1、關于紫外可見光譜和熒光光譜第一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.1 紫外-可見光譜的基本原理13.6nm200nm380nm780nm 遠紫外區(qū)（真空紫外區(qū)）近紫外區(qū)可見光區(qū)2.1.1 紫外-可見（UV-Vis）光譜 紫外光譜(Ultraviolet spectroscopy, UV)是吸收光譜. 通常說的紫外光譜的波長范圍是200-380 nm, 常用的紫外光譜儀的測試范圍可擴展到可見光區(qū)域, 包括400-780 nm的波長區(qū)域. 低于200 nm的吸收光譜屬真空紫外光譜, 要用專門的真空紫外光譜儀測試.第二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 當紫外光照射分子時，分子吸收

2、光子能量后受激發(fā)而從一個能級躍遷到另一個能級，由于分子的能量是量子化的，所以只能吸收等于分子內兩個能級差的光子。E= E2 -E1=h=hc/ （E2 , E1 -始態(tài)和終態(tài)的能量 h -普朗克常數(shù) -頻率 c -光速 -波長）紫外光的波長以300nm代入上式，求出紫外光的能量為： E =4（ev）分子的能量電子能量 1-20 ev分子振動能量 0.05-1 ev轉動能量 0.05-1 ev 形成較寬的譜帶第三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.1.2 紫外光譜圖的組成 橫坐標表示吸收光的波長,用nm 為單位。 縱坐標表示吸收光的吸收強度，可以用A(吸光度), T(透射比或透光率或透

3、過率),1-T(吸收率)、(吸收系數(shù))中的任何一個來表示。 紫外光譜圖是由橫坐標、縱坐標和吸收曲線組成的。第四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.1.3 電子躍遷 有機物在紫外和可見光區(qū)域內電子躍遷的方式一般有: *, n *, *, n* 飽和烴中的C-C鍵是鍵.產(chǎn)生*躍遷所需能量大, 吸收波長小于150 nm的光子, 即在真空紫外區(qū)有吸收.1) *第五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(2) n * 含 O, N, S 和鹵素等雜原子的飽和烴衍生物可發(fā)生此 類 躍 遷 , 所需能量也較大, 吸收波長為150-250 nm 的光子. C-OH 和 C-Cl 等基團的 吸收

4、在真空紫外區(qū)域內. C-Br, C-I 和 C-NH2等基團的吸收在紫外區(qū)域內，其吸收峰的吸收系數(shù)較低，一般300.第六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(3)* 不飽和烴, 共軛烯烴和芳香烴類可發(fā)生此類躍遷, 吸收波長大多在紫外區(qū)(其中孤立雙鍵的max小于200 nm), 吸收峰的吸收系數(shù)很高.(4) n* 在分子中含有孤對電子的原子和鍵同時存在時, 會發(fā)生n*躍遷, 所需能量小, 吸收波長200 nm, 但吸收系數(shù)很小，一般為10-100. 不同分子結構具有不同電子躍遷方式, 有的基團可有幾種躍遷方式。在紫外光譜中主要研究的躍遷是在紫外區(qū)域有吸收的*和n*兩種。第七張，PPT共六十

5、三頁，創(chuàng)作于2022年6月 除上述4種電子躍遷方式外，在紫外和可見光區(qū)還有兩種較持殊的躍遷方式，即眾d-d 躍遷和電荷轉移躍遷.(5) d-d 躍遷 在過渡金屬絡合物溶液中容易產(chǎn)生這種躍遷, 其吸收波長一般在可見光區(qū)域, 有機物和高分子的過渡金屬絡合物都會發(fā)生這種躍遷。(6) 電荷轉移躍遷 電荷轉移可以是離子間, 離子與分子間, 以及分子內的轉移, 條件是同時具備電子給體(donor)和電子受體(acceptor).電荷轉移吸收譜帶的強度大, 吸收系數(shù)一般大于10,000. 這種躍遷在聚合物的研究中相當重要。 第八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于202

