1、細(xì)細(xì) 胞胞 生生 生生 物物 學(xué)學(xué) 研研 究究 方方 法法第二章第二章班級：09級1班學(xué)號：人 生 格 言：既然選擇了遠(yuǎn)方就要風(fēng)雨兼程！本 章 概 括顯微成像技術(shù)細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞分選技術(shù)細(xì)胞工程技術(shù)分離技術(shù)分子生物學(xué)方法2.1 顯顯 微微 成成 像像 技技 術(shù)術(shù)發(fā)展史：1590年，年，Z.janssen和他的侄子和他的侄子H.janssen共同研制出最早的光共同研制出最早的光學(xué)顯微鏡。學(xué)顯微鏡。后來，胡克和列文虎克相繼提高了光學(xué)顯微鏡的分辨率，觀察后來，胡克和列文虎克相繼提高了光學(xué)顯微鏡的分辨率，觀察到了細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。到了細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。2.1.1 光光 學(xué)學(xué) 和和 電電 子子 顯顯 微微 鏡鏡v照

2、明系統(tǒng)照明系統(tǒng)v被觀察的樣品被觀察的樣品v聚焦和成像的透鏡系統(tǒng)聚焦和成像的透鏡系統(tǒng)光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡的主要區(qū)別：光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡的主要區(qū)別：v光源不同光源不同使用的透鏡不同使用的透鏡不同裝置的設(shè)計不同裝置的設(shè)計不同v電子顯微鏡要在真空電子顯微鏡要在真空條件下條件下2.1.1.1 分 辨 率 兩個物點間最小距離的能力兩個物點間最小距離的能力 這種距離成為分辨距離。是透這種距離成為分辨距離。是透鏡最重要的性質(zhì)鏡最重要的性質(zhì) 其中：其中：n=聚光鏡和物鏡之聚光鏡和物鏡之間介質(zhì)的折射率，空氣為間介質(zhì)的折射率，空氣為1，油為油為1.5 =樣品對物鏡孔徑角的半角，樣品對物鏡孔徑角的半角， sin

3、 的最大值為的最大值為1=照明光源照明光源的波長的波長 0.61是一個恒定的參數(shù)，表是一個恒定的參數(shù)，表示成像的點雖被重疊擔(dān)仍能被示成像的點雖被重疊擔(dān)仍能被區(qū)分的程度區(qū)分的程度2.1.1.2分辨極限和放大率最終成像的大小與原物大小的比值稱為放大率可見光的波長的限制光學(xué)顯微鏡的最高分辨率2.1.2 常常 見見 的的 光光 學(xué)學(xué) 顯顯 微微 鏡鏡普通雙筒顯微普通雙筒顯微 熒光顯微鏡熒光顯微鏡相差顯微鏡相差顯微鏡暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡倒置顯微鏡倒置顯微鏡偏光顯微鏡偏光顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) 熒光顯微鏡是以紫外線為光源，熒光顯微鏡是以紫外線為光源

4、， 用以照射被檢物體，用以照射被檢物體， 使之發(fā)出使之發(fā)出熒光，熒光， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。等。倒置顯微鏡倒置顯微鏡（inverted microscope ）組成和普通顯微鏡一樣，組成和普通顯微鏡一樣，只不過只不過物鏡物鏡與與照明照明系統(tǒng)系統(tǒng)顛倒，前者在顛倒，前者在載物臺載物臺之之下，后者在載物臺之上，下，后者在載物臺之上，用于觀察用于觀察培養(yǎng)培養(yǎng)的活的活細(xì)胞細(xì)胞，具有相差物鏡。具有相差物鏡。相差顯微鏡

