1、3 種子健康檢驗種子健康檢驗n3.1 種傳病害檢驗的意義種傳病害檢驗的意義n3.2 種傳病害檢驗的方法種傳病害檢驗的方法3.1 種傳病害檢驗的意義種傳病害檢驗的意義n3.1.1 播種無病種子播種無病種子n（1）檢疫性病害禁止進境；）檢疫性病害禁止進境；n（2）國內(nèi)檢疫性病害，調(diào)運種子時要做好檢疫工）國內(nèi)檢疫性病害，調(diào)運種子時要做好檢疫工作。作。n（3）對于普通病害，寄主攜帶）對于普通病害，寄主攜帶病原體超過一定限病原體超過一定限度，不能用作種子繁殖和推廣度，不能用作種子繁殖和推廣3.1 種傳病害檢驗的意義種傳病害檢驗的意義3.1.2 提高種子消毒的效果提高種子消毒的效果 種子所帶病原物的種類、

2、數(shù)量、潛伏部位等，種子所帶病原物的種類、數(shù)量、潛伏部位等，處理與否，選擇藥劑和方法都會不一樣。處理與否，選擇藥劑和方法都會不一樣。n（1）種子表面與內(nèi)部帶菌；）種子表面與內(nèi)部帶菌；n（2）種子帶菌作為唯一初侵染來源；）種子帶菌作為唯一初侵染來源；n（3）種子帶菌，土壤或糞肥帶菌，種傳和土傳）種子帶菌，土壤或糞肥帶菌，種傳和土傳n（4）初侵染來源多，再侵染頻繁的病害）初侵染來源多，再侵染頻繁的病害n3.1.3 防止檢疫性病原生物的傳播與為害防止檢疫性病原生物的傳播與為害n（1）一旦發(fā)現(xiàn)帶有危險性病原生物，禁止調(diào)運和）一旦發(fā)現(xiàn)帶有危險性病原生物，禁止調(diào)運和作種子；發(fā)現(xiàn)傳進新區(qū)，銷毀或防除作種子；發(fā)

3、現(xiàn)傳進新區(qū)，銷毀或防除n（2）有些病原物的不同生理小種或病毒的不同株）有些病原物的不同生理小種或病毒的不同株系問題，也應進行檢驗系問題，也應進行檢驗3.1 種傳病害檢驗的意義種傳病害檢驗的意義3.2 種傳病害檢驗的方法種傳病害檢驗的方法n3.2.1 種傳病害的產(chǎn)地檢驗種傳病害的產(chǎn)地檢驗n3.2.2 種傳病害的室內(nèi)檢驗種傳病害的室內(nèi)檢驗3.2.1 種傳病害的產(chǎn)地檢驗種傳病害的產(chǎn)地檢驗n 確定種子是否帶病或帶何種病，首先要進行確定種子是否帶病或帶何種病，首先要進行田間檢驗（產(chǎn)地檢驗），尤其是對于田間檢驗（產(chǎn)地檢驗），尤其是對于種子上不表種子上不表現(xiàn)癥狀，室內(nèi)無快速、準確、有效的檢驗方法?，F(xiàn)癥狀，室

4、內(nèi)無快速、準確、有效的檢驗方法。產(chǎn)地檢驗的開展：產(chǎn)地檢驗的開展：3.2.1 種傳病害的產(chǎn)地檢驗種傳病害的產(chǎn)地檢驗n3.2.1.1 搞好病情調(diào)查和疫情普查搞好病情調(diào)查和疫情普查n（1）檢測有無檢疫性對象）檢測有無檢疫性對象n如有，目前發(fā)生種類、地區(qū)和為害面積；如有，目前發(fā)生種類、地區(qū)和為害面積；n 檢疫性對象的發(fā)生規(guī)律，銷毀或防除檢疫性對象的發(fā)生規(guī)律，銷毀或防除n 劃為疫區(qū)封鎖劃為疫區(qū)封鎖n（2）普通病害為害的時期及受害的程度，造成的）普通病害為害的時期及受害的程度，造成的損失損失3.2.1 種傳病害的產(chǎn)地檢驗種傳病害的產(chǎn)地檢驗n3.2.1.2 建立優(yōu)質(zhì)種子繁育基地建立優(yōu)質(zhì)種子繁育基地n（1 1

