1、xxx 有限公司xxx 無菌方法驗證方案編制：日期：審核：日期：批準：日期：51、驗證目的確認樣品的xx 樣品的抑菌活性，證明所采用的的方法適用于其無菌檢查。2、驗證依據(jù)中國藥典xx 版四部3、試驗所采用的試劑設(shè)備3.1 培養(yǎng)基0.9%氯化鈉溶液批號：生產(chǎn)廠家：胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基批號：生產(chǎn)廠家：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基批號：生產(chǎn)廠家：3.2 菌種金黃色葡萄球菌cmcc（B）26003 批號： 生產(chǎn)廠家： 大腸埃希菌cmcc（B）44102 批號： 生產(chǎn)廠家： 生孢梭菌cmcc（B）64941 批號： 生產(chǎn)廠家： 枯草芽孢桿菌cmcc（B）63501 批號： 生產(chǎn)廠家： 白色念珠菌cmcc（F）9

2、8001 批號： 生產(chǎn)廠家： 黑曲霉cmcc（F）98003 批號： 生產(chǎn)廠家：3.2 設(shè)備生物安全柜編號：型號：生化培養(yǎng)箱編號：型號：霉菌培養(yǎng)箱編號：型號：4、實驗方法4.1 采用直接接種法進行無菌檢查方法驗證。4.2 試驗組取x 件包裝樣品以無菌操作方式打開，將樣品分別投入能完全浸沒樣品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 3 管和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 3 管，其中硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基分別接入不大于 100cfu 的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和生孢梭菌，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基分別接入不大于 100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉。其中硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 30-35培養(yǎng)箱培養(yǎng)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)

3、基置20-25培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不得超過 5 天，逐日觀察，結(jié)果見表一。4.3 陽性對照組取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基分別接入不大于 100cfu 的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和生孢梭菌，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基分別接入不大于 100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉。其中接種枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和生孢梭菌置 30-35培養(yǎng)箱培養(yǎng)，枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉置 20-25培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不得超過 5 天，逐日觀察，結(jié)果見表一。4.4 陰性對照組不采集樣品，不加菌，同試驗組方法，即空白硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。培養(yǎng) 14 天，逐日觀察，結(jié)果見表二。

4、4.5 樣品組取樣品，同試驗組操作，分別加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基管和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管中，其中硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 30-35培養(yǎng)箱培養(yǎng)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置 20-25培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng) 14 天，逐日觀察，結(jié)果見表二。5、結(jié)果表一試驗組和陽性對照組培養(yǎng)結(jié)果組別試驗菌培養(yǎng)時間（天）12345試驗組金黃色葡萄球菌大腸埃希菌生孢梭菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉陽性對照組金黃色葡萄球菌大腸埃希菌生孢梭菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉表二樣品組和陰性對照組培養(yǎng)結(jié)果組別培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果（天）1234567891011121314陰性對照組硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基樣品組硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基注：表中“+”表示有菌生長，表中“-表示無菌生長” 6、結(jié)論通過表一和表二可以看出，采用直接接種法，與陽性菌相比，加入的 6 種菌均可以正常生長