5、相差顯微鏡(Phase contrast microscope相差顯微鏡由相差顯微鏡由PZernike于于1935年發(fā)年發(fā)明，并因此獲明，并因此獲1953年諾貝爾物理學(xué)，年諾貝爾物理學(xué)，這種顯微鏡最大的特點是可以觀察未這種顯微鏡最大的特點是可以觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細(xì)胞。經(jīng)染色的標(biāo)本和活細(xì)胞。 差顯微鏡具有兩個其他顯微鏡所不具差顯微鏡具有兩個其他顯微鏡所不具有的功能有的功能:將直射的光將直射的光(視野中背景視野中背景光光)與經(jīng)物體衍射的光分開與經(jīng)物體衍射的光分開;將大約將大約一半的波長從相位中除去，使之不能一半的波長從相位中除去，使之不能發(fā)生相互作用，從而引起強度的變化。發(fā)生相互作用，從而引起

6、強度的變化。暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡（dark field microscope） 暗視野顯微鏡又叫暗場顯微鏡，是一種通過觀察樣品受側(cè)向光照射時所產(chǎn)生的散射光來分辨樣品細(xì)節(jié)的特殊顯微鏡。暗視野顯微鏡主要用于檢查未染色標(biāo)本的形態(tài)和運動暗視野顯微鏡主要用于檢查未染色標(biāo)本的形態(tài)和運動能力。暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區(qū)別在于能力。暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區(qū)別在于二者的聚光器不同，暗視野顯微鏡裝有一個中央遮暗二者的聚光器不同，暗視野顯微鏡裝有一個中央遮暗的聚光器，使光線不能通過聚光器，而只能從聚光器的聚光器，使光線不能通過聚光器，而只能從聚光器四周邊及未遮暗的部位斜射到載玻片的標(biāo)本上。因光

7、四周邊及未遮暗的部位斜射到載玻片的標(biāo)本上。因光線是斜射的，不能進(jìn)入物鏡，故觀察的視野是暗的，線是斜射的，不能進(jìn)入物鏡，故觀察的視野是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線，因光散射作用而使菌而聚光器斜射到菌體上的光線，因光散射作用而使菌體發(fā)出亮光，反射到物鏡內(nèi)，這樣在顯微鏡中可見到體發(fā)出亮光，反射到物鏡內(nèi)，這樣在顯微鏡中可見到暗視野暗視野2.1.3 光學(xué)顯微鏡的樣品制備光學(xué)顯微鏡的樣品制備樣品可粗略的分為兩類：整體和切片樣品可粗略的分為兩類：整體和切片步驟：步驟：1、樣品的固定、樣品的固定殺死細(xì)胞、穩(wěn)定細(xì)胞的化學(xué)成分殺死細(xì)胞、穩(wěn)定細(xì)胞的化學(xué)成分2、包埋和切片、包埋和切片液體的石蠟或樹脂做包埋劑，使之

8、滲入整塊組織，硬化成固體包液體的石蠟或樹脂做包埋劑，使之滲入整塊組織，硬化成固體包埋塊，然后切割埋塊，然后切割3、染色、染色給細(xì)胞的不同組分帶上可區(qū)別的顏色特征給細(xì)胞的不同組分帶上可區(qū)別的顏色特征2.1.4電子顯微鏡（電子顯微鏡（electron microscope） 電子顯微鏡（電子顯微鏡（electron microscope），簡稱電鏡，是使用電子來展示物件的），簡稱電鏡，是使用電子來展示物件的內(nèi)部或表面的顯微鏡。內(nèi)部或表面的顯微鏡。1932年，德國學(xué)者年，德國學(xué)者Knolls和和Ruska發(fā)明了第一臺電子顯微鏡，開拓了超微世界。發(fā)明了第一臺電子顯微鏡，開拓了超微世界。觀察到了亞顯微結(jié)

