1、XXX有限公司文件編號XXXPage 1 of 7工作指引名稱:生物負載檢測方法的確認1適用范圍適用于運用重復(fù)性回收的方法對生物負載檢測方法進行確認.2參考文件ISO11737-1 Sterilization of medical devices -Microbiological methods-Part 1: Determination of a population of microorganisms on productsWI.XXX產(chǎn)品生物負載檢測操作指引3定義生物負載：產(chǎn)品或無菌阻隔系統(tǒng)上的存活微生物的總數(shù).CF修正系數(shù)Correction Factor(CF):用于補償無法從產(chǎn)品或

2、培養(yǎng)基中完全除去微生 物的數(shù)值;樣品份額Sample item portion(SIP):從產(chǎn)品上取的用于測試的規(guī)定部分.4職責(zé)實驗員:具備微生物方面知識，熟悉測試操作，負責(zé)產(chǎn)品的測試及報告.實驗工程師：熟悉測試，指導(dǎo)實驗員測試，檢查測試報告.質(zhì)量主管/經(jīng)理:負責(zé)審批測試報告.5確認程序本方法的基礎(chǔ)原理是生物負載測定方法應(yīng)重復(fù)進行，直到回收的微生物累計數(shù)量沒 有明顯增加.每重復(fù)一次，都將洗脫液從產(chǎn)品或產(chǎn)品部份上完全回收并計數(shù)，比較連 續(xù)回收得到的累計結(jié)果.測定產(chǎn)品生物負載后，應(yīng)將該技術(shù)再次應(yīng)用于同一產(chǎn)品份額上研究微生物是否進一 步移除，應(yīng)用于同一產(chǎn)品份額的該過程可在規(guī)定次數(shù)的場合下重復(fù)進行；樣

3、品的選擇，被測試樣品必須具有代表性，可以體現(xiàn)產(chǎn)品的真實生物負載的情況；測試樣品份額(SIP)的選擇，若驗證生物負載在產(chǎn)品上是均勻分布的,SIP可以是該產(chǎn) 品的任何部份，否則樣品應(yīng)包含能代表所制產(chǎn)品的每種相應(yīng)材質(zhì)而隨機選取的產(chǎn)品 部位.若已知生物負載分布，可以從認為對滅菌工藝最有挑戰(zhàn)性的產(chǎn)品部份選取SIP.可在長度，質(zhì)量，體積或表面積基礎(chǔ)上計算SIP:制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件編號XXXPage 2 of 7工作指引名稱:生物負載檢測方法的確認SIP的類型產(chǎn)品類型表面積植入類（無滲透吸收型）質(zhì)量粉塵類衣服類植入類（可滲透吸收型）長度管道類（管徑T）體積

4、液體奧5.5生物負載測定方法的選擇，可參考以下圖表Use vortex mixing or shaking followed by flltration/platlngIf none of the above is possibleSwbblng/contad pladng制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件編號XXXPage 3 of 7工作指引名稱:生物負載檢測方法的確認5.6測試準(zhǔn)備檢測設(shè)備A.潔凈工作臺B.細菌過濾器C.超聲清洗機D.恒溫培養(yǎng)箱E.高壓蒸汽滅菌鍋檢測用品A.洗脫液，稀釋液:0.02%吐溫80,0.9%NaCl,PH7.0氯化鈉-蛋白凍緩

5、沖液；B.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或胰蛋白陳大豆瓊脂培養(yǎng)基；C.剪刀銀子，微孔濾膜（0.45叩）；D.酒精燈,75%酒精，培養(yǎng)皿；根據(jù)檢測需要，按規(guī)定要求配制好培養(yǎng)基和洗脫液，稀釋液；將配制好的培養(yǎng)基和洗脫液，稀釋液分裝到三角瓶中密封并用白紙包住封口，微孔濾膜用水潤濕放入培養(yǎng)皿中，剪刀，銀子，培養(yǎng)皿，細菌過濾器不銹鋼杯用白 紙包好，所有物品經(jīng)121c高壓蒸氣滅菌30min；超聲清洗機和細菌過濾器用75%酒精擦洗干凈；實驗前兩小時打開潔凈工作臺，微生物限度室，更衣室的紫外燈進行環(huán)境消毒 30min,在開啟紫外燈時人員必須遠離，以免灼傷眼睛和皮膚造成人身傷害；所有檢測用品，樣品由傳遞窗遞入微生物限度室.5.

