhǎng)處無吸收。A=AA=A254254-A-A277277萃取：萃?。撼タ寡鮿┑母蓴_除去抗氧劑的干擾氧化產(chǎn)物鹽酸鹽鹽酸氯丙嗪乙醚層氧化產(chǎn)物氯丙嗪鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸萃取乙醚提取濃氨堿化例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定（例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定（USP32-NF27)USP32-NF27) 雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定：雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定：排除氧化產(chǎn)物的干擾排除氧化產(chǎn)物的干擾 測(cè)定波長(zhǎng)測(cè)定波長(zhǎng) 254 254nmnm 參比波長(zhǎng)參比波長(zhǎng) 277 277nm nm 對(duì)照法定量對(duì)照法定量(A254-A277)樣(A254-A277)標(biāo)C標(biāo) 12.5 /V 抗氧劑維生素抗氧劑維生素C C的二

22、階導(dǎo)數(shù)光譜近似為接近基線的二階導(dǎo)數(shù)光譜近似為接近基線的一條直線，不干擾鹽酸氯丙嗪的測(cè)定。的一條直線，不干擾鹽酸氯丙嗪的測(cè)定。 4. 4. 二階導(dǎo)數(shù)分光光度法二階導(dǎo)數(shù)分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪注射液 因此鹽酸氯丙嗪可從其二階導(dǎo)數(shù)光譜量取峰因此鹽酸氯丙嗪可從其二階導(dǎo)數(shù)光譜量取峰266266nmnm谷谷254254nmnm距離，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。距離，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。 原理：吩噻嗪類藥物可與一些金屬離子（如原理：吩噻嗪類藥物可與一些金屬離子（如PdPd2+2+）在適在適當(dāng)當(dāng)pHpH值的溶液中形成有色的絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測(cè)定。值的溶液中形成有色的絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測(cè)定。5.5.鈀離子比色法

23、鈀離子比色法Pd2+SS2Cl-NSRRPdCl2pH2優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：鈀離子比色法可選擇性地用于未被氧化的吩噻鈀離子比色法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測(cè)定嗪類藥物的測(cè)定 反應(yīng)在反應(yīng)在 pH2pH20.1 0.1 的緩沖液中進(jìn)行的緩沖液中進(jìn)行，對(duì)照法定量處測(cè)定在紅色絡(luò)合物吩噻嗪類藥物A nm500 Pdmaxmax0.1pH22（1 1）鈀離子試劑：）鈀離子試劑： PdCl PdCl2 2和十二烷基硫酸酯鈀鹽。和十二烷基硫酸酯鈀鹽。n用用PdClPdCl2 2時(shí)，形成的有色絡(luò)合物水中溶解度小時(shí)，形成的有色絡(luò)合物水中溶解度小, ,樣樣品量大時(shí)品量大時(shí), ,產(chǎn)生沉淀。產(chǎn)生沉淀。十二烷基硫酸酯

24、鈀鹽十二烷基硫酸酯鈀鹽, ,其絡(luò)合物溶解度大其絡(luò)合物溶解度大, ,吸收強(qiáng)吸收強(qiáng)度增大（約度增大（約2 2倍）。倍）。討論：討論：三、高效液相色譜法：三、高效液相色譜法：（一）反相高效液相色譜法（一）反相高效液相色譜法固定相：十八烷基鍵合硅膠固定相：十八烷基鍵合硅膠流動(dòng)相：水流動(dòng)相：水-甲醇，水甲醇，水-乙腈中加入含氮堿性試劑（掃乙腈中加入含氮堿性試劑（掃尾劑）如尾劑）如二乙胺、三乙胺二乙胺、三乙胺等。等。抑制或掩蔽固定相抑制或掩蔽固定相表面的游離硅醇基表面的游離硅醇基的活性的活性離子型化合物或能解離的化合物用常規(guī)離子型化合物或能解離的化合物用常規(guī)HPLCHPLC分離時(shí)，分離時(shí)，常會(huì)出現(xiàn)色譜峰拖