9、構(gòu)，即超微結(jié)構(gòu)。觀察到了亞顯微結(jié)構(gòu)，即超微結(jié)構(gòu)。到了二十世紀(jì)到了二十世紀(jì)40年代，美國的年代，美國的希爾希爾用消像散器補償電子透鏡的旋轉(zhuǎn)不對稱性，用消像散器補償電子透鏡的旋轉(zhuǎn)不對稱性，使電子顯微鏡的分辨本領(lǐng)有了新的突破，逐步達(dá)到了現(xiàn)代水平。在中國，使電子顯微鏡的分辨本領(lǐng)有了新的突破，逐步達(dá)到了現(xiàn)代水平。在中國，1958年研制成功透射式電子顯微鏡，其分辨本領(lǐng)為年研制成功透射式電子顯微鏡，其分辨本領(lǐng)為3納米，納米，1979年又制成分辨本領(lǐng)年又制成分辨本領(lǐng)為為0.3納米的大型電子顯微鏡。納米的大型電子顯微鏡。種類：透射電子顯微鏡種類：透射電子顯微鏡 掃描電子顯微鏡掃描電子顯微鏡高速的電子的波長比可見

10、光的波長短（高速的電子的波長比可見光的波長短（波粒二象性波粒二象性），而顯微鏡的分辨率受其），而顯微鏡的分辨率受其使用的波長的限制，因此電子顯微鏡的分辨率（約使用的波長的限制，因此電子顯微鏡的分辨率（約0.2納米）遠(yuǎn)高于納米）遠(yuǎn)高于光學(xué)顯微光學(xué)顯微鏡鏡的分辨率（約的分辨率（約200納米納米掃描電子顯微鏡（掃描電子顯微鏡（scanning electron microscopy，SEM ）1938 第一部掃描電子顯微鏡由第一部掃描電子顯微鏡由Von Ardenne 發(fā)展發(fā)展成功。成功。 完全不同于透射電子顯微鏡的方式成像，即用完全不同于透射電子顯微鏡的方式成像，即用電視的方式成像。電視的方式成像

11、。掃描電子顯微鏡主要是利用二次電子掃描電子顯微鏡主要是利用二次電子信號成像來觀察樣品的表面形態(tài)，即信號成像來觀察樣品的表面形態(tài)，即用極狹窄的電子束去掃描樣品，通過用極狹窄的電子束去掃描樣品，通過電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效應(yīng)，其中主要是樣品的二次電子發(fā)射。應(yīng)，其中主要是樣品的二次電子發(fā)射。二次電子能夠產(chǎn)生樣品表面放大的形二次電子能夠產(chǎn)生樣品表面放大的形貌像，這個像是在樣品被掃描時按時貌像，這個像是在樣品被掃描時按時序建立起來的，即使用逐點成像的方序建立起來的，即使用逐點成像的方法獲得放大像。法獲得放大像。射透電子顯微鏡射透電子顯微鏡（transmission

12、 electron microscope，TEM）電子顯微術(shù)的主要電子光學(xué)儀器。主體部分電子顯微術(shù)的主要電子光學(xué)儀器。主體部分是是電子透鏡和顯像記錄系統(tǒng)，由置于真空中和顯像記錄系統(tǒng)，由置于真空中的電子槍、聚光鏡、物樣室、的電子槍、聚光鏡、物樣室、 物鏡、衍射鏡、中間鏡、中間鏡、 投影鏡、熒光屏和投影鏡、熒光屏和照相機等等組成。與光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)完全類似（見組成。與光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)完全類似（見圖）。透射電子顯微鏡的工作原理是一單色、圖）。透射電子顯微鏡的工作原理是一單色、單向、均勻而高速的微電子束單向、均勻而高速的微電子束. 這種電鏡適用于晶體結(jié)構(gòu)和缺陷的直接這種電鏡適用于晶體結(jié)構(gòu)和缺陷的直接成

13、像，即能觀測原子或原團(tuán)的排列成像，即能觀測原子或原團(tuán)的排列,又能確又能確定其所處的空間位置。另一類配有定其所處的空間位置。另一類配有X射線能射線能譜儀、電子能量損失譜儀、俄歇電子譜儀和譜儀、電子能量損失譜儀、俄歇電子譜儀和掃描附件等的分析型電鏡，可用于小至直徑掃描附件等的分析型電鏡，可用于小至直徑 4納米范圍內(nèi)的晶體形態(tài)、成分和結(jié)構(gòu)的分納米范圍內(nèi)的晶體形態(tài)、成分和結(jié)構(gòu)的分析。地質(zhì)學(xué)中用于微細(xì)礦物，如析。地質(zhì)學(xué)中用于微細(xì)礦物，如粘土礦物的的形態(tài)觀察與鑒定；微細(xì)礦物的顯微雙晶、出形態(tài)觀察與鑒定；微細(xì)礦物的顯微雙晶、出溶、相變和位錯研究等。溶、相變和位錯研究等。 2.1.5 電子顯微鏡的樣品制備樣品