6、2年6月2.1.4 吸收帶的分類：R吸收帶（n - *躍遷）由酮基、- NO2、- NO、 - N=N等發(fā)色基團引起。特點是波長較長，但吸收較弱。測定這種吸收帶時需要濃溶液。K吸收帶（ - *躍遷）由共軛烯烴和取代芳香化合物引起。特點是波長較短但吸收較強（ 10000）。 值較大的原因：1）電子躍遷后有較大的偶極矩變化； 2）電子在某個能級間躍遷幾率較大。第十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月B吸收帶（苯環(huán)振動加 - *躍遷）該吸收帶是芳環(huán)、芳雜環(huán)的特征譜帶，吸收強度中等（=1000）。特點是在230270nm，譜帶較寬且含多重峰或精細結構, 精細結構是由于振動次能級的影響，當使用極性

7、溶劑時，精細結構常常看不到，只能看到一寬峰。E吸收帶（ - *躍遷）與B吸收帶一樣，是芳香族的特征譜帶，吸收強度大（=200014000，吸收波長偏向紫外的低波長部分，有的在遠紫外區(qū)。如苯的E2 和E1分別在184nm （=47000）和204nm (=7000），苯上有助色團取代時， E2移向近紫外區(qū)。第十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.1.5 各類化合物的紫外吸收 飽和有機化合物的紫外吸收 只有部分飽和有機化合物（如C-Br、C-I、C-NH2）的n*躍遷有紫外吸收。(2) 不飽和脂肪族有機化合物的紫外吸收 只有具有-共軛和p-共軛的不飽和脂肪族有機化合物可以在近紫外區(qū)出現(xiàn)

8、吸收。吸收是由*躍遷和n*躍遷引起的。(3) 芳香族有機化合物的紫外吸收 芳香族有機化合物都具有環(huán)狀的共軛體系，一般來講，它們都有三個吸收帶。最重要的芳香化合物苯的吸收帶為： max= 184 nm ( = 47000), max= 204 nm (6900） max= 255 nm (230） 第十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.1.6 影響紫外光譜的因素(1) 紫外吸收曲線的形狀及影響因素 紫外吸收帶通常是寬帶。 影響吸收帶形狀的因素有：被測化合物的結構、測定的狀態(tài)、測定的溫度、溶劑的極性。(2) 吸收強度及影響因素 能差因素： 能差小，躍遷幾率大 空間位置因素:處在相同的

9、空間區(qū)域躍遷幾率大(3) 吸收位置及影響因素 幾個基本概念： 生色基：能在某一段光波內產(chǎn)生吸收的基團，稱為這一段波長的生色團或生色基。第十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月助色基： 當具有非鍵電子的原子或基團連在雙鍵或共軛 體系上時，會形成非鍵電子與電子的共軛 （p- 共軛），從而使電子的活動范圍增大，吸 收向長波方向位移，顏色加深，這種效應稱為 助色效應。能產(chǎn)生助色效應的原子或原子團稱 為助色基。紅移現(xiàn)象：由于取代基或溶劑的影響使最大吸收峰向長波 方向移動的現(xiàn)象稱為紅移現(xiàn)象。藍移現(xiàn)象：由于取代基或溶劑的影響使最大吸收峰向短波 方向移動的現(xiàn)象稱為藍移現(xiàn)象。增色效應：使值增加的效應稱為

10、增色效應。減色效應：使值減少的效應稱為減色效應。第十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月max與化學結構的關系該公式為： max= 母體二烯烴（或C=C-C=C）+ 環(huán)內雙烯 + 環(huán)外雙鍵 + 延伸雙鍵+ 共軛體系上取代烷基 + 共軛體系上取代的助色基. 實例一max= 217nm（母體二烯烴）+35nm（環(huán)外雙鍵） +30nm（延伸雙鍵）+5 5nm(共軛體系上取代烷基） = 287nm應用伍德沃德和費塞爾規(guī)則來估算化合物紫外吸收max的位置。第十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6

