1、實(shí)驗(yàn)一 毒物損害的形態(tài)表現(xiàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 通過本實(shí)驗(yàn)，掌握毒物的形態(tài)損害作用；2. 學(xué)會毒物形態(tài)損害的表現(xiàn)及如何記錄相關(guān)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。二、實(shí)驗(yàn)原理有關(guān)重金屬銅、鋅、鉻、鎘對魚類的急性毒性研究國內(nèi)已有許多報(bào)道，魚類早期發(fā)育是整個生活史中對各種污染物最為敏感的階段， 用以作為急性毒性試驗(yàn)具有快速、敏感、經(jīng)濟(jì)有效等特點(diǎn)，是生物測試保護(hù)天然水體的重要方法。 鯽魚是我國重要的經(jīng)濟(jì)魚類, 其分布面廣而數(shù)量大, 個體生長快, 性成熟時間短, 繁殖季節(jié)長, 在人工控制飼養(yǎng)條件下可常年繁殖, 選擇鯽魚進(jìn)行重金屬離子毒性實(shí)驗(yàn), 具有一定代表性。本實(shí)驗(yàn)以鯽魚為研究對象，向其生長環(huán)境中加入重金屬硫酸銅，觀察其形態(tài)損傷，

2、希望在形態(tài)方面，有利于水體污染的觀察。三、實(shí)驗(yàn)試劑、儀器及動物1. 實(shí)驗(yàn)動物鯽魚幼魚, 購自魚市場。 實(shí)驗(yàn)魚在水族箱中馴養(yǎng)7 d 以上， 暫養(yǎng)期間活動正常， 無病， 死亡率低于5%； 實(shí)驗(yàn)前1 d 停止投餌， 選擇身體健康，反應(yīng)靈敏，大小基本一致的幼魚隨機(jī)分組。2. 實(shí)驗(yàn)試劑CuSO4, 先配制成質(zhì)量濃度為3000 mg/ L 的母液, 再根據(jù)需要稀釋成各質(zhì)量濃度。3. 實(shí)驗(yàn)儀器聚乙烯塑料水族箱，小型魚類充氧機(jī)。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1. 實(shí)驗(yàn)動物的馴養(yǎng)實(shí)驗(yàn)魚在水族箱中馴養(yǎng)7 d 以上， 暫養(yǎng)期間活動正常， 無病， 死亡率低于5%； 實(shí)驗(yàn)前1 d 停止投餌。2. 實(shí)驗(yàn)動物的分組采用隨機(jī)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分組

3、，將21只鯽魚隨機(jī)分成7組，其中一組為空白對照組，另外六組為實(shí)驗(yàn)組。3. 實(shí)驗(yàn)動物的染毒采用靜水法生物測試，實(shí)驗(yàn)期間不更換實(shí)驗(yàn)液， 全天充氣。為防止餌料影響， 實(shí)驗(yàn)期間不喂食。 為確定質(zhì)量濃度的大致范圍, 先作預(yù)實(shí)驗(yàn), 估計(jì)CuSO4的7個質(zhì)量濃度值, 在每一個質(zhì)量濃度的水族箱內(nèi)放入3 尾鯽魚, 分別觀察24 h、48h、96h, 找出各金屬的100% 致死質(zhì)量濃度和最大耐受質(zhì)量濃度。 再根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)6個質(zhì)量濃度組及1個對照組, 每一質(zhì)量濃度放魚5尾, 在曝露的過程中觀察它們的形態(tài)損傷。五、中毒癥狀觀察染毒后認(rèn)真觀察中毒發(fā)生、發(fā)展過程，中毒特點(diǎn)和毒作用靶器官，記錄各組幼魚24、48、96

4、h 的形態(tài)損傷。中毒癥狀的觀察現(xiàn)象填入附錄中的表格中。六、注意事項(xiàng)1. 防止操作者中毒。2. 剩余受試化學(xué)物應(yīng)在教師指導(dǎo)下銷毀實(shí)驗(yàn)一 附錄：預(yù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上所有的圖表自己手寫）CuSO4濃度（mg/L）24 h形態(tài)損傷48 h形態(tài)損傷96 h形態(tài)損傷游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)6.3是（0）是（1）是（1）14.4是（0）是（1）是（1）23.4是（1）是（1）是（2）32.4是（1）是（1）是（2）43.2是（2）是（2）是（3）54.0是（2）是（3）是（3）0（對照

5、）無（0）無（0）無（0）正式實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：CuSO4濃度（mg/L）24 h形態(tài)損傷48 h形態(tài)損傷96 h形態(tài)損傷游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)濃度1濃度2濃度3濃度4濃度5濃度60（對照）經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)可得，重金屬銅對鯽魚的形態(tài)損傷表現(xiàn)為：實(shí)驗(yàn)二 毒物的急性毒性試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握急性毒性試驗(yàn)的基本步驟及如何設(shè)計(jì)染毒的劑量與分組；2. 掌握LD50的測定方法及計(jì)算方法。二、實(shí)驗(yàn)原理急性毒性是機(jī)體一次接觸或24h內(nèi)多次接觸大劑量外源化學(xué)物后所引起的快速劇烈的中毒效應(yīng)。硫酸銅是常見的