14、要薄樣品要薄;要求很好的保持樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)要求很好的保持樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)樣品要具有一定的反差樣品要具有一定的反差特殊技術(shù)特殊技術(shù) 負(fù)染色負(fù)染色噴灌技術(shù)噴灌技術(shù)冷凍斷裂復(fù)原和冷凍蝕刻冷凍斷裂復(fù)原和冷凍蝕刻2.1.6 間接成像技術(shù)間接成像技術(shù)它作為一種掃描探針顯微它作為一種掃描探針顯微術(shù)工具，掃描隧道顯微鏡術(shù)工具，掃描隧道顯微鏡可以讓科學(xué)家觀察和定位可以讓科學(xué)家觀察和定位單個原子，它具有比它的單個原子，它具有比它的同類同類原子力顯微鏡原子力顯微鏡更加高更加高的分辨率。此外，掃描隧的分辨率。此外，掃描隧道顯微鏡在低溫下（道顯微鏡在低溫下（4K）可以利用探針尖端精確操可以利用探針尖端精確操縱原子，因此它

15、在縱原子，因此它在納米科納米科技技既是重要的測量工具又既是重要的測量工具又是加工工具。是加工工具。一種可用來研究包括絕緣體在內(nèi)的一種可用來研究包括絕緣體在內(nèi)的固體材料表面結(jié)構(gòu)的分析儀器。它固體材料表面結(jié)構(gòu)的分析儀器。它通過檢測待測樣品表面和一個微型通過檢測待測樣品表面和一個微型力敏感元件之間的極微弱的原子間力敏感元件之間的極微弱的原子間相互作用力來研究物質(zhì)的表面結(jié)構(gòu)相互作用力來研究物質(zhì)的表面結(jié)構(gòu)及性質(zhì)。及性質(zhì)。原子力學(xué)顯微鏡原子力學(xué)顯微鏡2.2細(xì)胞化學(xué)技術(shù)2.2.1酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（enzyme cytochemistry）酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)：酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)： 將細(xì)胞內(nèi)的酶與底物相將細(xì)

16、胞內(nèi)的酶與底物相互作用，互作用， 再將酶反應(yīng)的產(chǎn)物作為反應(yīng)物質(zhì)，再將酶反應(yīng)的產(chǎn)物作為反應(yīng)物質(zhì)，在酶的作用部位進(jìn)行捕捉，使其在顯微鏡下在酶的作用部位進(jìn)行捕捉，使其在顯微鏡下具有可見性。這種在酶作用下產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物，具有可見性。這種在酶作用下產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物， 經(jīng)捕捉反應(yīng)來間接證明酶定位的反應(yīng)稱為酶經(jīng)捕捉反應(yīng)來間接證明酶定位的反應(yīng)稱為酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。 1、基本原理基本原理 酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)包括兩個反應(yīng)酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)包括兩個反應(yīng): 第一反應(yīng)是酶作用第一反應(yīng)是酶作用于底物的反應(yīng)，于底物的反應(yīng)， 稱酶反應(yīng)，形成的產(chǎn)物稱為初級反應(yīng)產(chǎn)物稱酶反應(yīng)，形成的產(chǎn)物稱為初級反應(yīng)產(chǎn)物;第二反應(yīng)是捕捉劑與初

