1、1注射制劑無菌保證注射制劑無菌保證工藝技術要求的探討工藝技術要求的探討注射劑注射劑2008新法規(guī)解析及應對方案系列培訓班新法規(guī)解析及應對方案系列培訓班2注射制劑無菌保證工藝技術要求注射制劑無菌保證工藝技術要求一、前言一、前言二、注射劑基本技術的要求二、注射劑基本技術的要求三、無菌保證工藝研究與驗證要求三、無菌保證工藝研究與驗證要求 四、無菌藥品生產(chǎn)關鍵工藝的法規(guī)要求四、無菌藥品生產(chǎn)關鍵工藝的法規(guī)要求 (以以最終濕熱滅菌藥品工藝最終濕熱滅菌藥品工藝為例為例)3一、前一、前 言言4 1970年年1975年，美國因輸液污染所導致年，美國因輸液污染所導致的并發(fā)敗血癥事件有的并發(fā)敗血癥事件有400多起，

2、這在美國國多起，這在美國國內引起強烈的反響。內引起強烈的反響。FDA從從1975年開始進年開始進行了深入、廣泛的調查，發(fā)現(xiàn)這些事件并行了深入、廣泛的調查，發(fā)現(xiàn)這些事件并不是出于企業(yè)違規(guī)生產(chǎn)，而是整個生產(chǎn)體不是出于企業(yè)違規(guī)生產(chǎn)，而是整個生產(chǎn)體系中的不穩(wěn)定因素所致。系中的不穩(wěn)定因素所致。 此后，此后，F(xiàn)DA于于1976年首次將驗證列入年首次將驗證列入GMP。承認在無保證系統(tǒng)中，過程控制優(yōu)于結果承認在無保證系統(tǒng)中，過程控制優(yōu)于結果檢驗。檢驗。 5 30多年過去了，注射劑染菌所致的藥難事多年過去了，注射劑染菌所致的藥難事件降臨我國，件降臨我國，“欣弗欣弗”事件使得無菌制劑事件使得無菌制劑的無菌保障問題

3、成為公眾關注的焦點。的無菌保障問題成為公眾關注的焦點。 -無菌檢查的局限性無菌檢查的局限性-研究無菌保證的途徑研究無菌保證的途徑6面臨的主要問題面臨的主要問題1. 劑型選擇不合理劑型選擇不合理 2. 無菌保證工藝選擇不合理無菌保證工藝選擇不合理3. 無菌保證工藝研究不全面無菌保證工藝研究不全面4. 無菌保證工藝缺乏必要的驗證無菌保證工藝缺乏必要的驗證5. GMP與發(fā)達國家要求還存在差距與發(fā)達國家要求還存在差距 7 整頓和規(guī)范藥品研制、生產(chǎn)、流通秩整頓和規(guī)范藥品研制、生產(chǎn)、流通秩序工作方案序工作方案（國食藥監(jiān)辦（國食藥監(jiān)辦2006465號）要求號）要求: 嚴格審評審批化學藥品注射劑、中藥嚴格審評

4、審批化學藥品注射劑、中藥注射劑和多組分生化注射劑等安全性風險注射劑和多組分生化注射劑等安全性風險較大的較大的3類品種。類品種。8二、注射劑基本技術的要求二、注射劑基本技術的要求9審評審批要求審評審批要求:一、國家局已受理但尚未批準注冊的化學藥一、國家局已受理但尚未批準注冊的化學藥品注射劑和多組分生化藥注射劑應參照品注射劑和多組分生化藥注射劑應參照技術要求技術要求進行研究。進行研究。二、已經(jīng)批準注冊的化學藥品注射劑和多組二、已經(jīng)批準注冊的化學藥品注射劑和多組分生化藥注射劑也應參照分生化藥注射劑也應參照技術要求技術要求進進行相關研究，并在申報再注冊時提供相關行相關研究，并在申報再注冊時提供相關研究

5、資料。研究資料。三、對已上市化學藥品注射劑、多組分生化三、對已上市化學藥品注射劑、多組分生化藥注射劑進行仿制、改變劑型或者改變給藥注射劑進行仿制、改變劑型或者改變給藥途徑研究時，研究者應當慎重考慮已上藥途徑研究時，研究者應當慎重考慮已上市品種的研究基礎。市品種的研究基礎。10以化學藥品注射劑為例以化學藥品注射劑為例:一、化學藥品注射劑劑型選擇的必要性、合一、化學藥品注射劑劑型選擇的必要性、合理性理性二、化學藥品注射劑規(guī)格的合理性、必要性二、化學藥品注射劑規(guī)格的合理性、必要性三、化學藥品注射劑原、輔料質量控制及來三、化學藥品注射劑原、輔料質量控制及來源源四、化學藥品注射劑處方及制備工藝合理性、四

6、、化學藥品注射劑處方及制備工藝合理性、可行性研究，特別是滅菌工藝的選擇及驗可行性研究，特別是滅菌工藝的選擇及驗證研究、工藝穩(wěn)定性研究等證研究、工藝穩(wěn)定性研究等11五、化學藥品注射劑質量研究及質量標準制訂五、化學藥品注射劑質量研究及質量標準制訂 六、化學藥品注射劑穩(wěn)定性研究六、化學藥品注射劑穩(wěn)定性研究 七、化學藥品注射劑非臨床安全性評價的技術七、化學藥品注射劑非臨床安全性評價的技術要求要求 八、化學藥品注射劑臨床研究技術要求八、化學藥品注射劑臨床研究技術要求 九、仿制化學藥品注射劑的技術要求九、仿制化學藥品注射劑的技術要求 十、化學藥品注射劑說明書和標簽內容的技術十、化學藥品注射劑說明書和標簽內

