1、蔬菜農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法原理及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)1、目前農(nóng)藥在蔬菜中殘留的問(wèn)題農(nóng)藥是把“雙刃劍”，對(duì)促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)有極其重要的作用。但由于農(nóng)藥本身固有的化 學(xué)屬性和對(duì)其使用不當(dāng)，導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)，嚴(yán)重危害到廣大人民群眾的健康。在我國(guó)農(nóng)藥中，70%為有機(jī)磷農(nóng)藥，而在我國(guó)生產(chǎn)使用的有機(jī)磷農(nóng)藥中，70%為劇毒、高毒類(lèi)，而且較多是禁止在蔬菜作物上使用的。2、農(nóng)藥中毒事件常有報(bào)道，究其原因農(nóng)產(chǎn)品不按規(guī)定的用藥量、次數(shù)、方法或安全間隔期施藥，或施用不允許在蔬菜上使 用劇毒、高毒類(lèi)農(nóng)藥；現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)施行的農(nóng)藥殘留測(cè)定需要通過(guò)有機(jī)溶劑提取、凈化和用大型分析儀器進(jìn)行， 無(wú)法對(duì)廉價(jià)的蔬菜進(jìn)行隨時(shí)隨地或快速檢測(cè)而形成的

2、監(jiān)管不到位。3、農(nóng)藥分類(lèi):/物源港|無(wú)機(jī)化合物北學(xué)合成農(nóng)藥“有機(jī)合成化合物有機(jī)篇化合捌 有機(jī)廨化合物 植除蟲(chóng)菊酯 氨基甲酸酯 雜環(huán)類(lèi)化含物 其它（聿兼觸 酸類(lèi)*服類(lèi)化 合物）礦物源農(nóng)藥有效成分起源于礦產(chǎn)無(wú)機(jī)物和石油的農(nóng)藥。代表有硫酸銅、硫磺、石硫合劑、磷化鋁、磷化鋅和石油乳劑等。生物源農(nóng)藥包括植物源農(nóng)藥和動(dòng)物源農(nóng)藥及微生物源農(nóng)藥。植物類(lèi)別有植物毒素、植物內(nèi)源激素、植物源昆蟲(chóng)激素、拒食劑、引誘劑、驅(qū)避劑、絕育劑、增效劑、植物防衛(wèi)素、易株克生物質(zhì)等。動(dòng)物資源開(kāi)發(fā)的農(nóng)藥包括動(dòng)物毒素、昆蟲(chóng)激素、昆蟲(chóng)信息素和天敵等。按作用方式分類(lèi)胃毒素農(nóng)藥（敵百蟲(chóng)、敵敵畏、甲胺磷、馬拉硫磷）觸殺性農(nóng)藥（對(duì)硫磷、敵敵畏、

3、甲胺磷、馬拉硫磷）內(nèi)吸性農(nóng)藥（樂(lè)果、甲胺磷、氧樂(lè)果、久效磷）熏蒸性農(nóng)藥（澳甲烷、磷化鋁、敵敵畏）特異性農(nóng)藥（乙烯利、毒霉素、滅幼月尿）4、目前所使用的農(nóng)藥按其化學(xué)結(jié)構(gòu)大致可以分為以下幾類(lèi)：有機(jī)氯類(lèi)、有機(jī)磷類(lèi)、氨基甲酸酯類(lèi)、擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)、雜環(huán)類(lèi)化合物、其他（苯氧竣酸類(lèi)、 月尿類(lèi)化合物）等。A、有機(jī)磷類(lèi)敵敵畏、甲拌磷、樂(lè)果、對(duì)氧磷、對(duì)硫磷、唾硫磷、優(yōu)殺硫磷、敵百蟲(chóng)、氧化樂(lè)果、磷胺、 甲基喀嚏磷、馬拉硫磷、辛硫磷、亞胺硫磷、甲胺磷、地亞農(nóng)、甲基毒死睥、毒死睥、倍硫 酸、殺撲磷、乙酰甲胺磷、巴胺磷、甲基對(duì)硫磷、殺螟硫磷、異柳磷、異柳磷等。B、有機(jī)氯類(lèi)“-666、3-666、丫-666、8-666、op