17、級反應(yīng)產(chǎn)物的作用，稱捕捉反應(yīng)，第二反應(yīng)是捕捉劑與初級反應(yīng)產(chǎn)物的作用，稱捕捉反應(yīng)，產(chǎn)生最終反應(yīng)產(chǎn)物：產(chǎn)生最終反應(yīng)產(chǎn)物： 酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng) 酶酶+條件條件 捕捉劑捕捉劑 底物底物初級反應(yīng)產(chǎn)物初級反應(yīng)產(chǎn)物 最終反應(yīng)產(chǎn)物最終反應(yīng)產(chǎn)物 （酶反應(yīng)）（酶反應(yīng)） （捕捉反應(yīng)）（捕捉反應(yīng)） 2.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)技免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)術(shù)利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、熒光素、酶、金屬離子、同位素金屬離子、同位素) 顯色來確定細(xì)胞內(nèi)抗原顯色來確定細(xì)胞內(nèi)抗原的成分的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì)主要是

18、多肽和蛋白質(zhì))，對其進(jìn)行定，對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫細(xì)胞化學(xué)位、定性及定量的研究，稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。技術(shù)。免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù) 將免疫學(xué)方法將免疫學(xué)方法(抗原抗體特異結(jié)合抗原抗體特異結(jié)合)與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。 免疫電鏡技術(shù)免疫電鏡技術(shù) 免疫電鏡技術(shù)是免疫化學(xué)技術(shù)與電鏡技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物，是在免疫電鏡技術(shù)是免疫化學(xué)技術(shù)與電鏡技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物，是在超微結(jié)構(gòu)水平研究和觀察抗原、結(jié)合定位的一種方法學(xué)。超微結(jié)構(gòu)水平研究和觀察抗原、結(jié)合定位的一種方法學(xué)。 2.3細(xì)胞分選技術(shù)概念；概念； 主要用

19、流式細(xì)胞儀對細(xì)胞或染色體進(jìn)行分選，并對單個細(xì)主要用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞或染色體進(jìn)行分選，并對單個細(xì)胞或其他生物微粒進(jìn)行定量分析，包括測量細(xì)胞的大小、形狀、胞或其他生物微粒進(jìn)行定量分析，包括測量細(xì)胞的大小、形狀、細(xì)胞細(xì)胞DNA、RNA含量和細(xì)胞總蛋白等。含量和細(xì)胞總蛋白等。工作原理工作原理 將待測細(xì)胞染色后制成單細(xì)胞懸液。用一定壓力將待測樣品將待測細(xì)胞染色后制成單細(xì)胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，壓入流動室，不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就

20、能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細(xì)胞在夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。 2.4 細(xì)胞工程技術(shù)細(xì)胞工程技術(shù)概念；概念；細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)的交叉領(lǐng)域，主要利用細(xì)胞生物學(xué)的原理和細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)的交叉領(lǐng)域，主要利用細(xì)胞生物學(xué)的原理和方法，結(jié)合工程學(xué)的技術(shù)手段，按照人們預(yù)先的設(shè)計，有計劃地方法，結(jié)合工程學(xué)的技術(shù)手段，按照人們預(yù)先的設(shè)計，有計劃地改變或創(chuàng)造細(xì)胞遺傳性的技術(shù)。包括體外大量培養(yǎng)和繁殖細(xì)胞，改變或創(chuàng)造細(xì)胞遺傳性的技術(shù)。包括體外大量培養(yǎng)和繁殖細(xì)胞，或獲得細(xì)胞產(chǎn)品、或利用細(xì)胞體本身

21、。主要內(nèi)容包括：細(xì)胞融合、或獲得細(xì)胞產(chǎn)品、或利用細(xì)胞體本身。主要內(nèi)容包括：細(xì)胞融合、細(xì)胞生物反應(yīng)器、染色體轉(zhuǎn)移、細(xì)胞器移植、基因轉(zhuǎn)移、細(xì)胞及細(xì)胞生物反應(yīng)器、染色體轉(zhuǎn)移、細(xì)胞器移植、基因轉(zhuǎn)移、細(xì)胞及組織培養(yǎng)。組織培養(yǎng)。 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) (Cellculture ）概念；概念；是指從體內(nèi)取出組織，經(jīng)消化酶消化成單細(xì)胞或細(xì)胞群，是指從體內(nèi)取出組織，經(jīng)消化酶消化成單細(xì)胞或細(xì)胞群，模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下使細(xì)胞生存和生長并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。使細(xì)胞生存和生長并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。 v體外細(xì)胞培養(yǎng)體外細(xì)胞培養(yǎng)