7、容的技術要求要求 12本講座主要探討無菌保證工藝研究及評價本講座主要探討無菌保證工藝研究及評價包括：包括： 制備工藝的選擇制備工藝的選擇 工藝參數(shù)的確定工藝參數(shù)的確定 工藝的驗證工藝的驗證 注射劑滅菌工藝及其驗證注射劑滅菌工藝及其驗證13三、無菌保證工三、無菌保證工藝研究與驗證要求藝研究與驗證要求14最終滅菌產(chǎn)品的無菌保證水平規(guī)定為最終滅菌產(chǎn)品的無菌保證水平規(guī)定為:微生物污染概率不超過百萬分之一微生物污染概率不超過百萬分之一采用無菌生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品采用無菌生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品:其無菌保證水平為微生物污染概率不超其無菌保證水平為微生物污染概率不超過千分之一過千分之一 15與產(chǎn)品無菌保證相關的影響因素與產(chǎn)

8、品無菌保證相關的影響因素環(huán)境環(huán)境廠房、設備廠房、設備原材料（原輔料、包裝材料）原材料（原輔料、包裝材料）無菌保證工藝無菌保證工藝生產(chǎn)過程控制生產(chǎn)過程控制人員衛(wèi)生人員衛(wèi)生16 滅菌方法選擇按歐盟滅菌方法選擇按歐盟1999年年8月正式開始執(zhí)月正式開始執(zhí)行滅菌方法選擇的決策樹行滅菌方法選擇的決策樹 決策樹的作用是在考慮各種復雜因素的情決策樹的作用是在考慮各種復雜因素的情況下輔助選擇最佳的滅菌方法況下輔助選擇最佳的滅菌方法 凡是可以最終滅菌的產(chǎn)品務必要最終滅菌凡是可以最終滅菌的產(chǎn)品務必要最終滅菌171819決策樹越往下，風險越大決策樹越往下，風險越大需要提供的必要證據(jù)越多需要提供的必要證據(jù)越多20基本

9、原則基本原則: 無菌產(chǎn)品應在灌裝到最終容器后進行最終無菌產(chǎn)品應在灌裝到最終容器后進行最終滅菌（首選）滅菌（首選） 如因產(chǎn)品對熱不穩(wěn)定不能進行最終滅菌時，如因產(chǎn)品對熱不穩(wěn)定不能進行最終滅菌時，可采用最終滅菌方法的替代方法可采用最終滅菌方法的替代方法-過濾除過濾除菌和菌和/或無菌生產(chǎn)工藝（退而求其次）或無菌生產(chǎn)工藝（退而求其次）21同時明確如下要求：同時明確如下要求： 無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)，首先應根據(jù)特定的處方選擇最佳的滅無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)，首先應根據(jù)特定的處方選擇最佳的滅菌方法，然后再選擇包裝材料菌方法，然后再選擇包裝材料 使用熱不穩(wěn)定的包裝材料不能作為選擇無菌生產(chǎn)工藝的理使用熱不穩(wěn)定的包裝材料不能作

10、為選擇無菌生產(chǎn)工藝的理由由 因其他因素選擇的包裝容器不能進行最終滅菌，藥品生產(chǎn)因其他因素選擇的包裝容器不能進行最終滅菌，藥品生產(chǎn)企業(yè)仍有責任不斷尋找可接受的替代容器，使得產(chǎn)品可以企業(yè)仍有責任不斷尋找可接受的替代容器，使得產(chǎn)品可以在可接受的時間范圍內采用最終滅菌的方法在可接受的時間范圍內采用最終滅菌的方法 任何商業(yè)考慮均不能作為不使用具有最高無菌保證水平的任何商業(yè)考慮均不能作為不使用具有最高無菌保證水平的最終滅菌方法的理由最終滅菌方法的理由22常用的滅菌方式及其無菌保證水平常用的滅菌方式及其無菌保證水平1、過度殺滅法、過度殺滅法 微生物殘存概率微生物殘存概率10-62、殘存概率法、殘存概率法 微

11、生物殘存概率微生物殘存概率10-63、無菌生產(chǎn)工藝、無菌生產(chǎn)工藝 無菌保證一般只能達到無菌保證一般只能達到10-3水平水平23最終滅菌工藝的驗證要求最終滅菌工藝的驗證要求最終滅菌工藝：最終滅菌工藝：過度殺滅法（過度殺滅法（ Fo12） 殘存概率法（殘存概率法（8 Fo12）目標：滅菌后的微生物殘存概率目標：滅菌后的微生物殘存概率10-6 24過度殺滅設計方法：過度殺滅設計方法： 一種滅菌設計方法，只需要最少的關于產(chǎn)一種滅菌設計方法，只需要最少的關于產(chǎn)品生物負載的信息。最差條件的生物負載品生物負載的信息。最差條件的生物負載猜測用來確定所產(chǎn)生的殺滅力需要獲得滅猜測用來確定所產(chǎn)生的殺滅力需要獲得滅菌