6、7操作步驟將樣品包裝去除，用滅菌銀子將樣品放入超聲清洗機中，如樣品過大而無法放 入可將樣品進行適當(dāng)拆分；將樣品浸入含有適量洗脫液的超聲清洗機中，加入適量的稀釋液，以洗脫液浸 滿樣品表面為準(zhǔn)；打開超聲清洗機，清洗5min,超聲清洗頻率不應(yīng)過高，以免造成微生物死亡；清洗結(jié)束后將樣品取出，洗脫液在細菌過濾器上進行過濾，應(yīng)注意濾膜在使用 前后的完整性；洗脫液經(jīng)薄膜過濾后，可用PH7.0氣化鈉-蛋白凍緩沖液沖洗濾膜，每張濾膜每 次沖洗量為100ml；制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件編號XXXPage 4 of 7工作指引名稱:生物負載檢測方法的確認過濾完成取出濾膜，

7、菌面朝上貼于培養(yǎng)基表面上培養(yǎng)，計數(shù)，作為第一次移除的 菌落數(shù)，表示為在菌落全部計數(shù)量中的百分率；將每個樣品按照以上方法進行移除清洗5次,分別培養(yǎng)計數(shù)，每次移除的菌落數(shù)作為計算CF的證據(jù)；修正系數(shù)CF的計算舉例如下：Table C.1 Colony counts determined from repetitive treatment fot replicale of a medical dtviceTreatment12Product item3461605 口705545210125233102004D1001Agar overlay212101 出 al cd any count73647

8、A5849CNN f-rom the daq in Table C.l .ttie proponions remoweti can be calculaled ms follows.Numbfir removed by first Treatment6050705545Tolaf number recouefed7364795849Removal by firsl treatment82%78 %09%55%92%Average Recovery by first treatmerit -87,2%Range -：78 % to 95 %Colony countE derivec from 合

9、四overlay have been included m he calculations The nalure of certain medical devices may preclude ihe usd of 的ar overlay.C23 Using average recovery Dy furst treatmerH, the correction factor for recovery efficiency would bt;(C.1)出5587.2in some applications: it may be decided to use the lowest value of

10、 ttie range af percentage removals in orOer to reflect the worst case. This decision will be influenced by the use I。be made ofthE data制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件編號XXXPage 5 of 7工作指引名稱:生物負載檢測方法的確認計算得到的CF值即為該樣品的修正系數(shù)值,在日后該樣品的生物負載檢測中可用第一次移除菌落數(shù)X該修正系數(shù)作為該產(chǎn)品的生物負載結(jié)果.檢測報告編號規(guī)則：CF-YY-XXXYY:測試年份XXX:產(chǎn)品項目

11、號6文件保存期限：相關(guān)檢測報告保存10年.7附錄7.1 Repetitive Recovery Testing Report制定:XXX :日期：2-Mar-19修言了版次：2XXX有限公司文件編號XXXPage 6 of 7工作指引名稱:生物負載檢測方法的確認附錄 7.1 Repetitive Recovery Testing ReportRepetitive Recovery Testing Report(RGf: ISO 11737-1)Report No:SaTple Infctmatioin.Pruducton Lot NdSample Qty.:SIP：Samplirg Date:

12、Testing Environ Tent (PR.1MediarJedia Lot No.：Incubator Temperature ;Incubation PericxJ :okal Aetbic Count(We(:overed CFWDevi回Mo1st1旭atm白nt2ndf neatrrert3rd1伯電m4;h1 ralrTi/t5ih1 咕三 tiYCntTotal co Io)/ cuntRenxval l1st什自3164M123A5Avenge Remoai by * si treatmentCorrective Factor (CF)NOTE： Removal bv 1 引 treatment = 1 st ireaitme ntTata I colony oountCF = 1 - Average Removal b/ trsatmeni1 e&ted:Checked：Approved ：Date:Date:Date:制定:XXX :日