22、原代培養(yǎng)原代培原代培養(yǎng)原代培細(xì)胞系和細(xì)胞株細(xì)胞系和細(xì)胞株動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的區(qū)別動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的區(qū)別a.培養(yǎng)基不同：植物細(xì)胞（固體培養(yǎng)基），動物細(xì)胞（液體培養(yǎng)基不同：植物細(xì)胞（固體培養(yǎng)基），動物細(xì)胞（液體培養(yǎng)基）培養(yǎng)基）b.培養(yǎng)基的成分不同：動物細(xì)胞培養(yǎng)必須利用動物血清，植培養(yǎng)基的成分不同：動物細(xì)胞培養(yǎng)必須利用動物血清，植物組織培養(yǎng)則不需要。物組織培養(yǎng)則不需要。c.產(chǎn)物不同：植物組織培養(yǎng)最后一般產(chǎn)物不同：植物組織培養(yǎng)最后一般得到新的植物個體，而動物細(xì)胞培養(yǎng)因為動物體細(xì)胞一般得到新的植物個體，而動物細(xì)胞培養(yǎng)因為動物體細(xì)胞一般不能表達(dá)其全能性，因此得到的是同一種的細(xì)胞。不能表達(dá)

23、其全能性，因此得到的是同一種的細(xì)胞。d.原理不同：植物組織培養(yǎng)的原理為植物細(xì)胞的全能性，動原理不同：植物組織培養(yǎng)的原理為植物細(xì)胞的全能性，動物細(xì)胞培養(yǎng)的原理為細(xì)胞的增殖。物細(xì)胞培養(yǎng)的原理為細(xì)胞的增殖。2.4.2細(xì)胞融合與單克隆抗體細(xì)胞融合與單克隆抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個不同基因型的細(xì)胞或原生在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個雜種細(xì)胞的過程。質(zhì)體融合形成一個雜種細(xì)胞的過程。細(xì)胞融合技術(shù)是一種新的獲得雜交細(xì)胞以改變細(xì)胞融合技術(shù)是一種新的獲得雜交細(xì)胞以改變細(xì)胞性能的技術(shù)。細(xì)胞融合可以在分類學(xué)上親細(xì)胞性能的技術(shù)。細(xì)胞融合可以在分類學(xué)上親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的生物之

24、間進(jìn)行，因此它不但是菌緣關(guān)系較遠(yuǎn)的生物之間進(jìn)行，因此它不但是菌種改良的一種重要手段，而且是動物或植物品種改良的一種重要手段，而且是動物或植物品種改良的一種有潛力的方法。種改良的一種有潛力的方法。 單克隆技術(shù)單克隆技術(shù)單可隆抗體是指由一個單可隆抗體是指由一個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的可識別的一種抗原表位的細(xì)胞克隆產(chǎn)生的可識別的一種抗原表位的同源抗體。基本原理是用小鼠同源抗體?；驹硎怯眯∈驜淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞和單克隆技淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞和單克隆技術(shù)。術(shù)。 2.4.3 動物細(xì)胞核移植克隆技術(shù)動物細(xì)胞核移植克隆技術(shù)多利羊的克隆過程：2.5 分離技術(shù)分離技術(shù)2.5.1 離心分離技術(shù)離心分離技術(shù) 借助于離心力，