12、物上的菌物上的PNSU為為10-6。在使用這個方法時，。在使用這個方法時，確效計劃必須證明確效計劃必須證明FBIO和和FPHY都大于都大于12分鐘。分鐘。25殘存概率法：殘存概率法： 一種滅菌設計方法，當所產(chǎn)生的殺滅力需一種滅菌設計方法，當所產(chǎn)生的殺滅力需要達到要達到PNSU為為10-6時，以（滅菌物品上或時，以（滅菌物品上或內的）生物負載的特性和產(chǎn)品對熱的敏感內的）生物負載的特性和產(chǎn)品對熱的敏感度為基礎。度為基礎。 應產(chǎn)品而定的設計方法應產(chǎn)品而定的設計方法26工藝驗證要求：工藝驗證要求：過度殺滅法和殘存概率法均應進行工藝驗證過度殺滅法和殘存概率法均應進行工藝驗證 驗證內容：空載熱分布驗證內容

13、：空載熱分布 滿載熱分布滿載熱分布 熱穿透試驗熱穿透試驗 微生物挑戰(zhàn)試驗（殘存概率法）微生物挑戰(zhàn)試驗（殘存概率法）滅菌前微生物污染水平滅菌前微生物污染水平-數(shù)量和耐熱性數(shù)量和耐熱性 -過程控制過程控制27熱力滅菌的動力學原理熱力滅菌的動力學原理 微生物耐熱參數(shù)微生物耐熱參數(shù) （D值）值） 溫度系數(shù)溫度系數(shù) Z值值 FT 值值 T滅菌時間滅菌時間 F0 值值標準滅菌時間標準滅菌時間 無菌保證值（無菌保證值（SAL） 滅菌率滅菌率L28對數(shù)規(guī)則：對數(shù)規(guī)則：ArrheniusArrhenius 質量作用定律質量作用定律 濕熱滅菌的對數(shù)規(guī)則始于濕熱滅菌的對數(shù)規(guī)則始于19211921年年BigeowBi

14、geow發(fā)表發(fā)表的論文的論文-用對數(shù)規(guī)則闡述滅菌工藝過程，他認為，用對數(shù)規(guī)則闡述滅菌工藝過程，他認為，滅菌過程可以用阿倫尼烏斯的一級反應式來描述。滅菌過程可以用阿倫尼烏斯的一級反應式來描述。根據(jù)質量作用定律，在恒定溫度及保持其它條件根據(jù)質量作用定律，在恒定溫度及保持其它條件不變的情況下，單位時間內被殺滅的微生物數(shù)正不變的情況下，單位時間內被殺滅的微生物數(shù)正比于比于t t0 0時原有的數(shù)目，即：時原有的數(shù)目，即： dN/dtdN/dtK(NK(N0 0N Nk k) ) 式中：式中：N N0 0為為t t0 0時，存活的微生物數(shù)；時，存活的微生物數(shù)； N Nk k為為t t時被殺滅的微生物數(shù)；時

15、被殺滅的微生物數(shù)； N N為為t t時存活的微生物數(shù)。時存活的微生物數(shù)。由此得出，滅菌時微生物的死亡遵循對數(shù)規(guī)則。由此得出，滅菌時微生物的死亡遵循對數(shù)規(guī)則。29微生物存活數(shù)與滅菌時間關系圖微生物存活數(shù)與滅菌時間關系圖 半對數(shù)座標半對數(shù)座標Y軸：微生物取對數(shù)軸：微生物取對數(shù)X軸：時間為軸：時間為10進制普通座標進制普通座標Y軸及軸及X軸均為普通座標軸均為普通座標tlgN102030123t N10203012330微生物滅活曲線微生物滅活曲線紅色為理想狀態(tài)：直線紅色為理想狀態(tài)：直線自然界存在的芽孢可能為自然界存在的芽孢可能為A、B、C生物指示劑測試的線性較好生物指示劑測試的線性較好LgNtABC

16、生物指示劑生物指示劑31微生物耐熱參數(shù)（微生物耐熱參數(shù)（D值）值）: D值是指在特定滅菌條件下，使微生物數(shù)量值是指在特定滅菌條件下，使微生物數(shù)量下降一個對數(shù)單位或殺滅下降一個對數(shù)單位或殺滅90%所需要的時所需要的時間（分鐘）。間（分鐘）。32D-值：在基本溫度時使微生物數(shù)量下降一個對數(shù)值：在基本溫度時使微生物數(shù)量下降一個對數(shù) 值（或值（或90%）所需的時間）所需的時間33滅菌滅菌溫度系數(shù)（溫度系數(shù)（Z值）值）: Z 值系指使某一種微生物的值系指使某一種微生物的D 值變化一值變化一個對數(shù)單位，滅菌溫度應升高或下降的度個對數(shù)單位，滅菌溫度應升高或下降的度數(shù)數(shù). 在沒有特定要求時在沒有特定要求時 :

17、 濕熱滅菌條件下濕熱滅菌條件下Z值通常取值通常取10； 干熱滅菌條件下干熱滅菌條件下Z值通常取值通常取20； 干熱去熱原時干熱去熱原時Z值通常取值通常取54。3435 FT 值值T(): 滅菌時間滅菌時間FT 值指值指T()滅菌值，系指一個給滅菌值，系指一個給定定Z 值下，滅菌程序在溫度值下，滅菌程序在溫度T()下的等效滅菌下的等效滅菌時間。時間。 FTDTlgN式中式中:DT 為在為在T()下微生物的下微生物的D 值；值；lgN 為為T()下滅菌程序使微生物數(shù)下降下滅菌程序使微生物數(shù)下降的對數(shù)單位數(shù)。的對數(shù)單位數(shù)。36F0值值: 標準滅菌時間（用于濕熱滅菌），系滅標準滅菌時間（用于濕熱滅菌）