5、）基地所采用的種子來源于無病區(qū)，保證不帶）基地所采用的種子來源于無病區(qū)，保證不帶任何檢疫對象任何檢疫對象n（2 2）所有種子要進行消毒處理）所有種子要進行消毒處理n（3 3）產(chǎn)地檢驗存在檢疫對象，應撤消基地）產(chǎn)地檢驗存在檢疫對象，應撤消基地3.2.1 種傳病害的產(chǎn)地檢驗種傳病害的產(chǎn)地檢驗n我國：我國：n （1 1）基地無檢疫對象；）基地無檢疫對象；n （2 2）種子來自非疫區(qū)；）種子來自非疫區(qū)；n （3 3）專人負責，防止檢疫性或危險性病害傳）專人負責，防止檢疫性或危險性病害傳入；入；n （4 4）一旦傳入，就地銷毀）一旦傳入，就地銷毀3.2.1 種傳病害的產(chǎn)地檢驗種傳病害的產(chǎn)地檢驗n3.2.

6、1.3 隔離試種檢驗隔離試種檢驗n1）不易發(fā)現(xiàn)癥狀或病原體；）不易發(fā)現(xiàn)癥狀或病原體；n2）國外引種；）國外引種；n3）減少病害初侵染來源，保證生產(chǎn)上的安全，先）減少病害初侵染來源，保證生產(chǎn)上的安全，先進行隔離試種，觀察發(fā)病率進行隔離試種，觀察發(fā)病率n隔離種植區(qū)在相對封閉或嚴密的地區(qū)進行試種隔離種植區(qū)在相對封閉或嚴密的地區(qū)進行試種（隔蟲，土壤消毒），保證植株發(fā)病只能來源于（隔蟲，土壤消毒），保證植株發(fā)病只能來源于種子種子3.2.1 種傳病害的產(chǎn)地檢驗種傳病害的產(chǎn)地檢驗n3.2.1.4 實施產(chǎn)地田間檢驗實施產(chǎn)地田間檢驗n（1）檢疫性病害，發(fā)生流行季節(jié)，病情癥狀較明）檢疫性病害，發(fā)生流行季節(jié)，病情癥

7、狀較明確階段進行普查；確階段進行普查；n（2）非檢疫性病害，分期進行系統(tǒng)調(diào)查，查看各）非檢疫性病害，分期進行系統(tǒng)調(diào)查，查看各生育期的發(fā)病程度，了解種子帶菌情況。生育期的發(fā)病程度，了解種子帶菌情況。n田間檢驗為無病或輕病的會不會變成重病種？田間檢驗為無病或輕病的會不會變成重病種？3.2 種傳病害檢驗的方法種傳病害檢驗的方法n3.2.2 種傳病害的室內(nèi)檢驗種傳病害的室內(nèi)檢驗n3.2.2.1 取樣取樣n3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法3.2.2.1 取樣取樣n 一批種子，全部檢驗是不可能的；只能取其中一部分一批種子，全部檢驗是不可能的；只能取其中一部分進行檢驗分析。如果抽取的樣品不能代表全部

