1、血清中堿性磷酸酶活力的測(cè)定組員：李敏 吳海霞 魏夢(mèng)蝶1問題酶活力的測(cè)定就是測(cè)定酶促反應(yīng)的速度。本實(shí)驗(yàn)的酶促反應(yīng)速度是如何測(cè)定的？影響酶促反應(yīng)速度的因素很多。本實(shí)驗(yàn)是如何控制各種因素對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響的？對(duì)于無可見光吸收的被測(cè)物，如何使用可見光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定？實(shí)驗(yàn)中又是如何消除各種新增加因素的影響的？2實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握酶活性測(cè)定的一般方法 熟悉血清堿性磷酸酶活性的測(cè)定方法 掌握血清堿性磷酸酶測(cè)定的臨床意義3如何測(cè)定酶活性的大小? 酶促反應(yīng)速度: 常用單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來表示。 酶活性： 酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力，其衡量的標(biāo)準(zhǔn)是酶促反應(yīng)速度的大小。4酶活性的測(cè)定方法固定時(shí)間法（或

2、定時(shí)法）：通常是酶作用一段時(shí)間后，加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等終止酶促反應(yīng)，測(cè)定這段時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量，計(jì)算酶促反應(yīng)的平均速度。 連續(xù)監(jiān)測(cè)法：連續(xù)監(jiān)測(cè)法是指每隔一定時(shí)間（260s），連續(xù)多次測(cè)定酶反應(yīng)過程中某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物量隨時(shí)間變化的數(shù)據(jù)，求出酶反應(yīng)初速度，間接計(jì)算酶活性濃度的方法。 適用于自動(dòng)生化分析儀 目前已取代固定時(shí)間法而成為臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定酶活性濃度最常用的方法5實(shí)驗(yàn)原理二是測(cè)定底物解離磷酸根后的羥基化合物，這種方法又可分為： 酚化合物在顯色劑的作用下顯色比色測(cè)定。 生成的酚化合物本身在一定的條件下就可顯色，如對(duì)硝基苯磷酸二鈉（PNPP）法。測(cè)定ALP的方法主要分為兩種

3、一是測(cè)定底物解離下的磷酸根來計(jì)算酶活力，如-甘油磷酸鈉法，但存在血清本身有磷酸根的缺點(diǎn)；ALP ( alkaline phosphatase )6紅色醌類衍生物實(shí)驗(yàn)原理7測(cè)定酶活性時(shí)的注意事項(xiàng):控制反應(yīng)條件: 底物，溫度，pH，激活或抑制劑控制反應(yīng)時(shí)間： 起始，終止測(cè)定產(chǎn)物的生成量： 光度法，顯色反應(yīng)891）生理性增加： 見于生長中的兒童及妊娠中晚期婦女。 2）病理性增加：主要見于（1）肝膽疾病。阻塞性黃疸，急、慢性黃疸性肝炎，肝癌等均可引起血清ALP活力不同程度的升高，其中以癌性梗阻最明顯。 （2）各種骨骼疾病如佝僂病、纖維性骨病、成骨不全癥、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期等，由于骨損傷或病變使骨細(xì)胞內(nèi)高濃度的ALP釋放