18、，系滅菌過程賦予待滅菌物品在菌過程賦予待滅菌物品在121下的等效下的等效滅菌時間（分鐘）。滅菌時間（分鐘）。FH值值: 標準滅菌時間（用于干熱滅菌），系滅標準滅菌時間（用于干熱滅菌），系滅菌過程賦予待滅菌物品在菌過程賦予待滅菌物品在170下的等效下的等效滅菌時間（分鐘）。滅菌時間（分鐘）。37滅菌率滅菌率L： L 指在某一溫度指在某一溫度T()下滅菌下滅菌lmin 所獲得所獲得的標準滅菌時間。的標準滅菌時間。L=10 (Ti-TR) /Z Ti滅菌溫度滅菌溫度 TR標準參照溫度標準參照溫度 Z 微生物死亡率常數(shù)微生物死亡率常數(shù)3839時間時間 溫度溫度 致死率致死率濕熱滅菌的致死率濕熱滅菌的致

19、死率40無菌生產(chǎn)工藝的驗證要求無菌生產(chǎn)工藝的驗證要求無菌生產(chǎn)工藝：無菌生產(chǎn)工藝：過濾除菌無菌生產(chǎn)工藝過濾除菌無菌生產(chǎn)工藝無菌組裝工藝無菌組裝工藝41工藝驗證要求：工藝驗證要求：-培養(yǎng)基模擬灌裝試驗培養(yǎng)基模擬灌裝試驗 對生產(chǎn)系統(tǒng)的驗證對生產(chǎn)系統(tǒng)的驗證-除菌過濾系統(tǒng)適應性試驗除菌過濾系統(tǒng)適應性試驗 包括過濾系統(tǒng)相容性測試、過濾前后濾包括過濾系統(tǒng)相容性測試、過濾前后濾膜完整性測試、濾膜的微生物截留量測試膜完整性測試、濾膜的微生物截留量測試42微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗43微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 生物指示劑生物指示劑-簡稱為簡稱為BIBI（biological biological indic

20、atorindicator）: :是對特定滅菌工藝具有一定是對特定滅菌工藝具有一定耐受性并且能夠定量測定滅菌效力的微生耐受性并且能夠定量測定滅菌效力的微生物制劑，適用于制備生物指示劑的微生物物制劑，適用于制備生物指示劑的微生物多為芽胞類細菌，這是因為，除輻射滅菌多為芽胞類細菌，這是因為，除輻射滅菌外，芽胞類細菌比常規(guī)的生長態(tài)微生物對外，芽胞類細菌比常規(guī)的生長態(tài)微生物對滅菌工藝具有更強的耐受性。生物指示劑滅菌工藝具有更強的耐受性。生物指示劑既可用來測定一個給定的滅菌工藝條件的既可用來測定一個給定的滅菌工藝條件的滅菌效果，也可判別它是否符合滅菌效果，也可判別它是否符合無菌保證無菌保證要求。要求。4

21、4微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 所謂濕熱滅菌工藝的生物指示劑微生物所謂濕熱滅菌工藝的生物指示劑微生物挑戰(zhàn)試驗，系指將一定量已知挑戰(zhàn)試驗，系指將一定量已知D D值的耐熱孢值的耐熱孢子接入被滅菌的產(chǎn)品中，在設定的濕熱滅子接入被滅菌的產(chǎn)品中，在設定的濕熱滅菌條件下滅菌，以驗證設定的滅菌工藝是菌條件下滅菌，以驗證設定的滅菌工藝是否確實能賦予產(chǎn)品所需的否確實能賦予產(chǎn)品所需的SAL SAL 為為10106 6而進而進行的試驗及評價過程。行的試驗及評價過程。45微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 USPUSP和和BPBP對這方面有專門的論述。一般說來，對這方面有專門的論述。一般說來，對生物指示劑選擇的原則性要求是

22、：對生物指示劑選擇的原則性要求是： 孢子（菌株）穩(wěn)定孢子（菌株）穩(wěn)定 耐熱性強于被滅菌物品中常見的污染菌耐熱性強于被滅菌物品中常見的污染菌 系非致病菌系非致病菌 易于培養(yǎng)，孢子萌發(fā)率要在易于培養(yǎng)，孢子萌發(fā)率要在90%90%以上以上 有效期長有效期長 保存及使用方便保存及使用方便 安全性好安全性好46微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 濕熱滅菌工藝驗證用生物指示劑的來源主要濕熱滅菌工藝驗證用生物指示劑的來源主要有兩類有兩類: : 一類是采用標準生物指示劑，這類生物指示一類是采用標準生物指示劑，這類生物指示劑可從市場購買；劑可從市場購買； 另一類需用從日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控分離出的另一類需用從日常生產(chǎn)污染菌

