1、二、實(shí)驗(yàn)原理果蠅（ Drosophila melanogaster）是生物學(xué)研究中一種重要的模式生物。約在1909年，摩爾根就開始用果蠅作為材料進(jìn)行遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)，解決了一系列重大的遺傳學(xué)問(wèn)題。 果蠅作為遺傳材料具有很多突出的優(yōu)點(diǎn)：染色體數(shù)目少，2n8；具有許多可遺傳的突變性狀；世代周期短，在25C 下約910天就完成一個(gè)世代；個(gè)體小，易于飼養(yǎng)，費(fèi)用低廉；繁殖能力強(qiáng)，一次雜交可產(chǎn)生大量后代供統(tǒng)計(jì)分析。果蠅的生活史 果蠅為昆蟲綱雙翅目昆蟲，生活史經(jīng)過(guò)：卵幼蟲蛹成蟲，是完全變態(tài)的昆蟲。Drosophila life cycleAdult成蟲FertilizationEmbryo1 dayFirstin

2、star larva1 day1 daySecondinstar larvaThirdinstar larva21/2 - 3 daysPupa31/2 - 41/2 daysin pupal stage蛹Egg卵三齡幼蟲一齡幼蟲二齡幼蟲果蠅的生活周期和溫度的關(guān)系 培養(yǎng)溫度 10 15 20 25 卵幼蟲 8天 5天 幼蟲成蟲 57天 18天 6.3天 3.4天 15天 78天 2025C是果蠅的最適生長(zhǎng)溫度，生活周期為10天。果蠅的培養(yǎng)基 果蠅的食物主要是酵母，凡是能使酵母發(fā)酵的基質(zhì)都能作為培養(yǎng)基，最常用、效果最好的是玉米粉培養(yǎng)基。三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 果蠅生活史觀察卵 成熟的雌蠅交尾后（23d

3、）將卵產(chǎn)在培養(yǎng)基的表層。用解剖針的針尖在果蠅培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)沿著培養(yǎng)基表面挑取一點(diǎn)培養(yǎng)基將其置于載玻片上，然后滴上1滴清水，用解剖針將培養(yǎng)基展開后放在顯微鏡低倍鏡下仔細(xì)進(jìn)行觀察。果蠅的卵為橢圓形，長(zhǎng)約0.5mm，腹面稍扁平，前端伸出的觸絲可使卵附著在培養(yǎng)基表層而不陷入深層。幼蟲 果蠅的受精卵經(jīng)過(guò)一天的發(fā)育即可孵化為幼蟲。幼蟲在培養(yǎng)基內(nèi)及瓶壁上都有，培養(yǎng)基內(nèi)的幼蟲一般要小一些。這是因?yàn)楣壍挠紫x從一齡幼蟲開始經(jīng)兩次蛻皮，形成二齡和三齡幼蟲，隨著發(fā)育而不斷長(zhǎng)大，三齡幼蟲往往爬到瓶壁上來(lái)化蛹，其長(zhǎng)度可達(dá)45mm。幼蟲一端稍尖為頭部，黑點(diǎn)處為口器。幼蟲在培養(yǎng)基內(nèi)和瓶壁上蠕動(dòng)爬行。蛹 幼蟲經(jīng)過(guò)45d的發(fā)育開始化

4、蛹。一般附著在瓶壁上，顏色淡黃。隨著發(fā)育的繼續(xù)，蛹的顏色逐漸加深，最后為深褐色。在瓶壁上看到的幾乎透明的蛹是已經(jīng)羽化完而遺留的蛹的空殼。成蟲 剛羽化出的果蠅蟲體較長(zhǎng)，翅膀也沒(méi)有完全展開，體表未完全幾丁質(zhì)化所以成半透明透乳白色。隨著發(fā)育，身體顏色加深，體表完全幾丁質(zhì)化。羽化出的果蠅在812h后開始交配，成體果蠅在25條件下的壽命為37d。2. 果蠅的麻醉 將麻醉瓶的小口拔去橡皮塞。滴入數(shù)滴乙醚（注意不能太多，以使乙醚流入瓶?jī)?nèi)）再塞上橡皮塞。將要麻醉的果蠅試管在海綿板上敲擊幾下，使其都集中在底部。然后迅速拔去棉塞，插入麻醉瓶大口，拍打試管，使果蠅全都倒入麻醉瓶。然后迅速蓋上麻醉瓶口蓋子。麻醉到一定

