1、美國(guó)藥典溶出度4法聯(lián)合高效液相色譜分析低釋放眼用植入制劑David C. Browne and Shawn Kieselmann*Intertek, 291路東22號(hào)，塞勒姆工業(yè)園，白宮，美國(guó)新澤西州08888目的建立美國(guó)藥典溶出度4法聯(lián)合高效液相色譜分析低劑量緩釋眼用植入制劑的方法背景眼部植入制劑是一種體積小，以聚合物為基底的圓盤(pán)或者圓柱形的藥用制劑，可改善藥 物進(jìn)入眼睛后的治療釋放（1）。植入劑一些常見(jiàn)的類(lèi)型包括鞏膜外層植入劑，放置在眼睛 的中緯線上；和玻璃體內(nèi)植入劑，經(jīng)外科手術(shù)放置在眼睛（2）玻璃體內(nèi)。圖1展示了眼睛 的解剖圖和各種植入劑的放置位置。眼植入物用于治療各種疾病，如糖尿病視網(wǎng)

2、膜病變和黃 斑變性（1）。選擇USP4法來(lái)測(cè)試該類(lèi)產(chǎn)品的溶出度是由于該法采用層流的方式與體內(nèi)條 件具有良好的相關(guān)性，并且開(kāi)環(huán)的配置方式提供的漏槽條件有利于難溶藥物的溶出。實(shí)現(xiàn)目標(biāo)該方法的建立主要有三個(gè)目標(biāo)。第一，由于眼部植入制劑藥物釋放濃度低，需要優(yōu)化色 譜條件以獲得定量限1ng/ml。其次，確定美國(guó)藥典溶出度4法在測(cè)試過(guò)程中產(chǎn)生的干擾或 吸附。最后，用美國(guó)藥典溶出度4法聯(lián)合高效液相色譜法獲取溶出曲線。方法學(xué)實(shí)驗(yàn)初期，選取Sotax CE 7 smart溶出儀（開(kāi)環(huán)），pH 7.4的磷酸鹽緩沖液作為溶出介 質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。泵流速設(shè)置為最低流速（1.5ml/min），用以模擬體內(nèi)條件，因?yàn)槿梭w眼部玻

3、 璃體的流速大約為2pl/min（3）。一個(gè)劑量單位的藥物置于鋪有玻璃珠的22.6mm的流通池 內(nèi)。溶出液直接在線注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，幾天內(nèi)每小時(shí)采樣一次。不推薦使用收 集器和自動(dòng)進(jìn)樣器，因?yàn)榇治鑫锱c一些塑料會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。圖1眼部解剖圖和局部給藥的主要方法為使溶出液直接注入高效液相色譜儀，溶出儀出口管路經(jīng)縮小接頭與一PEEK管相連， 然后進(jìn)入進(jìn)樣閥。在進(jìn)樣位置，溶出液流經(jīng)閥門(mén)，進(jìn)入廢液接口。在載樣位置，溶出液充滿(mǎn) 進(jìn)樣環(huán)。閥開(kāi)關(guān)由電子控制。進(jìn)樣閥是連接到Perkin Elmer Series 200高效液相色譜系統(tǒng)（不 包括進(jìn)樣器）。由于采用的是低流速1.5ml/min，進(jìn)樣環(huán)的后

4、壓很小，不會(huì)對(duì)系統(tǒng)的配件和 連接部分造成損害。樣品分析使用直徑2.1mm的SB -苯基色譜柱，進(jìn)樣量500L以提高檢 測(cè)靈敏度。HPLC流速為0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。優(yōu)化的色譜條件可分析濃度低至 1ng/ml的樣品。實(shí)驗(yàn)初期評(píng)估結(jié)果顯示，待測(cè)物在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液中難溶，且產(chǎn)生降解。在 該溶液中添加0.1%的十二烷基硫酸鈉（SDS）顯著增加藥物的溶解度和穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)表明， 使用氯化鈉代替SDS也可增加藥物的溶解度和溶液穩(wěn)定性。最終，選取按英國(guó)藥典制備的 pH值7.4磷酸緩沖鹽生理鹽水作為藥物釋放介質(zhì)，既有生物意義，又有功效。在溶出條件下測(cè)試空白溶媒，10ng/ml的標(biāo)

5、準(zhǔn)溶液和定量限濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液1ng/ml，24h，用于觀測(cè)可能產(chǎn)生的干擾。圖2是上述3種溶液的疊加圖。圖2空白溶媒，最低定量限和10ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液HPLC疊加圖一旦儀器參數(shù)優(yōu)化完成，將單個(gè)樣品在溶出條件下測(cè)試14天。在第一個(gè)24小時(shí)內(nèi)，采 用自動(dòng)程序進(jìn)樣器連接到液相色譜進(jìn)樣閥，每隔1h采樣分析一次。從24到72小時(shí)，每?jī)?小時(shí)取樣一次。72h后，每4小時(shí)采樣一次。經(jīng)2周測(cè)試，獲取待分析物的溶出曲線。圖3 是14天內(nèi),以濃度ng/ml為單位的溶出率曲線圖；圖4顯示以質(zhì)量為單位的溶出率曲線圖。圖3待測(cè)物的洗脫速率圖4待測(cè)成分的溶出曲線結(jié)果優(yōu)化的條件下確保待測(cè)物具有足夠的檢測(cè)靈敏度，保留時(shí)間只需

6、約4.3min。溶出無(wú)干擾。 由于進(jìn)樣重復(fù)性較差，導(dǎo)致1ng/ml時(shí)回收率較高。這主要是自動(dòng)進(jìn)樣器清洗和填充樣品環(huán) 時(shí)間不足所致。這導(dǎo)致響應(yīng)值低而含量測(cè)定值偏高。然而，該數(shù)據(jù)表明在溶出試驗(yàn)過(guò)程沒(méi)有 發(fā)生吸附。隨后的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)設(shè)定進(jìn)樣器清洗程序，增加進(jìn)樣量至500gL，進(jìn)樣重復(fù)性得以 提高，。14天的溶出曲線中，藥物溶出率最初為17ng/min，在48h逐步下降到6ng/min。 14天的實(shí)驗(yàn)，溶出率穩(wěn)定在3ng/min。溶出趨勢(shì)呈規(guī)律性變化，由于植入劑的特殊設(shè)計(jì)，藥 物溶出度釋放緩慢。結(jié)論研究開(kāi)發(fā)了一種ng/ml水平眼部植入制劑溶出度測(cè)定方法。使用窄口徑HPLC柱，進(jìn)樣 量500gL。檢測(cè)限小

7、于1ng/m 1，適于分析低濃度釋放的眼部植入劑。Sotax CE 7 smart溶出 度4法測(cè)定儀實(shí)現(xiàn)與HPLC的在線分析。在溶出度測(cè)試條件下，溶媒無(wú)干擾，1ng/ml水平 無(wú)吸收。生成為期兩周的單一眼植入制劑的溶出度曲線。因該方法與體內(nèi)溶出相關(guān)，具有潛 在的廣闊的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)Lee, S. S.; Yuan, P.; Robinson, M. R. Ocular Implants for Drug Delivery. In Encyclopedia of Biomaterials and Biomedical Engineering; Bowlin, G. L., Wnek, G.,

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