23、監(jiān)控分離出的最耐熱微生物孢子制備，并測得相關參數(shù)（最佳最耐熱微生物孢子制備，并測得相關參數(shù)（最佳生長條件、耐熱性等）后方可使用。生長條件、耐熱性等）后方可使用。 47菌菌 種種 名名 稱稱常規(guī)常規(guī)D121值值/min嗜熱脂肪芽胞桿菌嗜熱脂肪芽胞桿菌 Bacillus stereatherno philus1.53.0枯草芽胞桿菌枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis ATCC52300.30.7凝結芽胞桿菌凝結芽胞桿菌 Bacillus coagulans0.40.8梭狀芽胞桿菌梭狀芽胞桿菌 Clostridium sporogenes0.40.8濕熱滅菌工藝驗證中常用的生物指示劑濕

24、熱滅菌工藝驗證中常用的生物指示劑 48例例: 國產(chǎn)非治病性嗜熱肪芽胞菌芽胞（國產(chǎn)非治病性嗜熱肪芽胞菌芽胞（ATCC 7953） D值值-D121值值1.74存活時間存活時間- 121oC飽和蒸汽下飽和蒸汽下, 存活時間不存活時間不 少于少于3.9分鐘分鐘死亡時間死亡時間- 121oC飽和蒸汽下飽和蒸汽下, 死亡時間不死亡時間不 少于少于19分鐘分鐘孢子量孢子量- 5105-6cfu/支支49使用方法使用方法: : 將生物指示劑和被滅菌物品一起放置在滅菌柜將生物指示劑和被滅菌物品一起放置在滅菌柜（鍋）內，上、中層、中央和排氣口（冷點處）（鍋）內，上、中層、中央和排氣口（冷點處）滅菌后取出，然后直

25、接置于滅菌后取出，然后直接置于56 60 56 60 o oC C培養(yǎng)培養(yǎng)24 24 48 48小時，并另取一支未經(jīng)滅菌生物指示劑一起小時，并另取一支未經(jīng)滅菌生物指示劑一起培養(yǎng)，作為陽性對照。培養(yǎng)，作為陽性對照。結果判斷結果判斷: : 根據(jù)顏色判斷滅菌效果，培養(yǎng)后全部保持紫色滅根據(jù)顏色判斷滅菌效果，培養(yǎng)后全部保持紫色滅菌合格。若由紫色變?yōu)辄S色判為滅菌不合格。對菌合格。若由紫色變?yōu)辄S色判為滅菌不合格。對照管應紫變黃色為該指示劑有效。照管應紫變黃色為該指示劑有效。50例例: 進口進口3MTMATTESTTM (1262) 蒸汽滅菌生物蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑培養(yǎng)指示劑(嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片嗜熱脂肪桿

26、菌芽胞菌片) 在在121飽和蒸汽條件下，存活時間大于或等飽和蒸汽條件下，存活時間大于或等于于5分鐘，殺滅時間小于或等于分鐘，殺滅時間小于或等于15分鐘。分鐘。 滅菌完畢，取出生物指示劑后至少冷卻滅菌完畢，取出生物指示劑后至少冷卻10分鐘分鐘以上，方可擠破生物指示劑內安瓿。否則有可能以上，方可擠破生物指示劑內安瓿。否則有可能導致安瓿的碎片傷人。導致安瓿的碎片傷人。 只有對照管為陽性，其生物結果才算有效。只有對照管為陽性，其生物結果才算有效。51使用方法使用方法1 1、將壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑放于一標準測試、將壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑放于一標準測試包中；包中；2 2、按照國家規(guī)范，分別將測試

27、包放于鍋內不同位置；、按照國家規(guī)范，分別將測試包放于鍋內不同位置；3 3、滅菌完畢，取出生物指示劑；、滅菌完畢，取出生物指示劑；4 4、擠破內含的安瓿，與一支對照管一起放于、擠破內含的安瓿，與一支對照管一起放于5656培培養(yǎng)鍋培養(yǎng)；養(yǎng)鍋培養(yǎng)；5 5、4848小時后，閱讀結果。小時后，閱讀結果。52微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗挑戰(zhàn)試驗合格標準挑戰(zhàn)試驗合格標準 生物指示劑的選用應構成挑戰(zhàn)性的必要條件：可生物指示劑的選用應構成挑戰(zhàn)性的必要條件：可用藥典，如用藥典，如USPUSP中規(guī)定的生物指示劑；對存中規(guī)定的生物指示劑；對存活概率滅菌程序的產(chǎn)品而言，應當強調，所用生活概率滅菌程序的產(chǎn)品而言，應當強調

28、，所用生物指示劑的耐熱性應大于產(chǎn)品中常見污染菌的耐物指示劑的耐熱性應大于產(chǎn)品中常見污染菌的耐熱性，生物指示劑的用量也應大于產(chǎn)品中該污染熱性，生物指示劑的用量也應大于產(chǎn)品中該污染菌的水平。菌的水平。 經(jīng)生物指示劑驗證后，應能證明在設定的經(jīng)生物指示劑驗證后，應能證明在設定的F F0 0條件條件下，產(chǎn)品的無菌保證水平低于下，產(chǎn)品的無菌保證水平低于1010-6-6。53微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗方案制訂方案制訂 制訂驗證方案時，應當綜合考慮相關法規(guī)制訂驗證方案時，應當綜合考慮相關法規(guī)要求、滅菌熱分布及熱穿透試驗數(shù)據(jù)、產(chǎn)要求、滅菌熱分布及熱穿透試驗數(shù)據(jù)、產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性、日常生產(chǎn)監(jiān)控中所獲得的品的熱穩(wěn)定