25、尾和保留值不穩(wěn)定等問題，用常會(huì)出現(xiàn)色譜峰拖尾和保留值不穩(wěn)定等問題，用離子離子對(duì)色譜對(duì)色譜則能解決以上問題。則能解決以上問題。（二）離子對(duì)色譜法（二）離子對(duì)色譜法離子對(duì)色譜離子對(duì)色譜是將離子對(duì)提取與色譜技術(shù)相結(jié)合，適是將離子對(duì)提取與色譜技術(shù)相結(jié)合，適用于用于pKapKa在在2-82-8的弱酸和弱堿性化合物的分離。的弱酸和弱堿性化合物的分離。 通常使用反相通常使用反相ion-pair ion-pair 色譜，因離子對(duì)試劑在色譜，因離子對(duì)試劑在極性流動(dòng)相中易于溶解，并易于調(diào)整控制反離子的極性流動(dòng)相中易于溶解，并易于調(diào)整控制反離子的濃度和流動(dòng)相的濃度和流動(dòng)相的pHpH值。值。1.1.原理：原理：在流動(dòng)

26、相中加入與成解離狀態(tài)的待測(cè)組在流動(dòng)相中加入與成解離狀態(tài)的待測(cè)組分離子電荷相反的離子對(duì)試劑，使之與待測(cè)組分分離子電荷相反的離子對(duì)試劑，使之與待測(cè)組分離子形成離子對(duì)，增加待測(cè)組分在非極性固定相離子形成離子對(duì)，增加待測(cè)組分在非極性固定相中的分配，從而改善其色譜保留與分離行為。中的分配，從而改善其色譜保留與分離行為。對(duì)于酸類樣品（對(duì)于酸類樣品（RCOOHRCOOH），），用四丁基銨鹽（用四丁基銨鹽（TBATBA+ +X X- -）RCOOHRCOOHRCOORCOO- - + H+ H+ +TBATBA+ +X X- -TBATBA+ + + X+ X- -RCOORCOO- - + TBA+ TBA

27、+ + RCOORCOO- - TBATBA+ + + + + +-離子對(duì)試劑離子對(duì)試劑因其烷基的疏水性，為因其烷基的疏水性，為C18C18或或C8C8固定相固定相所吸附，生成動(dòng)態(tài)覆蓋的離子交換劑，通過離子交所吸附，生成動(dòng)態(tài)覆蓋的離子交換劑，通過離子交換，保留樣品離子換，保留樣品離子對(duì)于堿性樣品對(duì)于堿性樣品B B，用烷基磺酸鹽（用烷基磺酸鹽（R-SOR-SO3 3NaNa）做離做離子對(duì)試劑。子對(duì)試劑。B + HB + HBH+R-SOR-SO3 3NaNaR-SOR-SO3 3- - + + NaNa+ +BH+ + R-SO+ R-SO3 3- - BH+ R-SOR-SO3 3- - （1

28、 1）離子對(duì)試劑的性質(zhì)和濃度：）離子對(duì)試劑的性質(zhì)和濃度：在一定范圍內(nèi)，在一定范圍內(nèi)，離子對(duì)試劑濃度增加，保留增加，通常所用濃度為離子對(duì)試劑濃度增加，保留增加，通常所用濃度為0.000.003mol/ml3mol/ml0.01mol/ml0.01mol/ml。（2 2）流動(dòng)相流動(dòng)相PHPH：是是IPCIPC分離的重要條件，酸性樣品分離的重要條件，酸性樣品PHPH應(yīng)應(yīng)大于大于PkaPka兩個(gè)單位，使其解離成兩個(gè)單位，使其解離成RCOORCOO- - ，堿性樣堿性樣品，品，PHPH應(yīng)應(yīng)小于小于PkaPka兩個(gè)單位，使其解離成兩個(gè)單位，使其解離成BHBH+ +。（3 3）流動(dòng)相的組成：）流動(dòng)相的組成：