8、種子實際情進行檢驗分析。如果抽取的樣品不能代表全部種子實際情況，即便檢驗過程精細，也不能反映該批種子正確的結果。況，即便檢驗過程精細，也不能反映該批種子正確的結果。n（1）取樣的基本原則取樣的基本原則：樣品必須具有代表性：樣品必須具有代表性 A 確定取樣點；確定取樣點； B 樣點必須全面均勻；樣點必須全面均勻； C 各點所取樣品數(shù)量應該基本一致。各點所取樣品數(shù)量應該基本一致。3.2.2.1 取樣取樣n（2）樣品的種類樣品的種類n小樣小樣：整批的種子堆或倉庫中，用扦樣器或徒手：整批的種子堆或倉庫中，用扦樣器或徒手從不同部位、不同樣點每次取出來的小量樣品從不同部位、不同樣點每次取出來的小量樣品n原

9、始樣品原始樣品：把由一批或部分種子所扦取出來的?。喊延梢慌虿糠址N子所扦取出來的小樣全部混合起來組成。樣全部混合起來組成。n平均樣品平均樣品：原始樣品分樣器混合，再從中取出相：原始樣品分樣器混合，再從中取出相當數(shù)量的樣品。代表性強。當數(shù)量的樣品。代表性強。3.2.2.1 取樣取樣n試樣試樣：平均樣品經(jīng)過混合，稱出一定量種子，供：平均樣品經(jīng)過混合，稱出一定量種子，供室內(nèi)檢驗使用的樣品室內(nèi)檢驗使用的樣品n 抽取小樣和原始樣品是取樣工作中最重要的抽取小樣和原始樣品是取樣工作中最重要的一環(huán)。如果數(shù)量與部位抽取不恰當，會影響樣品一環(huán)。如果數(shù)量與部位抽取不恰當，會影響樣品的代表性。的代表性。3.2.2.1

10、 取樣取樣n（3）取樣的方法取樣的方法n 劃批：作物、品種、年度、來源、國家、運劃批：作物、品種、年度、來源、國家、運輸工具、時間輸工具、時間A 袋裝種子取樣法袋裝種子取樣法B 散裝種子取樣法散裝種子取樣法3.2.2.1 取樣取樣A 袋裝種子取樣法袋裝種子取樣法n10袋以下扦取總袋數(shù)的袋以下扦取總袋數(shù)的1/2n11-20袋扦取袋扦取6袋袋n21-40袋扦取袋扦取7袋袋n41-60袋扦取袋扦取8袋袋n61-80袋扦取袋扦取9袋袋n81-100袋扦取袋扦取10袋袋n101袋以上每增加袋以上每增加20袋多扦取袋多扦取1袋袋3.2.2.1 取樣取樣n樣袋分布均勻：樣袋分布均勻：n 樣袋呈堆積狀態(tài)，在堆

11、樁的上、中、下各部樣袋呈堆積狀態(tài)，在堆樁的上、中、下各部分別取樣；且每袋取樣時，不能局限在某一部位分別取樣；且每袋取樣時，不能局限在某一部位n扦樣：扦樣：n 小粒種子用單管扦樣器，大粒種子用雙管扦小粒種子用單管扦樣器，大粒種子用雙管扦樣器樣器B 散裝種子取樣法散裝種子取樣法n分區(qū)設點：分區(qū)設點：25平方米，平方米，5點取樣；相鄰區(qū)域，實行取樣點點取樣；相鄰區(qū)域，實行取樣點合并設在各區(qū)界限上合并設在各區(qū)界限上n按堆分層：不足按堆分層：不足2米，分上下米，分上下2層；層；2-3米，分上、中、下米，分上、中、下3層；層；3米以上增加米以上增加1層層n扦取小樣：分層定點后，按上、中、下的順序取樣。扦取