29、性、日常生產(chǎn)監(jiān)控中所獲得的滅菌前產(chǎn)品中的微生物污染水平和污染菌滅菌前產(chǎn)品中的微生物污染水平和污染菌的耐熱性數(shù)據(jù)。方案還包括驗證記錄的各的耐熱性數(shù)據(jù)。方案還包括驗證記錄的各種表格。種表格。54微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗濕熱滅菌程序通常分為兩類：濕熱滅菌程序通常分為兩類： 過度殺滅程序（過度殺滅程序（Overkill Design Overkill Design ApproachApproach） 殘存概率程序（殘存概率程序（Product-Specific Design Product-Specific Design Approach Approach ）55微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗挑戰(zhàn)試

30、驗挑戰(zhàn)試驗( (生物指示劑驗證試驗生物指示劑驗證試驗 ):): 生物指示劑的裝載生物指示劑的裝載 滅菌滅菌 檢查和培養(yǎng)檢查和培養(yǎng) 結果評價結果評價 驗證試驗的頻率驗證試驗的頻率 56微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 作為一項生物挑戰(zhàn)性試驗，盡管生物指作為一項生物挑戰(zhàn)性試驗，盡管生物指示劑驗證不能替代物理驗證，但它能如實示劑驗證不能替代物理驗證，但它能如實反映滅菌工藝條件對微生物的殺滅效果，反映滅菌工藝條件對微生物的殺滅效果，從而證明該滅菌工藝所賦予相關產(chǎn)品的無從而證明該滅菌工藝所賦予相關產(chǎn)品的無菌保證水平是否符合要求。生產(chǎn)指示劑在菌保證水平是否符合要求。生產(chǎn)指示劑在試驗中扮演了各種可能因素造成的產(chǎn)

31、品中試驗中扮演了各種可能因素造成的產(chǎn)品中的的“污染菌污染菌”的角色，以這種方式進行的的角色，以這種方式進行的驗證更切合實際，更能說明所設定的滅菌驗證更切合實際，更能說明所設定的滅菌程序是否安全。程序是否安全。57微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 對熱穩(wěn)定性很好的產(chǎn)品而言，通常采用過度對熱穩(wěn)定性很好的產(chǎn)品而言，通常采用過度殺滅程序，該程序能賦予產(chǎn)品足夠大的安全系數(shù)，殺滅程序，該程序能賦予產(chǎn)品足夠大的安全系數(shù)，使在使在121121下下D D值約為值約為1.0min1.0min的細菌孢子至少下降的細菌孢子至少下降1212個對數(shù)單位。在過度殺滅程序的一半時間時，個對數(shù)單位。在過度殺滅程序的一半時間時，可使

32、該孢子至少下降可使該孢子至少下降6 6個對數(shù)單位。由于殺滅微生個對數(shù)單位。由于殺滅微生物孢子（生物指示劑）的滅菌條件極為苛刻，因物孢子（生物指示劑）的滅菌條件極為苛刻，因此，從滅菌程序的標準滅菌時間此，從滅菌程序的標準滅菌時間F F0 0來看，毋須擔來看，毋須擔心產(chǎn)品滅菌后的無菌保證問題。心產(chǎn)品滅菌后的無菌保證問題。58微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 并不是所有的滅菌程序都可進行生物指并不是所有的滅菌程序都可進行生物指示劑驗證。有些產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性相當差，示劑驗證。有些產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性相當差，滅菌溫度僅能控制在滅菌溫度僅能控制在100100左右，整個滅左右，整個滅菌程序的菌程序的F F0 0值還不到

33、值還不到1min1min，對此類程序進，對此類程序進行生物指示劑驗證就沒有太多的意義。此行生物指示劑驗證就沒有太多的意義。此類產(chǎn)品的無菌保證水平主要是通過無菌生類產(chǎn)品的無菌保證水平主要是通過無菌生產(chǎn)工藝來實現(xiàn)，滅菌僅能作為提高產(chǎn)品無產(chǎn)工藝來實現(xiàn)，滅菌僅能作為提高產(chǎn)品無菌保證水平的手段。菌保證水平的手段。59微生物挑戰(zhàn)試驗微生物挑戰(zhàn)試驗 WHO GMPWHO GMP中強調，化學或生物指示劑可中強調，化學或生物指示劑可用于滅菌過程的監(jiān)控，但不得代替物理監(jiān)用于滅菌過程的監(jiān)控，但不得代替物理監(jiān)控（溫度、時間）?？兀囟取r間）。 FDAFDA均認為生物指示劑驗證并不能取代均認為生物指示劑驗證并不能取代

34、物理驗證，這是由生物指示劑驗證的復雜物理驗證，這是由生物指示劑驗證的復雜性所決定的。性所決定的。60容器密封性試驗容器密封性試驗61容器密封性試驗容器密封性試驗 FDA-GMP211.94（藥品容器和密封（藥品容器和密封材料）要求，藥品容器和密封材料應是清材料）要求，藥品容器和密封材料應是清潔的，按藥品性質的指示進行滅菌和去熱潔的，按藥品性質的指示進行滅菌和去熱原。標準及檢測方法、清潔方法、去熱原原。標準及檢測方法、清潔方法、去熱原及滅菌方法應形成書面文件，并遵照執(zhí)行。及滅菌方法應形成書面文件，并遵照執(zhí)行。 EU-應采用經(jīng)驗證的適當方法完成產(chǎn)品應采用經(jīng)驗證的適當方法完成產(chǎn)品的密封。的密封。(無