25、使比重不同的物質(zhì)進(jìn)行分離的方法。由于借助于離心力，使比重不同的物質(zhì)進(jìn)行分離的方法。由于離心機離心機等設(shè)等設(shè)備可產(chǎn)生相當(dāng)高的角速度，使離心力遠(yuǎn)大于重力，于是溶液中的懸浮物便備可產(chǎn)生相當(dāng)高的角速度，使離心力遠(yuǎn)大于重力，于是溶液中的懸浮物便易于沉淀析出易于沉淀析出:又由于比重不同的物質(zhì)所受到的離心力不同，從而沉降速度又由于比重不同的物質(zhì)所受到的離心力不同，從而沉降速度不同，能使比重不同的物質(zhì)達(dá)到分離。不同，能使比重不同的物質(zhì)達(dá)到分離。 有差速離心、密度梯度離心（速度沉降、等密度沉降）有差速離心、密度梯度離心（速度沉降、等密度沉降）2.5.2 層析分離技術(shù)層析分離技術(shù)層析（層析（chromatogra

26、phy），是根據(jù)蛋白質(zhì)的形態(tài)、大小和電），是根據(jù)蛋白質(zhì)的形態(tài)、大小和電荷的不同而設(shè)計的物理分離方法。荷的不同而設(shè)計的物理分離方法。凝膠過濾層析凝膠過濾層析 gel離子交換層析（離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為簡稱為IEC） 親和層析親和層析(affinity chromatography)2.6 分子生物學(xué)方法基因工程技術(shù)基因作圖與人類基因組計劃PCR 技 術(shù)選擇性基因剔除和轉(zhuǎn)基因鼠乳腺生物反應(yīng)器技術(shù) 2.6.1 基因工程技術(shù)基因工程技術(shù)定義：定義：基因工程包括把來自不同生物的基因同有自主復(fù)制能力的載體DNA在體外人工連接，構(gòu)成新的重組的DNA，然后送

27、到受體生物中去表達(dá)，從而產(chǎn)生遺傳物質(zhì)和狀態(tài)的轉(zhuǎn)移和重新組合。2.6.2基因作圖和人類基因組計劃發(fā)展發(fā)展：人類基因組計劃人類基因組計劃(human genome project, HGP)是由是由美國美國科學(xué)家于科學(xué)家于1985年率先提出，于年率先提出，于1990年正式啟動的。美國、英國、年正式啟動的。美國、英國、法蘭西共和國、德意志聯(lián)邦共和國、日本和我國科學(xué)家共同參與了法蘭西共和國、德意志聯(lián)邦共和國、日本和我國科學(xué)家共同參與了這一價值達(dá)這一價值達(dá)30億美元的人類基因組計劃。億美元的人類基因組計劃。目標(biāo)目標(biāo)：用用15年時間測出年時間測出24條染色體條染色體DNA的全部核苷酸序列，擬闡明人類遺傳的

28、全部核苷酸序列，擬闡明人類遺傳信息的組成及約信息的組成及約3到到5萬個基因的結(jié)構(gòu)和定位。萬個基因的結(jié)構(gòu)和定位。人 能 長 生 不 老 嗎？內(nèi)容及意義內(nèi)容及意義：在人類基因組計劃中，還包括對五種生物基因組的研究：在人類基因組計劃中，還包括對五種生物基因組的研究：大腸桿菌大腸桿菌、酵母酵母、線蟲線蟲、果蠅果蠅和和小鼠小鼠，稱之為人類的五種，稱之為人類的五種“模式生物模式生物”。 HGP的目的是的目的是解碼生命解碼生命、了解生命的起源、了解生命體生長發(fā)育的規(guī)律、認(rèn)、了解生命的起源、了解生命體生長發(fā)育的規(guī)律、認(rèn)識種屬之間和個體之間存在差異的起因、認(rèn)識疾病產(chǎn)生的機制以及識種屬之間和個體之間存在差異的起因、認(rèn)識疾病產(chǎn)生的機制以及長壽長壽與與衰衰老老等生命現(xiàn)象、為疾病的診治提供科學(xué)依據(jù)。等生命現(xiàn)象、為疾病的診治提供科學(xué)依據(jù)。 2.6.3 PCR 技技 術(shù)術(shù)美國科學(xué)家美國科學(xué)家PE（Perk