11、月2.1.7 定量分析朗伯-比爾定律是紫外光譜定量分析的基礎:A=logI0/I= lc （I0、 I 入射光和透射光強； -摩爾消光系數(shù)；l-試樣的光程長；c溶質濃度）參數(shù)max 和max 很重要：（1） max 表示吸收的最大波長，即最大的吸收峰位置。（2） max表示最大吸收的摩爾消光系數(shù)。因為 與A成正比，譜圖可以用為縱坐標，因而也可以表示吸收峰的強度。一般地， 104 為強吸收（ 不超過105） = 103 -104為中等吸收 103 為弱吸收，由于這種躍遷的幾率很小，稱為禁戒躍遷。第十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十

12、張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月P. Shen, S. T. Tan, et al, Macromolecules, 2008, 41, 5716-5722第二十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月Y. Liu,.,S. T. Tan, Chem. Commun. 2009, 2499第二十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月H. Chen, ., S. Tan, Journal of Physics Chemistry

13、 C , 2010, 114, 3280-3286第二十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月鍍膜器件室第二十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月光伏性能測試室第二十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.2 熒光光譜2.2.1熒光光譜法基本原理 (1) 熒光(Fluoresence)和磷光(Phosphoresence) 熒光和磷光同屬發(fā)光光譜法，它們與分子吸收分光光度法緊密相關。分子在吸收輻射能而被激發(fā)到較高電子能級后，它們?yōu)榱朔祷鼗鶓B(tài)而釋放出能量。熒光是分子在吸收輻射之后立即(在10-8 s數(shù)量級)發(fā)射的光，而磷光則是在吸收能量后延遲釋放的光。兩者間的區(qū)別是；熒光是

14、由單態(tài)單態(tài)的躍遷產(chǎn)生的，而磷光所涉及的是三線態(tài)單態(tài)躍遷。 熒光光譜具有很高的靈敏度。樣品中含有1100 ppm生色團即可產(chǎn)生足夠強的檢測信號。采用多種不同的表征方法，使熒光發(fā)光方法具有多功能性，并可獲得分子水平的信息。第二十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 大多數(shù)有機分子的電子態(tài)可以歸納為兩大類：單態(tài)和三重態(tài)。處于單態(tài)時，分子內所有電子的自旋是配對的；處在三重態(tài)時，一組電子自旋是不成對的。第三十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 分子在吸收適當?shù)妮椛淠軙r，它從基態(tài)內的一個振動能級上升到某一受激電子能級(通常是第一受激單態(tài)，S1)中的某一振動能級。吸收步驟發(fā)生在10-15S以

15、內。在緊接吸收之后處于受激單態(tài)較高振動能級中的分子，通過碰撞而把過多的能量轉移給其它分子，以及將過多的能量分配給受激分子內振動或旋轉的其它可能模式，從而很快回到受激態(tài)的最低振動能級。 當受激分子恢復到基態(tài)時，產(chǎn)生自發(fā)輻射，即熒光現(xiàn)象。這一輻射過程(S1-S0) 的壽命很短，約10-8s，所以在許多分子里它能有效地與其它轉移激發(fā)能的過程相競爭。 如果單態(tài)的勢能曲線和三重態(tài)的勢能曲線交叉，某些單態(tài)受激分子可以通過系統(tǒng)間的交叉而轉到最低三重態(tài)，再從這里回到基態(tài)的某一振動級，便發(fā)射磷光。磷光的發(fā)射必須改變自旋狀態(tài)，因此這一發(fā)射過程的速度比熒光慢得多，可達10-2100 s。 熒光和磷光的發(fā)射波長長于激