12、小樣：分層定點后，按上、中、下的順序取樣。3.2.2.1 取樣取樣n（4）取樣重量：取樣重量：n 40000粒（平均樣品）：依據(jù)千粒重來計算最粒（平均樣品）：依據(jù)千粒重來計算最低重量低重量n實驗室定量樣品的扦取：實驗室定量樣品的扦?。簄 如果平均樣品數(shù)量還太多，可采用正方形四如果平均樣品數(shù)量還太多，可采用正方形四分法：樣品倒在平板，厚度不超過分法：樣品倒在平板，厚度不超過1cm1cm，用正方形，用正方形四分法扦取所需要的份數(shù)和數(shù)量（粒數(shù)）四分法扦取所需要的份數(shù)和數(shù)量（粒數(shù)）3.2.2.1 取樣取樣n（5）取樣注意事項取樣注意事項:nA 取樣器、分樣器、容器、用具等要滅菌取樣器、分樣器、容器、用

13、具等要滅菌nB 棉花、花生等種子不能用扦樣器取樣棉花、花生等種子不能用扦樣器取樣n原因：原因：n 防止病菌污染，保證檢驗結果的正確性；防防止病菌污染，保證檢驗結果的正確性；防止傷種，影響結果的準確性止傷種，影響結果的準確性3.2.2 種傳病害的室內(nèi)檢驗種傳病害的室內(nèi)檢驗n3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n 肉眼檢驗；過篩檢驗；比重檢驗；解剖檢驗；肉眼檢驗；過篩檢驗；比重檢驗；解剖檢驗；洗滌檢驗；漏斗分離檢驗；保濕萌芽檢驗；分離洗滌檢驗；漏斗分離檢驗；保濕萌芽檢驗；分離培養(yǎng)檢驗；整胚檢驗；接種檢驗；化學染色檢驗；培養(yǎng)檢驗；整胚檢驗；接種檢驗；化學染色檢驗；熒光反應檢驗；噬菌體檢驗；血清學

14、檢驗；病毒熒光反應檢驗；噬菌體檢驗；血清學檢驗；病毒電子顯微鏡檢驗；分子雜交分析；電子顯微鏡檢驗；分子雜交分析；PCRPCR體外擴增體外擴增DNADNAn種子健康檢測的種子健康檢測的6個要求：個要求：n 特異性、靈敏性、快速性、簡單性、成本效特異性、靈敏性、快速性、簡單性、成本效率性、可靠性率性、可靠性3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（1）肉眼檢驗肉眼檢驗n 應用于具有明顯癥狀的種子，或者病原物容應用于具有明顯癥狀的種子，或者病原物容易識別，個體較大的種傳病害。易識別，個體較大的種傳病害。n 混雜于種子間的蟲癭，菌癭，菌核或菟絲子；混雜于種子間的蟲癭，菌癭，菌核或菟絲子；種子表面孢子

15、量大的（腥黑穗）；感病后有明顯種子表面孢子量大的（腥黑穗）；感病后有明顯癥狀的病粒，小麥黑胚?。ㄅ卟坑胁∽儯┌Y狀的病粒，小麥黑胚?。ㄅ卟坑胁∽儯?.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n方法方法：n 從平均樣品中取出一半種子作試樣，放在白紙或玻璃從平均樣品中取出一半種子作試樣，放在白紙或玻璃板上，用肉眼或板上，用肉眼或5-10倍的擴大鏡檢查，取出病原體或病粒，倍的擴大鏡檢查，取出病原體或病粒，稱其重或計其粒數(shù)，計算病害感染率。稱其重或計其粒數(shù)，計算病害感染率。 n注意注意：n 無癥狀表現(xiàn)的不一定是無病種子；不同病害相似癥無癥狀表現(xiàn)的不一定是無病種子；不同病害相似癥狀，同一病害不同或多種癥狀；無

16、法判斷有無活力或致病狀，同一病害不同或多種癥狀；無法判斷有無活力或致病性。性。大豆灰斑病大豆灰斑病大豆紫斑病大豆紫斑病小麥粒線蟲病小麥粒線蟲病3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（2）過篩檢驗過篩檢驗n 適用于較大病原體，其形狀、大小與種子不同。如菌適用于較大病原體，其形狀、大小與種子不同。如菌癭、病核、蟲癭及赤霉病粒等。癭、病核、蟲癭及赤霉病粒等。n方法：從平均樣品中取出一半種子作試樣，用規(guī)定孔徑的方法：從平均樣品中取出一半種子作試樣，用規(guī)定孔徑的篩子過篩，不同作物種子所用篩孔不同，最后計算病害感篩子過篩，不同作物種子所用篩孔不同，最后計算病害感染率。染率。一般采用圓孔篩。一般采用圓孔

