1、We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology白血病突變組分析基因突變篩查陸道培白血病突變組分析基因突變篩查陸道培血液腫瘤中心劉紅星血液腫瘤中心劉紅星We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology腫瘤突變組（腫瘤突變組（mutaome）于于2012年年8月陸道培血液月陸道培血液腫瘤中心主辦的血液病診斷腫瘤中心主辦的血液病診斷和治療研討會上和治療研討會上首次提出首次提出“突變組突變組”的概念的概念每一個(gè)腫瘤細(xì)胞都是

2、多種基因突變積累的結(jié)果每一個(gè)腫瘤細(xì)胞都是多種基因突變積累的結(jié)果 在特定的患者、特定時(shí)間，其腫瘤細(xì)胞攜帶的突變組合不同在特定的患者、特定時(shí)間，其腫瘤細(xì)胞攜帶的突變組合不同 不同的突變組合決定了每個(gè)不同的突變組合決定了每個(gè)患者獨(dú)特的患者獨(dú)特的發(fā)病過程、病理生理學(xué)表發(fā)病過程、病理生理學(xué)表現(xiàn)、治療反應(yīng)和病情現(xiàn)、治療反應(yīng)和病情發(fā)展發(fā)展 有明確意義的基因突變越來越多被鑒定有明確意義的基因突變越來越多被鑒定全面了解腫瘤基因突變情況全面了解腫瘤基因突變情況 更精細(xì)地診斷分型、評估預(yù)后、制定個(gè)體化治療方案更精細(xì)地診斷分型、評估預(yù)后、制定個(gè)體化治療方案 基因突變篩查是經(jīng)濟(jì)有效的方法基因突變篩查是經(jīng)濟(jì)有效的方法We

3、 Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology常見的腫瘤基因異常類型常見的腫瘤基因異常類型融合基因：融合基因：染色體宏觀結(jié)構(gòu)異?；蛲蛔儯夯蛲蛔儯簡蝹€(gè)或多個(gè)堿基異常GTJAK2 V617F基因表達(dá)基因表達(dá)異常異常：原癌基因活化或抑癌基因失活，WT1等We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology白血病分子診斷應(yīng)用現(xiàn)狀和展望白血病分子診斷應(yīng)用現(xiàn)狀和展望融合基因融合基因 歷史：發(fā)現(xiàn)染色體易位歷史：發(fā)現(xiàn)染色體易位 鑒定融

4、合基因鑒定融合基因 轉(zhuǎn)錄組測序轉(zhuǎn)錄組測序 將發(fā)現(xiàn)更多隱匿性易位或微缺失形將發(fā)現(xiàn)更多隱匿性易位或微缺失形成的融合基因成的融合基因基因突變基因突變 傳統(tǒng)方法不易發(fā)現(xiàn)，目前鑒定較少傳統(tǒng)方法不易發(fā)現(xiàn)，目前鑒定較少 腫瘤外顯子組測序大大促進(jìn)了腫瘤基因突變的鑒定腫瘤外顯子組測序大大促進(jìn)了腫瘤基因突變的鑒定原癌基因原癌基因 正常組織器官也可能表達(dá)，特異性和靈敏性的問題正常組織器官也可能表達(dá)，特異性和靈敏性的問題TranslocationWe Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology腫瘤的腫瘤的N次打擊和克隆演變次打擊

5、和克隆演變Michael R. Stratton et. al, NATURE, Vol 458, 9 April 2009We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology每個(gè)腫瘤都是基因變異的團(tuán)伙在犯罪每個(gè)腫瘤都是基因變異的團(tuán)伙在犯罪主犯主犯 JAK2、MPL、CEBPA、NPM1等突變等突變幫兇幫兇 KIT、FLT3、DNMT3A、TET2、P53等突變等突變從犯從犯 原癌基因原癌基因活化：活化：WT1、HOX11不明不明真相的參與者真相的參與者 PIGA等等突變突變過客突變過客突變 無功能的突變。我