16、發(fā)波長，除了X射線熒光外，大多熒光法的工作波長在200800nm之間。第三十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(2) 激發(fā)(Excitation, Ex)光譜 熒光物質的激發(fā)光譜是指不同激發(fā)波長的輻射引起物質發(fā)射某一波長熒光的相對效率。也就是，固定發(fā)射波長，改變激發(fā)波長，所得的熒光強度與激發(fā)波長的關系曲線為激發(fā)光譜。 理論上最大激發(fā)波長與最大吸收波長是一致的，由激發(fā)光諧可選擇最佳激發(fā)波長。(3) 發(fā)射(Emission, Em)光譜 使激發(fā)光的波長和強度保持不變，讓熒光物質所產(chǎn)生的熒光通過發(fā)射單色器后照射到檢測器上，掃描發(fā)射單色器并檢測各種波長下相應的熒光強度，然后記錄熒光強度對發(fā)射

17、波長.第三十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.2.2 熒光光譜的測量 熒光光譜儀由光源、單色器、記錄系統(tǒng)等組成。并具有兩個單色器，一個為激發(fā)單色器，另一個為發(fā)射單色器。下圖為這類儀器光學系統(tǒng)示意圖。第三十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月PE LS55 Luminescence Spectrometer第三十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.2.3 溶液的熒光強度與濃度的關系 (1) 熒光的壽命 熒光分子的平均壽命( )定義：當不存在進一步的激發(fā)時，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目衰減到初始值的1e所經(jīng)歷的時間，用下式表示: 式中，kf為熒光發(fā)射的速率常數(shù)； 為各種非

18、輻射去活化過程的速率常數(shù)總和。熒光強度的衰變一般遵從如下速率方程式: 式中F0 和 Ft分別表示t=0和t=t時的熒光強度。作lnFt-t的關系曲線,從該曲線的斜率可求出熒光壽命 . 沒有非輻射去活化過程存在時的熒光壽命為內在的壽命,用 表示: 一個近似的經(jīng)驗規(guī)則是: 式中 為最大吸收波長下的摩爾吸光系數(shù)。 第三十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(二)熒光量子產(chǎn)率 熒光量子產(chǎn)率的定義：熒光物質吸光后所發(fā)射的熒光的光子數(shù)與所吸收的激發(fā)光的光子數(shù)之比值，即: 現(xiàn)代最常用的測量方法是相對測量法得到相對熒光量子產(chǎn)率。 在同一設備和激發(fā)光強度下測定已知量子產(chǎn)率標準溶液(以s腳注)，和另一未知

19、量子產(chǎn)率溶液(以x腳注)的校正熒光發(fā)射光譜面積D時，有以下的關系：式中，A為吸光度；n為溶液折射率；D為校正熒光發(fā)射光譜積分面積。熒光化合物的熒光量子產(chǎn)率的數(shù)值常處于0.11之間。 熒光量子產(chǎn)率與熒光壽命之間的關系為: 第三十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.2.4 熒光與分子結構的關系 在熒光分析中，分析對象本身必須具有熒光特性，或者使其與相應的熒光試劑反應生成具有熒光特征的物質。分子的熒光性主要取決于它自身的能量狀態(tài)，即該分子的化學結構。熒光強度與分于結構關系一般具有如下普遍規(guī)律。 1. 具有共軛 鍵的化合物 化合物共軛體系越大，能量越低，離域 電子越容易激發(fā)，熒光越易產(chǎn)生。

20、大部分物質具有芳環(huán)或雜環(huán)，芳環(huán)越大，其熒光峰越移向長波方向，熒光強度也越強。 2. 具有剛性平面結構的化合物 熒光效率高的熒光體，其分子多是平面構型且具有一定的剛性，例如偶氮苯不發(fā)熒光雜氮菲會發(fā)熒光。 有機配位劑與金屬離子組成配合構成取代基之間形成氫鍵，加強了分子的剛性，使熒光強度增強。 第三十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3取代基的影響 (1) 給電子取代基 當化合物中含有-NH 2、-NHR、-NR2、-0H、-OR、-CN等給電子基團時，這些基團上的n電子可通過共軛效應(十E)向芳環(huán)離域，使共軛體系中電子云密度增大，分子基態(tài)