17、篩。n每千克樣品的檢驗對象含量每千克樣品的檢驗對象含量n =（檢驗對象數(shù)量（檢驗對象數(shù)量/試樣重量）試樣重量）10003.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（3）比重檢驗比重檢驗n 病原體與種子大小相仿，但比重存在差異，病原體與種子大小相仿，但比重存在差異，如菌核、菌癭、蟲癭如菌核、菌癭、蟲癭n小麥粒線蟲的蟲癭，用小麥粒線蟲的蟲癭，用20%鹽水進行懸浮。鹽水進行懸浮。3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（4）解剖檢驗解剖檢驗n 適用于表面無明顯癥狀，診斷比較困難的種適用于表面無明顯癥狀，診斷比較困難的種子，可以了解病菌的潛伏場所。子，可以了解病菌的潛伏場所。n方法：切片、染色、觀察方

18、法：切片、染色、觀察n馬鈴薯環(huán)腐病，切開，用手擠壓，維管束部分有菌膿溢出，馬鈴薯環(huán)腐病，切開，用手擠壓，維管束部分有菌膿溢出，制片高倍鏡下觀察。制片高倍鏡下觀察。n小麥線蟲病的蟲癭和腥黑穗病的菌癭（黑粉，冬孢子，腥小麥線蟲病的蟲癭和腥黑穗病的菌癭（黑粉，冬孢子，腥味）味）3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（5）洗滌檢驗洗滌檢驗n適用于種子表面帶病而肉眼看不見的種子病害。適用于種子表面帶病而肉眼看不見的種子病害。n方法：方法：n 取樣，洗滌，振蕩，離心，懸浮，取樣，洗滌，振蕩，離心，懸浮，記載病原記載病原體種類及每視野的孢子數(shù)，并計算每粒種子孢子體種類及每視野的孢子數(shù)，并計算每粒種子孢子

19、負荷量。負荷量。3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（6）漏斗分離檢驗漏斗分離檢驗n此法專門用于種子攜帶線蟲的檢驗。此法專門用于種子攜帶線蟲的檢驗。n具體方法（貝爾曼漏斗法）：具體方法（貝爾曼漏斗法）：n 將樣品放在漏斗內(nèi)的過濾紙上，在漏斗的排水口處將樣品放在漏斗內(nèi)的過濾紙上，在漏斗的排水口處套一像皮管，其上裝有螺旋節(jié)流夾，將種子用恒溫細噴霧套一像皮管，其上裝有螺旋節(jié)流夾，將種子用恒溫細噴霧24小時，多余的水會自種子與漏斗的邊緣流掉，這樣線蟲小時，多余的水會自種子與漏斗的邊緣流掉，這樣線蟲通過濾紙下沉到螺旋夾以上的橡皮管內(nèi)，然后打開螺旋節(jié)通過濾紙下沉到螺旋夾以上的橡皮管內(nèi)，然后打開螺旋節(jié)

20、流夾搜集下沿液，便可檢驗出線蟲并計算出含量。流夾搜集下沿液，便可檢驗出線蟲并計算出含量。3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（7）保濕萌芽檢驗保濕萌芽檢驗n 適用于種子攜帶病菌在種子萌芽階段開始為適用于種子攜帶病菌在種子萌芽階段開始為害，萌發(fā)期或幼苗早期表現(xiàn)癥狀，或種子未萌芽，害，萌發(fā)期或幼苗早期表現(xiàn)癥狀，或種子未萌芽，種表長出病菌的種傳病害。種表長出病菌的種傳病害。n可以檢測種子的帶菌情況，發(fā)芽情況，種內(nèi)感染可以檢測種子的帶菌情況，發(fā)芽情況，種內(nèi)感染情況。情況。3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法A 保濕培養(yǎng)檢驗保濕培養(yǎng)檢驗（吸水紙，冷凍吸水紙，瓊脂平（吸水紙，冷凍吸水紙，瓊脂平皿