6、只是來打醬油的。無功能的突變。我只是來打醬油的。We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology不同突變在腫瘤發(fā)生中的作用不同不同突變在腫瘤發(fā)生中的作用不同信號信號傳導(dǎo)傳導(dǎo) NRAS、KRAS、PTPN11、CBL、JAK2、MPL。轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子 RUNX1、ETV6。表觀遺傳學(xué)表觀遺傳學(xué) TET2、DNMT3A、IDH1、IDH2、ASXL、EZH2。轉(zhuǎn)錄剪接轉(zhuǎn)錄剪接 SF3B1、SRSF2、U2AF1。抑癌基因失活、基因修復(fù)缺陷抑癌基因失活、基因修復(fù)缺陷 TP53、FA相關(guān)基因突變。相關(guān)基因突變。

7、免疫監(jiān)視缺陷免疫監(jiān)視缺陷 HLA缺失、缺失、PRF1突變。突變。We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology腫瘤突變組分析臨床應(yīng)用的范例腫瘤突變組分析臨床應(yīng)用的范例97.3%的的AML患者攜帶其中患者攜帶其中一種或以上的基因突變一種或以上的基因突變預(yù)后差：預(yù)后差：FLT3-ITD、MLL-PTD、ASXL1、PHF6預(yù)后好：預(yù)后好：CEBPA、IDH2、NPM1伴伴IDH1/IDH2突變突變伴伴DNMT3A、NPM1突變、突變、MLL易位患者，采用大劑量的易位患者，采用大劑量的柔紅霉素治療可提高生存率

8、柔紅霉素治療可提高生存率Prognostic Relevance of Integrated Genetic Profiling in Acute Myeloid LeukemiaJay P. Patel, et al., N Engl J Med 2012;366:1079-89We Promote the Applications & Innovations of Molecular HematologyMPN中常見的基因突變中常見的基因突變We Promote the Applications & Innovations of Molecular HematologyMD

9、S中常見的基因突變中常見的基因突變We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology不同類型白血病間的分子克隆演變不同類型白血病間的分子克隆演變We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology腫瘤突變組分析臨床應(yīng)用腫瘤突變組分析臨床應(yīng)用的的意義意義只只根據(jù)一種融合基因分類的患者仍有異質(zhì)性根據(jù)一種融合基因分類的患者仍有異質(zhì)性 AML1-ETO VS. AML1-ETO+KIT突變突變只檢測一種突變也是不夠的只檢測一種突變

10、也是不夠的 NPM1 VS. FLT3 VS. NPM1+FLT3新的突變新的突變出現(xiàn)可預(yù)示出現(xiàn)可預(yù)示臨床進(jìn)展臨床進(jìn)展 急變、耐藥急變、耐藥等等對腫瘤突變組的全面了解有助于指導(dǎo)對腫瘤突變組的全面了解有助于指導(dǎo)個(gè)體化治療個(gè)體化治療We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology分子診斷的發(fā)展趨勢及挑戰(zhàn)分子診斷的發(fā)展趨勢及挑戰(zhàn)Lucy A. Godley, DOI:0.1056/NEJMe1200409We Promote the Applications & Innovations of Molec

11、ular Hematology分子診斷臨床應(yīng)用遇到的問題分子診斷臨床應(yīng)用遇到的問題臨床醫(yī)師如何認(rèn)識新發(fā)現(xiàn)的基因突變的意義？臨床醫(yī)師如何認(rèn)識新發(fā)現(xiàn)的基因突變的意義？實(shí)驗(yàn)室如果向臨床醫(yī)師推薦新的項(xiàng)目？實(shí)驗(yàn)室如果向臨床醫(yī)師推薦新的項(xiàng)目？如何提高突變的檢測靈敏度？如何提高突變的檢測靈敏度？如何降低檢測費(fèi)用？提高發(fā)現(xiàn)分子標(biāo)記的速度？如何降低檢測費(fèi)用？提高發(fā)現(xiàn)分子標(biāo)記的速度？We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology我們的解決方案我們的解決方案 - 基因突變篩查基因突變篩查AML基因突變篩查（基因突變篩查（11