21、激發(fā)能降低，故能增強分子的熒光。 (2) 吸電子取代基 當化合物中含有-CO-、-CHO、-COOH、 -NO2和重氮類等基團時，由于吸電子基的誘導效應(-I)，使共扼體系中n電子云的密度降低，削弱了分子的熒光. (3) 取代基的位置 鄰位及對位取代基對熒光影響較大，間位取代基影響不大，兩種性質不同的取代基共存時，其中一個取代基起主導作用。(4)重原子效應 芳烴取代上鹵素(Cl、Br和I)等其他的重原子之后。分子內的共軛效應(十E)小于誘導效應(-I)，使共軛體系的電子云密度下降。分子熒光強度隨重原子的原子量增加而減弱，而磷光通常相應地增強，這種效應稱為重原子效應。因為重原子的存在，使得熒光體

22、中電子自旋軌道偶合作用加強，S1T1的系間交叉增加，導致熒光強度減弱，磷光強度增強。第三十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 4鈾和稀土元素的鹽類 參加吸光的是4f和5f內層電子, 與外部沒有能量交換,無論固相還是液相, 4f和5f電子躍遷所特有的熒光.5配位化合物的熒光 金屬離子與有機配位體形成配位化合物的發(fā)光能力與金屬離子以及有機配位體的結構有很大關系。 (1)二元配合物 金屬離子主要有兩種類型。第一類金屬離子的外電子層具有與惰性氣體相同的結構，為反磁性離子，這種金屬離子與含有芳基的有機配位體形成配合物時一般會發(fā)較強的熒光。配合物的熒光強度隨金屬離子的原子量增加而減弱(也稱重原子

23、效應)，吸收峰和發(fā)射峰也相應向長波長方向移動。金屬離子相當于一惰性原子，與有機配位體的不同部位形成一附加環(huán)，同時加強配位體的剛性平面結構。這類配合物由配位體L吸光和發(fā)光，稱L*一L發(fā)光。 第四十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 第二類金屬離子具有惰性氣體的外層電子結構，其次外層含有未充滿電子的f層，金屬離子會產(chǎn)生f*一f發(fā)光躍遷。激發(fā)的有機配位體的能量可能轉移給金屬離子M，產(chǎn)生金屬離子激發(fā)態(tài)M*，由激發(fā)態(tài)金屬離子M*返回基態(tài)，發(fā)出特征的線狀熒光，稱M*一M發(fā)光。其熒光強度比該金屬純無機離子的熒光強得多，金屬離子得到敏化，部分稀土元素屬于這類。(2) 三元配合物 三元配合物的發(fā)光行為與

24、上述的二元配合物相似，即可分為L*-L型發(fā)光和M*-M型發(fā)光。可是在某些情況下，三元配合物可大大提高熒光分析法的靈敏度和選擇性。目前有很多元素采用三元配合物的熒光分折。第四十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月5、環(huán)境因素對熒光光強度的影響 雖然分子的熒光性取決于分子的化學結構，但溶液中環(huán)境因素對分子熒光能產(chǎn)生強烈的影響。(1) 溶劑的影響 有人認為溶劑對于熒光強度的影響主要決定于溶劑的分子結構，而不在于溶劑的極性。溶質、溶劑分子問的相互作用，即偶極子向的靜電作用、氫鍵、電荷移動等因素改變了熒光的量子產(chǎn)率，要對溶劑的影響做出恰當解釋是不容易的。(2) 溫度的影響 在一般情況下，隨著熒光

