1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)與其產(chǎn)生甲硫氨酸腦啡肽的關(guān)系安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2000年第3期第35卷 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究作者：徐星銘戴宏魏偉單位：徐星銘戴宏（安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，合肥230022）；魏偉（安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所，合肥230032）關(guān)鍵詞：紅斑狼瘡；系統(tǒng)性；血液；淋巴細(xì)胞；腦啡肽；甲硫氨酸摘要目的研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血淋巴細(xì)胞(PBL)增殖反應(yīng)與其產(chǎn)生甲硫氨酸腦啡肽(Met-Enk)的關(guān)系。方法淋巴細(xì)胞增殖法和Met-Enk放免測定。結(jié)果SLE患者PBL增殖反應(yīng)異常增高的同時，其產(chǎn)生的Met-Enk亦明顯升高。結(jié)論PBL產(chǎn)生的內(nèi)源性Met-En

2、k可能參與了SLE患者PBL增殖反應(yīng)的異常改變。 中圖分類號R593.24文獻標(biāo)識碼A文章編號1000-1492(2000)03-0184-02Relation between proliferationand methionine-enkephalin production of the peripheral bloodlymphocyte from patients with systemic lupus erythematosusXu Xingming,Dai Hong(The First Affiliated Hospital）Wei Wei（Institute of Clinical

3、Pharmacology,Anhui Medical University,Hefei 230032)Abstract Objective To observe the relationship between proliferation and methionine-enkephalin(Met-Enk) production of the peripheral blood lymphocyte(PBL) from patients with systemic lupus erythematosus(SLE). Methods Lymphocyte proliferation and Met

4、-Enk radioimmunoassay were used. Results The abnormal increase of PBL proliferation in SLE patients was related to the increase of Met-Enk production. Conclusion Endogenous Met-Enk produced by PBL may participate in the abnormal proliferation with SLE PBL.MeSH lupus erythematosus, systemic; blood, l

5、ymphocytes; enkephalin, methionine內(nèi)源性阿片肽(endogenous opioid,EOP)參與了免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)，-內(nèi)啡肽(-endophin,-End)對淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響不能被納絡(luò)酮(naloxone,Nal)阻斷，此可能是由-End特異性的非阿片受體機制所介導(dǎo)1。而甲硫氨酸腦啡肽(methionine-enkephalin,Met-Enk)主要由刀豆蛋白A或植物血凝素誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞釋放，通過自分泌、旁分泌途徑對細(xì)胞增殖主要表現(xiàn)為調(diào)節(jié)作用2。然而，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴細(xì)胞(pe

6、ripheral blood lymphocyte,PBL)異常增殖反應(yīng)與PBL產(chǎn)生Met-Enk的關(guān)系尚未見報道。1材料1.1SLE患者來源安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)科就診患者。均符合1982年美國風(fēng)濕病學(xué)會SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為SLE。1.2人PBL的制備無菌取靜脈血3 ml放入肝素抗凝管中。取10 ml離心管，預(yù)先加入2.5 ml淋巴細(xì)胞分離液，用滴管吸取抗凝血2 ml，離分層液約1 cm處，沿管壁緩慢加入。離心400×g，20 min，吸棄血漿層至淋巴細(xì)胞層0.5 cm處，將淋巴細(xì)胞和少許分離液一起移入10 ml離心管中，加入5倍體積pH 7.2無鈣、無鎂的Hanks液中混勻，

7、以760×g離心10 min，棄上清再反復(fù)洗2次，計數(shù)后用于實驗。1.3主要儀器與設(shè)備Napco-6100 CO2培養(yǎng)箱，美國杜邦公司；XSZ倒置顯微鏡，重慶光學(xué)儀器廠；YJ-1450型醫(yī)用凈化工作臺，蘇州凈化設(shè)備公司；TGL-16c臺式高速離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；GL20A全自動高速冷凍離心機，湖南儀器儀表總廠離心機廠；FJ-2011自動計數(shù)儀，西安262廠；EL301 Strip reader(酶標(biāo)儀)，美國Bio-Tek公司。ODS-硅膠柱(Se08p-Pak)，美國Incstar公司。1.4試劑與藥物RPMI1640培養(yǎng)粉：美國Gibco公司產(chǎn)品。完全RPMI1640培養(yǎng)