6、一種化學(xué)毒物，魚類早期發(fā)育是整個生活史中對各種污染物最為敏感的階段，用以作為急性毒性試驗(yàn)具有快速、敏感、經(jīng)濟(jì)有效等特點(diǎn)，是生物測試保護(hù)天然水體的重要方法。本實(shí)驗(yàn)以鯽魚為研究對象，向其生長環(huán)境中加入重金屬硫酸銅，觀察硫酸銅急性毒性反應(yīng)的特征。三、實(shí)驗(yàn)試劑、儀器及動物1. 實(shí)驗(yàn)試劑硫酸銅，先配制成質(zhì)量濃度為3 000 mg/ L 的母液, 再根據(jù)需要稀釋成各質(zhì)量濃度。2. 實(shí)驗(yàn)儀器聚乙烯塑料水族箱，小型魚類充氧機(jī)。3. 實(shí)驗(yàn)動物鯽魚幼魚, 購自魚市場。 四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟1. 實(shí)驗(yàn)動物馴養(yǎng)及分組實(shí)驗(yàn)動物馴養(yǎng)及分組見實(shí)驗(yàn)一。2. 預(yù)試驗(yàn)采用靜水法生物測試，實(shí)驗(yàn)期間不更換實(shí)驗(yàn)液， 全天充氣。為防止餌料

7、影響， 實(shí)驗(yàn)期間不喂食， 估計(jì)硫酸銅的7個質(zhì)量濃度值，求出受試化學(xué)物的大致致死范圍（0-100%）。3. 正式試驗(yàn)根據(jù)預(yù)備實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)6個質(zhì)量濃度組及一個對照組, 每一質(zhì)量濃度放魚5尾, 在曝露的過程中觀察它們死亡效應(yīng)。中毒后, 多次刺激無反應(yīng)判斷為死亡個體, 從水中隨時撈出。 五、LD50的計(jì)算記錄各組幼魚24、48、96 h 死亡數(shù), 計(jì)算死亡率, 畫出硫酸銅濃度與死亡率的曲線. 找出各重金屬的半數(shù)致死質(zhì)量濃度( LD50)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)填寫在附錄中的表格中。六、注意事項(xiàng)1. 不要一味將注意力集中在高劑量組的動物，因?yàn)檫@些動物往往死亡很快，反而不容易觀察到中毒的發(fā)展過程。2.觀察記錄應(yīng)盡量完整、

8、具體。實(shí)驗(yàn)二 附錄：CuSO4濃度（mg/L）24 h死亡率48 h死亡率96 h死亡率死亡個數(shù)死亡率死亡個數(shù)死亡率死亡個數(shù)死亡率濃度1濃度2 濃度3濃度4濃度5濃度6對照實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：依據(jù)上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分別畫出染毒24h、48h、72h及96h后的劑量-反應(yīng)曲線，得染毒24h、48h、72h及96h后的LD50，各曲線如下所示：（ 此區(qū)域畫曲線）由上述曲線可得，染毒24h、48h及96h后的LD50分別為：實(shí)驗(yàn)三 毒物的安全濃度實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握安全濃度的概念；2. 掌握安全濃度測定的基本步驟及計(jì)算方法。二、實(shí)驗(yàn)原理安全質(zhì)量濃度即為某一毒物對動物體不造成損傷的質(zhì)量濃度范圍，通常由LC50

9、×0.1計(jì)算出。硫酸銅是常見的一種化學(xué)毒物，魚類早期發(fā)育是整個生活史中對各種污染物最為敏感的階段，用以作為急性毒性試驗(yàn)具有快速、敏感、經(jīng)濟(jì)有效等特點(diǎn)，是生物測試保護(hù)天然水體的重要方法。本實(shí)驗(yàn)以鯽魚為研究對象，向其生長環(huán)境中加入重金屬硫酸銅，計(jì)算硫酸銅對鯽魚的安全質(zhì)量濃度。三、實(shí)驗(yàn)動物、試劑及儀器1. 實(shí)驗(yàn)動物鯽魚幼魚, 購自魚市場。 實(shí)驗(yàn)魚在水族箱中馴養(yǎng)7 d 以上， 暫養(yǎng)期間活動正常， 無病， 死亡率低于5%； 實(shí)驗(yàn)前1 d 停止投餌， 選擇身體健康，反應(yīng)靈敏，大小基本一致的幼魚隨機(jī)分組。2. 實(shí)驗(yàn)試劑CuSO4,先配制成質(zhì)量濃度為3000 mg/ L 的母液, 再根據(jù)需要稀釋成各

10、質(zhì)量濃度。3. 實(shí)驗(yàn)儀器聚乙烯塑料水族箱、小型魚類充氧機(jī)。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 實(shí)驗(yàn)動物馴養(yǎng)及分組實(shí)驗(yàn)動物馴養(yǎng)及分組見實(shí)驗(yàn)一。2. 染毒步驟與方法采用靜水法生物測試，實(shí)驗(yàn)期間不更換實(shí)驗(yàn)液， 全天充氣。為防止餌料影響， 實(shí)驗(yàn)期間不喂食。 為確定質(zhì)量濃度的大致范圍, 先作預(yù)備實(shí)驗(yàn), 估計(jì)CuSO4的7個質(zhì)量濃度值, 在每一個質(zhì)量濃度的水族箱內(nèi)放入3 尾鯽魚, 分別觀察24 h、48h、96h，找出各金屬的100% 致死質(zhì)量濃度和最大耐受質(zhì)量濃度。 再根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)6個質(zhì)量濃度組及一個對照組, 每一質(zhì)量濃度放魚5尾, 在曝露的過程中觀察它們的行為、中毒癥狀、死亡等效應(yīng)。中毒后， 多次刺激無反應(yīng)判斷為死亡個體, 從水中隨時撈出。 五、安全質(zhì)量濃度的計(jì)算記錄各組幼魚24、48、96 h 死亡數(shù), 計(jì)算死亡率, 畫圖 求出各重金屬的半數(shù)致死質(zhì)量濃度( LC50) ，由公式LC50 ×0.1計(jì)算出