25、物質溫度的升高而熒光強度降低。其原因在于高溫下分子碰撞失去能量以及易于發(fā)生內部轉體和系間交叉，可是也有例外。在熒光測定時需要使試樣保持恒溫。(3) pH值 一般情況下度具有很大影響, 溶液的pH值對熒光性有機化合物和熒光性螯合物的熒光光譜以及熒光強度進行定量分析時必須選擇最佳pH范圍。第四十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月6. 溶液熒光猝滅 熒光猝滅一般指任何可使某種給定熒光物質的熒光強度下降的作用。狹義地說，熒光猝滅指的是熒光物質分于與溶劑分子或溶質分子之間所發(fā)生的導致熒光強度下降的物理或化學作用過程。與熒光物質分子發(fā)生相互作用而引起熒光強度下降的物質，稱為熒光猝滅劑。 熒光猝滅

26、過程分為兩種形式： 第一種：基態(tài)熒光性分子P與猝滅性分子Q之間生成配位化合物PQ，從而使熒光物質喪失熒光性。由這種機理引起的猝滅是靜態(tài)猝滅: 第二種：激發(fā)態(tài)熒光性分子P*與猝滅性分子Q碰撞而失去能量,稱為動態(tài)粹滅：第四十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(1) 濃度猝滅 對于氣態(tài)或液態(tài)的純熒光物質，其濃度達到某一程度之后熒光強度開始降低，這種現(xiàn)象叫濃度猝滅。濃度猝滅有兩個原因: 一是由激發(fā)態(tài)分子與基態(tài)分子碰撞造成的動態(tài)猝滅；另一原因是基態(tài)分子締合造成的靜態(tài)猝滅。也有負的濃度猝滅現(xiàn)象。(2) 氧分子猝滅 很多的熒光物質，特別是芳香族碳氫化合物的熒光會被氧猝滅。在溶液中氧分子的猝滅作用大

27、小因熒光分子的結構及溶劑介電常數(shù)而異。沒有取代基的芳香族化合物，氧分子的猝滅作用大；有取代基的芳香族及雜環(huán)化合物，氧分子猝滅作用小。有機溶劑中猝滅作用大，水溶液中猝滅作用小。對氧分子猝滅作用的一種解釋為，三重態(tài)的氧分子和激發(fā)單重態(tài)的熒光分子碰撞形成了激發(fā)單重態(tài)的氧分子和三重態(tài)的熒光分子。還有一種解釋為順磁性的氧分子增加了自旋軌道的相互作用，助長了系間交叉(S1-T1,T1-S0)的速度。 第四十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(3) 順磁性離子猝滅 順磁性金屬離子，特別是3d軌道未充滿電子的過渡金屬離子，如Fe(III)，Ni(II)，Cr(III)，Cu(II)，Co(II)等對

28、熒光性分子顯示很大的猝滅作用。一般解釋為：熒光性分子的電子與順磁性離子的軌道相互作用形成特殊的能級，或者是由于順磁性離子的有色吸收將熒光分子的能量轉化為熱能，增加了系統(tǒng)間交叉的速度。第四十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.2.6 熒光光譜分析及其應用 1.熒光定量分析 進行常規(guī)的熒光定量分析時，熒光強度必須與測定成份的濃度成正比，并具有良好的重現(xiàn)性，一般采用工作曲線法。首先用一穩(wěn)定的熒光物質(熒光塑料板或某種熒光基準物質如硫酸奎寧的溶液)，并設定儀器的工作條件即校正儀器讀數(shù)，使不同時間測得的工作曲線先后一致。然后測定已知濃度的標準溶液系列的熒光強度，以熒光強度對標準溶液濃度繪制工

29、作曲線。最后由測得的試樣溶液的熒光強度對照工作曲線，求出分析物質的濃度。定量分析中應使用工作曲線的直線部分。 熒光分析中，熒光強度必須真實地反映待測熒光物質的濃度，應當扣除溶劑和其他熒光雜質的熒光強度，即扣除空白溶液的值。根據(jù)樣品實際情況，可根據(jù)溶劑空白、試劑空白或僅猝滅了分析物質熒光后的試樣溶液空白。第四十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 熒光探針 以熒光標記物或熒光探針注入生物體內,可以檢測生物體內的生物或化學反應. 對熒光探針的要求是：有高的熒光強度(包括激發(fā)的吸收和量子產(chǎn)率)；熒光信號與背景應有明顯的區(qū)別，探針試劑的熒光發(fā)射波長應大于500nm，Stockes位移應大于