5、程度把果蠅倒在白磁板上。當(dāng)果蠅翅膀上翹45時(shí)，表示已經(jīng)死亡。3. 雌雄果蠅的鑒別體型腹部末端背部條紋性梳 大無(wú)色、端尖7條（可看見(jiàn)5條）無(wú)小黑色、鈍圓5條（可看見(jiàn)3條）有性梳：雄蠅前肢第5節(jié)附節(jié)上有10根象梳子的棕毛雌果蠅體型大于雄果蠅雌果蠅有6節(jié)體節(jié)，腹部底部為產(chǎn)卵管，呈現(xiàn)圓錐狀凸出。雄果蠅有4節(jié)體節(jié)，腹部底部為交尾器，呈現(xiàn)黑色圓形外觀。前肢先端第二節(jié)具有性梳。 4.突變性狀的觀察眼色：紅眼與白眼紅眼與白眼是一對(duì)相對(duì)性狀，分別由X染色體上的基因+與w（或X+ 和Xw）決定其它眼睛突變 Cinnabar：朱色Sepia: 棕褐色殘翅（Vestigial wing, vgvg)長(zhǎng)翅和殘翅是一對(duì)相

6、對(duì)性狀，由位于第二染色體上的基因+/vg決定 小翅 （miniature wing，mm）， 由位于X染色體上的隱性基因m決定。翅膀比野生型短些，僅長(zhǎng)至腹端。Apterous:無(wú)翅翅膀的其它突變Dumpy：粗短；scalloped：圓齒狀體色突變黑檀體 （ebony body, ee) 由位于第3染色體上的隱性基因決定。 Sable（黒貂色，tan （棕褐色） 剛毛野生型果蠅頭胸部以及復(fù)眼的周圍具有平直，先端略彎的長(zhǎng)型粗黑硬毛。焦剛毛（singed bristle，sn3sn3），剛毛卷曲，由位于X染色體上隱性基因決定。 。 剛毛的其它突變類型Forked：開叉；spineless無(wú)骨；stu

7、bble：茬狀實(shí)驗(yàn)記錄管號(hào)眼色翅型體色剛毛雌雄個(gè)數(shù)5個(gè)品系果蠅性狀的觀察品系眼色翅膀剛毛體色1紅長(zhǎng)翅直灰2紅殘翅直灰3白小翅焦剛毛灰4紅長(zhǎng)翅直黑檀體5白長(zhǎng)翅直灰5.果蠅培養(yǎng)基的配制玉米培養(yǎng)基80ml水2g瓊脂13g蔗糖放在大燒杯中煮沸。80ml水17g玉米粉1.4g酵母粉，裝在小燒杯中調(diào)勻。待大燒杯中瓊脂融化后，將小燒杯中調(diào)勻的混和液倒入，燒開。每一試管分裝1.52cm高度（510ml）的培養(yǎng)基，注意請(qǐng)勿將培養(yǎng)基碰到管壁。高壓滅菌。果蠅雜交實(shí)驗(yàn)的基本步驟選處女蠅 將雌雄果蠅放在一起培養(yǎng)，雌蠅的生殖器中有貯精囊，可保留交配所得的大量精子，雌蠅一次交配所得的精子，足夠它多次排出的卵受精，因此在做雜交試驗(yàn)時(shí)，雌蠅必須選用處女蠅（沒(méi)有交配過(guò)的雌蠅）。雌蠅孵出后12小時(shí)內(nèi)不會(huì)交配，這個(gè)時(shí)間內(nèi)把果蠅全部倒出，分出雌雄蠅，單獨(dú)飼養(yǎng)，這時(shí)收集的雌蠅是處女蠅。配制雜交組合把所需品系的雄蠅直接放到處女蠅培養(yǎng)瓶中，標(biāo)注親本的基因型及交配日期；（7天）78天后，倒掉親本（以免親代和子代混淆）；再過(guò)4 5天后，F(xiàn)1成蠅性狀的觀