21、法）皿法）n吸水紙法：吸水紙吸足無菌水，放入培養(yǎng)皿，種子排放在吸水紙法：吸水紙吸足無菌水，放入培養(yǎng)皿，種子排放在吸水紙上，放入吸水紙上，放入20-28培養(yǎng)，培養(yǎng)，12小時光照小時光照/黑暗，有時加黑暗，有時加入入0.1-0.2%的的2，4-D溶液代替水溶液代替水n冷凍吸水紙法：冷凍吸水紙法：103天，天，202天，天，-20冷凍過夜，然冷凍過夜，然后后20，12小時光照小時光照/黑暗，形成孢子，避免伸長黑暗，形成孢子，避免伸長n瓊脂平皿法：瓊脂平皿法：1.5-1.7%的瓊脂液，制成平板，將種子放入的瓊脂液，制成平板，將種子放入3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法nB 砂內(nèi)萌芽檢驗法砂內(nèi)萌芽

22、檢驗法n 河砂（河砂（1mm篩孔）及容器滅菌（干熱滅菌），注入篩孔）及容器滅菌（干熱滅菌），注入冷開水至砂量的冷開水至砂量的60%左右（左右（17%含水量），低容器邊緣含水量），低容器邊緣4厘米，排列種子，加砂覆蓋厘米，排列種子，加砂覆蓋2-3厘米，厘米，25培養(yǎng)，幼芽連培養(yǎng)，幼芽連根拔出。檢測幼苗和未發(fā)芽種子癥狀以及種苗上有無孢子。根拔出。檢測幼苗和未發(fā)芽種子癥狀以及種苗上有無孢子。nC 土內(nèi)萌芽檢驗法土內(nèi)萌芽檢驗法nD 試管幼苗癥狀測定法試管幼苗癥狀測定法3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（8）分離培養(yǎng)檢驗分離培養(yǎng)檢驗n適用于種子內(nèi)部，不易發(fā)現(xiàn)和鑒定的病原菌，或適用于種子內(nèi)部，不易

23、發(fā)現(xiàn)和鑒定的病原菌，或種子雖有病斑，但無病征或種表攜帶的種傳病害。種子雖有病斑，但無病征或種表攜帶的種傳病害。專性寄生物（病毒，白粉，銹菌等）除外專性寄生物（病毒，白粉，銹菌等）除外n A 分離潛伏于種表或深層的病菌；分離潛伏于種表或深層的病菌；B 確定病菌的潛伏部位；確定病菌的潛伏部位；C 了解種子外部攜帶的菌群；了解種子外部攜帶的菌群；D 了解種子感染和萌發(fā)的總體情況；了解種子感染和萌發(fā)的總體情況；E 分離無性繁殖材料所攜帶的病菌分離無性繁殖材料所攜帶的病菌n細菌的分離培養(yǎng)細菌的分離培養(yǎng)n培養(yǎng)基：肉汁胨培養(yǎng)基（牛肉浸膏培養(yǎng)基：肉汁胨培養(yǎng)基（牛肉浸膏3g，蛋白胨，蛋白胨5-10g，瓊，瓊脂脂