12、種）種） CEBPA；DNMT3A；FLT3-ITD/TKD；IDH1；IDH2；KIT；KRAS；NPM1；NRAS；TET2；WT1ALL基因突變篩查（基因突變篩查（11種）種） FBXW7；FLT3；KRAS；IKZF1；JAK1；JAK2；NOTCH1；NRAS；PAX5；PHF6；MLL-PTDMPN基因突變篩查（基因突變篩查（7種）種） IDH1；IDH2；JAK2；KIT；MPL；SH2B3(LNK)；TET2MDS基因突變篩查（基因突變篩查（8種）種） DNMT3A；IDH1；IDH2；JAK2；MPL；SF3B1；SRSF2；TET2We Promote the Applic

13、ations & Innovations of Molecular Hematology不遠(yuǎn)的將來：高通量基因測序的應(yīng)用不遠(yuǎn)的將來：高通量基因測序的應(yīng)用降低單位檢測成本降低單位檢測成本 加入更多的檢測內(nèi)容加入更多的檢測內(nèi)容 外顯子組突變分析，外顯子組突變分析，真正的腫真正的腫瘤瘤“全突變組全突變組”分析成為可能分析成為可能深度測序深度測序 突變突變MRD監(jiān)測監(jiān)測IG、TCR免疫組庫分析免疫組庫分析We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology基因突變篩查的特點(diǎn)和意義基因突變篩查的特點(diǎn)和意義同一患

14、者可能同時(shí)存在多種基因突變同一患者可能同時(shí)存在多種基因突變 可與融合基因或其它基因突變同時(shí)存在可與融合基因或其它基因突變同時(shí)存在 同一患者的同一基因可能存在不同的突變同一患者的同一基因可能存在不同的突變 克隆性判斷；診斷分型；預(yù)后判斷；個(gè)體化用藥克隆性判斷；診斷分型；預(yù)后判斷；個(gè)體化用藥基因突變在疾病發(fā)展過程中可能會變化基因突變在疾病發(fā)展過程中可能會變化 FLT3、IKZF1等，與疾病進(jìn)展有關(guān)等，與疾病進(jìn)展有關(guān)目前大多數(shù)基因突變作為目前大多數(shù)基因突變作為MRD監(jiān)測指標(biāo)有困難監(jiān)測指標(biāo)有困難 用高通量測序進(jìn)行深度測序分析可幫助實(shí)現(xiàn)用高通量測序進(jìn)行深度測序分析可幫助實(shí)現(xiàn)可以用初診時(shí)的石蠟、涂片標(biāo)本回

15、顧性分析可以用初診時(shí)的石蠟、涂片標(biāo)本回顧性分析 幫助選擇合適的治療方案、評估預(yù)后等幫助選擇合適的治療方案、評估預(yù)后等We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology病例病例男，男，30歲，形態(tài)學(xué)為歲，形態(tài)學(xué)為M1型，柔紅霉素型，柔紅霉素+阿糖胞阿糖胞苷化療一療程后苷化療一療程后NPM1突變陽性突變陽性 定量定量42.15%FLT3突變陽性突變陽性31種融合基因陰性，種融合基因陰性，HOX11表達(dá)陽性表達(dá)陽性形態(tài)學(xué)證明未緩解，從當(dāng)?shù)蒯t(yī)院轉(zhuǎn)某大醫(yī)院治療形態(tài)學(xué)證明未緩解，從當(dāng)?shù)蒯t(yī)院轉(zhuǎn)某大醫(yī)院治療We Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology白血病分子診斷的建議白血病分子診斷的建議初診患者初診患者 骨髓或骨髓或外周血外周血標(biāo)本，融合基因篩查、基因突變篩查標(biāo)本，融合基因篩查、基因突變篩查 后續(xù)根據(jù)融合基因、基因突變結(jié)果定點(diǎn)監(jiān)測后續(xù)根據(jù)融合基因、基因突變結(jié)果定點(diǎn)監(jiān)測外地治療后來診患者外地治療后來診患者 腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞30%： 骨髓或外周血標(biāo)本，融合基因骨髓或外周血標(biāo)本，融合基因篩查、基因突變篩查篩查、基因突變篩查 腫