35、菌產(chǎn)品的最終處理無菌產(chǎn)品的最終處理)62容器密封性試驗容器密封性試驗 在對產(chǎn)品包裝進行評估測試的初期，常采用在對產(chǎn)品包裝進行評估測試的初期，常采用物理和微生物學檢測手段。物理檢測有許多優(yōu)點，物理和微生物學檢測手段。物理檢測有許多優(yōu)點，如靈敏度較高、使用方便、檢測迅速及低成本等。如靈敏度較高、使用方便、檢測迅速及低成本等。在產(chǎn)品有效期內，均可使用物理檢測方法來確定在產(chǎn)品有效期內，均可使用物理檢測方法來確定包裝完整性是否符合規(guī)定要求。進行包裝完整性包裝完整性是否符合規(guī)定要求。進行包裝完整性檢測的一個重要原因在于，確保無菌產(chǎn)品始終保檢測的一個重要原因在于，確保無菌產(chǎn)品始終保持無菌狀態(tài)。因此，在產(chǎn)品包

36、裝的研發(fā)階段，應持無菌狀態(tài)。因此，在產(chǎn)品包裝的研發(fā)階段，應考慮采用微生物侵入試驗，或采用經(jīng)驗證過的并考慮采用微生物侵入試驗，或采用經(jīng)驗證過的并且比微生物檢測更為有效的物理試驗方法，來檢且比微生物檢測更為有效的物理試驗方法，來檢測產(chǎn)品包裝的完整性。但是，對于效期內成品的測產(chǎn)品包裝的完整性。但是，對于效期內成品的穩(wěn)定性試驗來說，因進行微生物侵入試驗較為困穩(wěn)定性試驗來說，因進行微生物侵入試驗較為困難，故建議采用物理檢測方法。難，故建議采用物理檢測方法。63容器密封性試驗容器密封性試驗 微生物侵入試驗是對最終滅菌容器密封件系統(tǒng)微生物侵入試驗是對最終滅菌容器密封件系統(tǒng)完好性的挑戰(zhàn)性試驗。在驗證試驗中，取

37、輸液瓶完好性的挑戰(zhàn)性試驗。在驗證試驗中，取輸液瓶或西林瓶或西林瓶( (小瓶小瓶) )，灌裝入培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線，灌裝入培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線上壓塞、壓蓋滅菌。此后，將容器密封面浸入高上壓塞、壓蓋滅菌。此后，將容器密封面浸入高濃度運動性菌液中，取出、培養(yǎng)并檢查是否有微濃度運動性菌液中，取出、培養(yǎng)并檢查是否有微生物侵入，確認容器密封系統(tǒng)的完好性。此同時，生物侵入，確認容器密封系統(tǒng)的完好性。此同時，需作陽性對照試驗，確認培養(yǎng)基的促菌生長能力。需作陽性對照試驗，確認培養(yǎng)基的促菌生長能力。64過濾系統(tǒng)的驗證過濾系統(tǒng)的驗證65過濾系統(tǒng)的驗證過濾系統(tǒng)的驗證法規(guī)的要求法規(guī)的要求 FDA Aseptic Pro

38、cessing Guidelines FDA無菌工藝指南無菌工藝指南:與過濾器完整性相關的與過濾器完整性相關的性能測試應包括：模擬生產(chǎn)條件，在最苛性能測試應包括：模擬生產(chǎn)條件，在最苛刻生產(chǎn)環(huán)境下進行微生物挑戰(zhàn)試驗?？躺a(chǎn)環(huán)境下進行微生物挑戰(zhàn)試驗。 EU GMP 歐盟歐盟GMP 無菌藥品附錄無菌藥品附錄 所有除菌工藝必須進行驗證所有除菌工藝必須進行驗證66PIC/S無菌工藝驗證無菌工藝驗證(2004年年7月月) 9.5.1 不管使用什么樣的過濾器或過濾器組合不管使用什么樣的過濾器或過濾器組合,驗證都應包括微生物挑戰(zhàn)試驗驗證都應包括微生物挑戰(zhàn)試驗,模擬模擬 “最差情況最差情況”生產(chǎn)條件生產(chǎn)條件.用

39、于挑戰(zhàn)試驗微生物用于挑戰(zhàn)試驗微生物(如缺陷假單胞菌如缺陷假單胞菌)的選擇必須證明適當?shù)倪x擇必須證明適當.產(chǎn)品的性質可能影響過濾器產(chǎn)品的性質可能影響過濾器,因此驗證應在有產(chǎn)品的時候進行因此驗證應在有產(chǎn)品的時候進行.如果產(chǎn)品具有細如果產(chǎn)品具有細菌抑制作用或殺菌性菌抑制作用或殺菌性,應使用產(chǎn)品替代品進行試驗應使用產(chǎn)品替代品進行試驗,該替代介質不含產(chǎn)品有效成分該替代介質不含產(chǎn)品有效成分.可以將類似產(chǎn)品歸可以將類似產(chǎn)品歸類類,然后只對其中一個產(chǎn)品做試驗然后只對其中一個產(chǎn)品做試驗.過濾器完整性過濾器完整性試驗的限度應來自過濾器驗證數(shù)據(jù)試驗的限度應來自過濾器驗證數(shù)據(jù).過濾器生產(chǎn)商過濾器生產(chǎn)商也應評估過濾器前