24、17-20g，水，水1000ml）n劃線分離法：種表消毒磨碎，無菌水將細菌溢出，接種環(huán)劃線分離法：種表消毒磨碎，無菌水將細菌溢出，接種環(huán)蘸取劃線。將單個細菌分開，經(jīng)培養(yǎng)后形成單菌落，獲得蘸取劃線。將單個細菌分開，經(jīng)培養(yǎng)后形成單菌落，獲得純菌株。純菌株。n平板稀釋法：病原細菌數(shù)量大，稀釋培養(yǎng)使病原細菌與雜平板稀釋法：病原細菌數(shù)量大，稀釋培養(yǎng)使病原細菌與雜菌分開，形成純培養(yǎng)。培養(yǎng)皿菌分開，形成純培養(yǎng)。培養(yǎng)皿4個，個，1ml無菌水，接種環(huán)攪無菌水，接種環(huán)攪勻，依次移入勻，依次移入2、3、4皿，倒培養(yǎng)基（皿，倒培養(yǎng)基（45）。）。3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（9）接種檢驗接種檢驗n 有時

25、在植物發(fā)病部位發(fā)現(xiàn)或混雜在進境種子有時在植物發(fā)病部位發(fā)現(xiàn)或混雜在進境種子里的真菌，并不是引起該種病害的病原真菌，可里的真菌，并不是引起該種病害的病原真菌，可能是由其他雜菌污染所造成的。能是由其他雜菌污染所造成的。3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n拌種拌種接種：種子和孢子拌勻接種：種子和孢子拌勻n浸種浸種接種：菌絲段、孢子或細菌懸浮液接種：菌絲段、孢子或細菌懸浮液n花期花期接種：（花期侵入的病菌）小麥散黑穗病接種：（花期侵入的病菌）小麥散黑穗病n噴霧噴霧接種：細菌或懸浮液稀釋，接種：細菌或懸浮液稀釋，22-28 保溫保溫n針刺針刺接種：需要傷口侵入的病原物接種：需要傷口侵入的病原物n剪葉

26、剪葉接種：傷口侵入的細菌（水稻白葉枯病）接種：傷口侵入的細菌（水稻白葉枯?。﹏摩擦摩擦接種：病毒，隔離條件下進行，金剛砂接種：病毒，隔離條件下進行，金剛砂n土壤接種，蘸根接種，根部切傷接種，涂抹法土壤接種，蘸根接種，根部切傷接種，涂抹法3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（10）化學染色檢驗化學染色檢驗n 不同的化學品，對細菌、真菌、病毒等染色，不同的化學品，對細菌、真菌、病毒等染色，鑒別有無病原體及其種類鑒別有無病原體及其種類n植物細菌性病害（革蘭氏染色）植物細菌性病害（革蘭氏染色）n步驟：切開病部，擠壓挑取菌膿，結晶紫草酸胺液染色步驟：切開病部，擠壓挑取菌膿，結晶紫草酸胺液染色1分，

27、碘液染色分，碘液染色1分，分，95%的乙醇褪色的乙醇褪色30秒，番紅染秒，番紅染10秒，秒，干燥后鏡檢。干燥后鏡檢。n馬鈴薯環(huán)腐病，陽性，紫色，青枯病菌陰性，紅色馬鈴薯環(huán)腐病，陽性，紫色，青枯病菌陰性，紅色曲利苯藍曲利苯藍未被侵染未被侵染被侵染被侵染小麥散黑穗病小麥散黑穗病3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（11）熒光反應檢驗熒光反應檢驗n 植物細胞中含有各種核酸，在紫外線下能發(fā)植物細胞中含有各種核酸，在紫外線下能發(fā)生熒光，細菌、真菌、病毒等有熒光反應，并且生熒光，細菌、真菌、病毒等有熒光反應，并且它們比正常組織的熒光反應要強。它們比正常組織的熒光反應要強。n 凡感染環(huán)腐病的馬鈴薯塊莖