30、50nm；其與生物體的結合不能對生物體有不利的影響；易溶于水，形成的結合物在貯存或測定時穩(wěn)定性好。 作為熒光探針的鑭系離子螯合物，已使熒光免疫分析的熒光探針由單純的有機分子標記物發(fā)展到金屬離子螯合物，由于鑭系離子螯合物高強度的熒光發(fā)射及熒光壽命長的特點，已建立了時間分辨熒光免疫分析法(FIA). 在FIA中己廣泛應用異硫氰酸熒光素及其衍生物、羅丹明類衍生物等作為標記物。另外一些生物大分子，如藻膽蛋白、卟啉類和葉綠素等，由于其stokes位移大，有利于排除干擾，也作為探針標記物。一些有機熒光探針的結構及分析用途見分析化學手冊第三分冊表232。第四十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月Fi

31、gure 9. Fluorescent optical microscopic image of electrospun PLLA fibers containing 50 wt% ZnSe quantum dots (200 magnification).Figure 10. Fluorescence emission spectra of (a) ZnSe quantum dots from CH2Cl2 solution, (b) electrospun PLLA fibers containing 10 wt% ZnSe, (c) electrospun PS fibers conta

32、ining 10 wt% ZnSe.S Schlecht, S T Tan, J H. Wendorff, Chemistry of Materials 2005,17(4), 809第四十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月Figure 1 (a) UV-Vis and fluorescence emission spectra and (b) Fluorescent optical microscopic image of electrospun PHEMA fibers containing 30 wt% Fe3O4 nanoparticles and 20 wt% albumi

33、n with dog-fluorescein isothiocyanate.(a)(b)S T Tan, J H. Wendorff, ChemPhysChem, 2005, 6, 1461第四十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 無機化合物的熒光分析 無機化合物的直接熒光測定，以鈾和稀土元素分析為主。絕大多數(shù)無機化合物都是與有機試劑發(fā)生反應轉變?yōu)闊晒馕镔|而后進行測定(即熒光呈現(xiàn)法)，利用的反應類型有形成配合物、置換反應、氧化還原反應、催化反應和酶反應等?；跓o機化合物對熒光試劑或熒光配合物的熒光猝滅作用的方法(即熒光猝滅法)測定無機物，約占全部文獻的五分之一，其中也不乏一些高靈

34、敏度的方法，但其線性范圍和選擇性不如熒光呈現(xiàn)法。分析化學手冊第三分冊表235(共32頁)匯總了近十幾年國內外各種無機離子或化合物的熒光分析方法。第五十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月4. 有機化合物的熒光分析 熒光法可以分析痕量和超痕量的有機物。在各種環(huán)境樣品大氣、水、土壤、動植物材料、食品和飼料中，熒光法用來測定其雜質，也還應用于藥物、農藥、毒素、胺類、氨基酸以及其他生物樣品的分析。 一般的熒光分析法的選擇性不夠好，這是實際應用熒光法的主要障礙。但熒光法與色譜法包括紙色譜、柱色譜、薄層色譜、高效薄層色譜、液相色譜、離子交換色譜、高效液相色譜(HPLC)、氣固體色譜、氣液色譜等、萃取、電泳、沉淀、吸附等其他分離手段相結合后，使熒光法的應用有了新的極大可能。 熒光法不僅適用于本身具有熒光的物質的分析，還有不少試劑能與許多有機物形成熒光衍生物。進一步再利用環(huán)化、縮合、氧化、還原、與酸堿作用、加熱和光照等反應，能分析許多自身沒有熒光的有機物。一些有機化合物的熒光分析方法匯總在分析化學手冊第三分冊表2314(共8頁) 。第五十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于