29、（4 4）離子強(qiáng)度：）離子強(qiáng)度：2.2.影響離子對(duì)形成的條件影響離子對(duì)形成的條件樣品中含有樣品中含有- -COOH,-SOCOOH,-SO3 3H H基團(tuán)時(shí)基團(tuán)時(shí), ,選用的離子對(duì)試選用的離子對(duì)試劑應(yīng)是劑應(yīng)是帶正電荷的有機(jī)銨鹽，帶正電荷的有機(jī)銨鹽，以此增加樣品陰離子以此增加樣品陰離子在反相色譜中的保留值，選用的流動(dòng)相一般都為甲在反相色譜中的保留值，選用的流動(dòng)相一般都為甲醇醇/ /水；水；除了加入離子對(duì)試劑外，還要加入磷酸鹽或其他除了加入離子對(duì)試劑外，還要加入磷酸鹽或其他緩沖液，以控制流動(dòng)相的酸度，從而使這些酸性或緩沖液，以控制流動(dòng)相的酸度，從而使這些酸性或堿性官能團(tuán)能完全解離，最大程度形成離子

30、對(duì)；堿性官能團(tuán)能完全解離，最大程度形成離子對(duì)；3.3.離子對(duì)試劑和其他添加劑的一般選用規(guī)則離子對(duì)試劑和其他添加劑的一般選用規(guī)則樣品中含有樣品中含有- -NHNH2 2，-NH-NH-基團(tuán)或其他陽(yáng)離子時(shí)，基團(tuán)或其他陽(yáng)離子時(shí)，選用的離子對(duì)試劑應(yīng)是選用的離子對(duì)試劑應(yīng)是烷基磺酸鹽烷基磺酸鹽（如戊烷磺酸（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）其他鹽類；鈉、庚烷磺酸鈉）其他鹽類；樣品中同時(shí)含有樣品中同時(shí)含有- -NHNH2 2，-COOH-COOH，-SO-SO3 3H H等不同性等不同性質(zhì)的基團(tuán)時(shí)，則規(guī)則或都適用。質(zhì)的基團(tuán)時(shí)，則規(guī)則或都適用。pH3.5BH+C7H15SO2O-BH+C7H15SO2O-4.測(cè)定吩噻

31、嗪類藥物時(shí)，主要采用烷基磺酸鹽陰離子測(cè)定吩噻嗪類藥物時(shí)，主要采用烷基磺酸鹽陰離子對(duì)試劑（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類。對(duì)試劑（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類。 影響條件：影響條件：流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對(duì)試離子對(duì)試劑的非極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，劑的非極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)保留時(shí)間越長(zhǎng)（十二烷基磺酸鈉庚烷磺酸鈉戊烷（十二烷基磺酸鈉庚烷磺酸鈉戊烷磺酸鈉）?；撬徕c）。例：鹽酸異丙嗪注射液的含量測(cè)定法例：鹽酸異丙嗪注射液的含量測(cè)定法色譜條件色譜條件 色譜柱色譜柱: :苯基柱苯基柱（30

32、cmm30cmm4.6mm4.6mm）；）；流動(dòng)相為流動(dòng)相為: : 0.0.2mol/L2mol/L戊烷磺酸鈉戊烷磺酸鈉溶液溶液- -乙腈乙腈- -冰醋酸冰醋酸 （100: 100: 1100: 100: 1）；）；檢測(cè)波長(zhǎng)檢測(cè)波長(zhǎng): :為為254254nmnm；流速流速: :約約1.51.5ml/minml/min。對(duì)照品溶液制備：對(duì)照品溶液制備：取異丙嗪取異丙嗪對(duì)照品對(duì)照品適量，精密稱定，適量，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成每用流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 ml1 ml中約含中約含0.1mg0.1mg的藥物。的藥物。供試品溶液制備：供試品溶液制備：精密量取本品適量，用流動(dòng)相稀釋精密量取本品適量，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液至刻度，搖勻；精密量取上述溶液10.0 ml10.0