28、切面均呈現(xiàn)綠色的熒光，凡感染環(huán)腐病的馬鈴薯塊莖切面均呈現(xiàn)綠色的熒光，凡無病的薯塊則呈現(xiàn)紫色熒光；而革蘭氏陽性細菌為害的凡無病的薯塊則呈現(xiàn)紫色熒光；而革蘭氏陽性細菌為害的薯塊都為黃色、藍色或綠色。菜豆日燒病菌和菜豆細菌性薯塊都為黃色、藍色或綠色。菜豆日燒病菌和菜豆細菌性疫病菌在浮白色或淺黃色豆粒上產(chǎn)生藍白色熒光。疫病菌在浮白色或淺黃色豆粒上產(chǎn)生藍白色熒光。n注意：少數(shù)有病種子有時不發(fā)光，而健康種子可注意：少數(shù)有病種子有時不發(fā)光，而健康種子可能會發(fā)較強光。能會發(fā)較強光。3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（12）血清學檢驗血清學檢驗n 血清學方法是病毒診斷和鑒定的基礎方法。血清學方法是病毒診

29、斷和鑒定的基礎方法。其基本原理是抗體與抗原之間的?；越Y合。其基本原理是抗體與抗原之間的?；越Y合。n方法方法：n 酶聯(lián)免疫吸附法、斑點免疫結合測定法、免疫酶聯(lián)免疫吸附法、斑點免疫結合測定法、免疫擴散、免疫電泳、熒光免疫免疫膠體金技術。擴散、免疫電泳、熒光免疫免疫膠體金技術。ELISA 流程流程Indirect ELISADirect ELISA3.2.2.2 室內(nèi)檢驗方法室內(nèi)檢驗方法n（13）PCR檢測檢測n 聚合酶鏈式反應聚合酶鏈式反應( Polymerase chain reaction, PCR)技術已廣泛用于病毒、細菌、真菌、植原體、技術已廣泛用于病毒、細菌、真菌、植原體、害蟲和雜草

30、等檢測。害蟲和雜草等檢測。n方法：提取病原物的方法：提取病原物的DNA，設計特異性引物，利，設計特異性引物，利用用PCR技術進行相應真菌種類的鑒定。技術進行相應真菌種類的鑒定。n因其靈敏度高、特異性強，已經(jīng)成為實驗室對有因其靈敏度高、特異性強，已經(jīng)成為實驗室對有害生物檢疫的重要手段。害生物檢疫的重要手段。n產(chǎn)地檢驗與室內(nèi)檢驗的關系：產(chǎn)地檢驗與室內(nèi)檢驗的關系：n（1）有些種子帶病無明顯癥狀，不能分離培養(yǎng)，）有些種子帶病無明顯癥狀，不能分離培養(yǎng)，實驗室無法檢驗，需產(chǎn)地檢驗，尤其檢疫性病害實驗室無法檢驗，需產(chǎn)地檢驗，尤其檢疫性病害n（2）產(chǎn)地檢驗主要靠肉眼，比較粗放）產(chǎn)地檢驗主要靠肉眼，比較粗放n（

31、3）產(chǎn)地檢驗現(xiàn)場即可確定留種用的種子，但種）產(chǎn)地檢驗現(xiàn)場即可確定留種用的種子，但種子在收獲、脫粒、加工、貯藏、轉運等過程中，子在收獲、脫粒、加工、貯藏、轉運等過程中，會將無病種子變成有病。會將無病種子變成有病。種子病害檢驗小結種子病害檢驗小結n1 一種病原生物的檢驗可以用多種檢驗方法；一種病原生物的檢驗可以用多種檢驗方法；n2 一種檢驗方法可以用作多種病原生物的檢驗；一種檢驗方法可以用作多種病原生物的檢驗；n3 進行病原生物檢驗時多種檢驗方法綜合利用，進行病原生物檢驗時多種檢驗方法綜合利用，以便及時快速地得出準確的結論以便及時快速地得出準確的結論n真菌：肉眼，過篩，比重，解剖，洗滌，保濕萌真菌：肉眼，