40、后允許的最大壓差也應評估過濾器前后允許的最大壓差,這應對照批這應對照批記錄做檢查確保在無菌過濾期間沒有超過這個數(shù)記錄做檢查確保在無菌過濾期間沒有超過這個數(shù)值值. 9.5.2 除了過濾器類型驗證除了過濾器類型驗證,每個日常生產(chǎn)中使每個日常生產(chǎn)中使用的單個產(chǎn)品過濾器的完整性也應在使用前后分用的單個產(chǎn)品過濾器的完整性也應在使用前后分別做試驗別做試驗.67過濾器的驗證證明及過濾器生產(chǎn)工藝過濾器的驗證證明及過濾器生產(chǎn)工藝 完整測試標準完整測試標準 起泡點及擴散流起泡點及擴散流 最大操作溫度最大操作溫度 最大操作壓力最大操作壓力 可以最多滅菌的次數(shù)次數(shù)，溫度，時間可以最多滅菌的次數(shù)次數(shù)，溫度，時間 確保其

41、過濾器符合法規(guī)要求確保其過濾器符合法規(guī)要求 無纖維脫落無纖維脫落 溶出物評估溶出物評估68濾器的選擇與特征表現(xiàn)濾器的選擇與特征表現(xiàn) 濾器的類型濾器的類型 濾器的組能濾器的組能 粒子脫落粒子脫落 可抽取物可抽取物 化學配伍性化學配伍性 吸附作用吸附作用 熱壓迫阻抗性熱壓迫阻抗性 水力壓迫阻抗性水力壓迫阻抗性 毒性試驗毒性試驗 物理完整性試驗物理完整性試驗69完整性試驗完整性試驗 完整性試驗的理論完整性試驗的理論 完整性試驗結果與細菌滯留的關系完整性試驗結果與細菌滯留的關系 制品制品-濕潤的完整性試驗濕潤的完整性試驗VS水水-濕潤的完整性試驗濕潤的完整性試驗 制品制品-濕潤的起泡點（比值）濕潤的起

42、泡點（比值） 制品制品-濕潤的起泡點（統(tǒng)計方法）濕潤的起泡點（統(tǒng)計方法） 制品制品-濕潤的擴散性流動濕潤的擴散性流動/前推流動試驗規(guī)格前推流動試驗規(guī)格 使用自動化完整性試驗儀執(zhí)行不需下游端操作的使用自動化完整性試驗儀執(zhí)行不需下游端操作的上游端試驗上游端試驗 一種減菌級濾器何時必須執(zhí)行完整性試驗一種減菌級濾器何時必須執(zhí)行完整性試驗 失敗分析失敗分析/尋找并解決問題尋找并解決問題7071非破壞性物理完整性試驗非破壞性物理完整性試驗 起泡點試驗起泡點試驗 擴散性流體擴散性流體/前推流體前推流體 壓力保持壓力保持/消退試驗消退試驗 自動化完整性試驗儀器自動化完整性試驗儀器 壓力保持壓力保持/消退與擴散

43、流體消退與擴散流體/前推流體之間的前推流體之間的關聯(lián)性關聯(lián)性72 濾孔大小的估測濾孔大小的估測 毒性與濾器可抽取物試驗毒性與濾器可抽取物試驗 對計算之制品對計算之制品-濕潤的起泡點之統(tǒng)計調整濕潤的起泡點之統(tǒng)計調整73四、無菌藥品生四、無菌藥品生產(chǎn)關鍵工藝的法規(guī)要求產(chǎn)關鍵工藝的法規(guī)要求74無菌藥品的生產(chǎn)原則無菌藥品的生產(chǎn)原則 為降低微生物、微粒和熱原污染的風險，為降低微生物、微粒和熱原污染的風險，無菌藥品的生產(chǎn)應有各種特殊要求。這在無菌藥品的生產(chǎn)應有各種特殊要求。這在很大程度上取決于生產(chǎn)人員的技能、所接很大程度上取決于生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓及其工作態(tài)度。質量保證極為重受的培訓及其工作態(tài)度。

44、質量保證極為重要，無菌藥品的生產(chǎn)必須嚴格按照精心制要，無菌藥品的生產(chǎn)必須嚴格按照精心制訂并經(jīng)驗證的方法及規(guī)程進行。產(chǎn)品的無訂并經(jīng)驗證的方法及規(guī)程進行。產(chǎn)品的無菌或其它質量特性絕不能僅依賴于任何形菌或其它質量特性絕不能僅依賴于任何形式的最終操作或成品檢驗。式的最終操作或成品檢驗。75注射劑的無菌保證要求注射劑的無菌保證要求 人員人員 廠房設施、設備管理廠房設施、設備管理 物料管理物料管理 生產(chǎn)管理生產(chǎn)管理 滅菌工藝及其驗證滅菌工藝及其驗證 無菌生產(chǎn)工藝無菌生產(chǎn)工藝 無菌檢查無菌檢查76廠房設施、設備管理廠房設施、設備管理 潔凈度級別潔凈度級別 ABCD級及響應的操作工序級及響應的操作工序 潔凈區(qū)的控制潔凈區(qū)的控制 無菌操作區(qū)與有菌操作區(qū)應分開無菌操作區(qū)與有菌操作區(qū)應分開 關鍵操作區(qū)的懸浮顆粒、微生物、氣流方向和關鍵操作區(qū)的懸浮顆粒、微生物、