8、液加25 mmol*L-1 Hepes,1 mmol*L-1丙酮酸鈉，2 mmol*L-1谷氨酰胺，50 mol*L-1二巰基乙醇，1×105 IU*L-1青霉素G，100 mg*L-1鏈霉素，10%(體積分?jǐn)?shù))小牛血清，pH為7.4。植物血凝素(phytohemmaglutinin,PHA)：美國Serva公司產(chǎn)品)。四甲基偶氮唑鹽(MTT)：美國Sigma公司產(chǎn)品，用含5 g*L-1葡萄糖的磷酸緩沖液(0.02 mol*L-1 pH 7.2)配成5 g*L-1使用液，4冰箱避光保存。甲硫氨酸腦啡肽(125I-Met-Enk)藥盒：美國Incstar公司產(chǎn)品。2方法2.1人PBL增

9、殖反應(yīng)3常規(guī)制備人PBL懸液，用完全RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)成1×1010*L-1。于96孔培養(yǎng)板中每孔加入細(xì)胞懸液100 l，4 mg*L-1 PHA 100 l，置0.05 CO2、37培養(yǎng)48 h。于每孔加入5 g*L-1的MTT液100 l，于振蕩器上振蕩1 min，再放入0.05 CO2、37培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h。培養(yǎng)結(jié)束后以760×g離心10 min，吸棄上清后每孔加入酸化異丙醇120 l，于振蕩器上振蕩30 s，在酶標(biāo)儀上于570 nm波長處讀每孔吸光度(absorbance,A)，結(jié)果以其A的均值表示。2.2PBL的Met-Enk放免測定根據(jù)Incsta

10、r說明書進行。2.3統(tǒng)計分析本研究數(shù)據(jù)以±s表示，以組間t檢驗進行統(tǒng)計處理。3結(jié)果圖1結(jié)果表明，SLE患者PBL增殖反應(yīng)異常增高時，其產(chǎn)生Met-Enk的水平也明顯高于正常人PBL產(chǎn)生Met-Enk的水平。圖1人外周血淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)及其產(chǎn)生甲硫氨酸腦啡肽的關(guān)系(±s,n=5)與正常人比較：*P0.014討論淋巴細(xì)胞在致分裂原的作用下可產(chǎn)生EOP，這些EOP在體內(nèi)同樣具有生物活性，也起著類似神經(jīng)內(nèi)分泌信號分子的作用。Met-Enk可能是主要作用于免疫細(xì)胞的2受體，在免疫調(diào)節(jié)中具有特殊功能4。SLE的病理機制較復(fù)雜，涉及的研究面廣，目前仍十分不清5。本研究表明，PHA可誘導(dǎo)正

11、常人PBL增殖及產(chǎn)生Met-Enk，而且發(fā)現(xiàn)，SLE患者PBL異常增殖的同時，其產(chǎn)生Met-Enk的水平亦明顯升高，提示PBL產(chǎn)生的內(nèi)源性Met-Enk可能參與了SLE患者淋巴細(xì)胞功能的異常調(diào)節(jié)，對于進一步研究SLE免疫病理機制尤其是深入探討EOP與疾病的關(guān)系有一定幫助。作者簡介：徐星銘，女，37歲，碩士，副主任醫(yī)師魏偉，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，副所長，中國藥理學(xué)會抗炎免疫藥理專業(yè)委員會副主任委員參考文獻1，Hazum E,Chang KJ,Guatracasas P. Specific nonopiate receptors for -endorphins. Science,1979;2

12、05(6):1 0331 0352 Linner KM, Quist HE, Sharp BM. Met-enkephalin-containing peptides encoded by proenkephalin a mRNA expressed in actived murine thymocytes inhibit thymocyte proliferation. J Immunol,1995;154(6):5 0495 0603，陳敏珠，魏偉，張泓等.免疫抑制藥和增強藥實驗法.見：徐叔云，卞如濂，陳修主編.藥理實驗方法學(xué). 第2版，北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：1 2081 2454，吳桐，李曉玉.免疫細(xì)胞上的阿片受體