4、 -DDE、pp -DDE、op -DDD、pp -DDT、op -DDT、 異菌月尿、五氯硝基苯、林丹、乙烯菌核利、三氯殺蛾醇、功夫、氯硝胺、百菌清、粉銹寧、 甲氯菊酯、氯菊酯、鼠戊菊酯、澳鼠菊酯等。C、氨基甲酸酯類(lèi)涕滅威碉、涕滅威亞碉、滅多威、3-羥基吠喃丹、涕滅威、吠喃丹、甲蔡威、葉蟬散、仲丁威、速滅威等。d、擬除蟲(chóng)菌酯類(lèi)聯(lián)苯菊酯、二氧苯醒菊酯、功夫菊酯、澳鼠菊酯、鼠戊菊酯、氟氟菊酯、氟氯氟菊酯，戊菊 酯、甲鼠菊酯、氯氟氟菊酯、吠喃菊酯、芳吠菊酯、右旋丙烯菊等。5、最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)最大殘留限量(Maximum Residue Limit , MRL)在農(nóng)畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的法定最高允許濃度

5、，又稱(chēng)最高殘留限量，以每千克農(nóng)畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的毫克數(shù)（毫克/千克）表示。目的：控制食品中過(guò)量農(nóng)藥殘留以保障食用者安全，對(duì)超標(biāo)的產(chǎn)品采取措施，即禁止食用。 執(zhí)行和指導(dǎo)合理用藥，農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測(cè)超標(biāo)時(shí)，表明未按規(guī)定用藥。減少?lài)?guó)際貿(mào)易糾紛，各國(guó)均 制訂本國(guó)的MRL。食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)A、GB2763-2014,規(guī)定了 387種農(nóng)藥最高殘留限量。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)作為一項(xiàng)加強(qiáng)農(nóng)藥管理的措 施。B、其中，針對(duì)蔬菜、水果、茶葉等鮮食農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標(biāo)多發(fā)、易發(fā)問(wèn)題，新標(biāo)準(zhǔn)重點(diǎn) 增了蔬菜、水果等鮮食農(nóng)產(chǎn)品的限量標(biāo)準(zhǔn)。水果農(nóng)藥殘留限量增加 473項(xiàng)，蔬菜（包括食用菌）農(nóng)藥最大殘留限量增加431項(xiàng)。6、高毒農(nóng)藥禁限用

6、管理措施農(nóng)業(yè)部、工業(yè)和信息化部、環(huán)境保護(hù)部、國(guó)家工商行政管理總局和國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn) 檢疫總局與2011年6月15日發(fā)布第1586號(hào)公告，決定對(duì)高毒農(nóng)藥采取進(jìn)一步禁限用管理 措施。停止受理苯線(xiàn)磷、地蟲(chóng)硫磷、甲基硫環(huán)磷、磷化鈣、磷化鎂、磷化鋅、硫線(xiàn)磷、蠅毒 磷、治螟磷、特丁硫磷、殺撲磷、甲拌磷、甲基異柳磷、克百威、滅多威、滅線(xiàn)磷、涕滅威、 磷化鋁、氧樂(lè)果、水胺硫磷、澳甲烷、硫丹等22種農(nóng)藥新增田間試驗(yàn)申請(qǐng)、登記申請(qǐng)及生產(chǎn)許可證申請(qǐng)；停止批準(zhǔn)含有上述農(nóng)藥的新增登記證和農(nóng)藥生產(chǎn)許可證（生產(chǎn)批準(zhǔn)文件）。撤銷(xiāo)氧樂(lè)果、水胺硫磷早柑橘樹(shù)，滅多威在柑橘樹(shù)、蘋(píng)果樹(shù)、茶樹(shù)、十字花科蔬菜， 硫線(xiàn)磷在柑橘樹(shù)、黃瓜，硫丹

7、在蘋(píng)果樹(shù)、茶樹(shù)，澳甲烷在草莓、黃瓜上的登記。本公告發(fā)布前已生產(chǎn)產(chǎn)品的標(biāo)簽可以不再更改，但不得繼續(xù)在已撤銷(xiāo)登記的作物上使 用。自2011年10月31日起，撤銷(xiāo)（撤回）苯線(xiàn)磷、地蟲(chóng)硫磷、甲基硫環(huán)磷、磷化鈣、磷 化鎂、磷化鋅、硫線(xiàn)磷、蠅毒磷、治螟磷、特丁硫磷等10種農(nóng)藥的登記證、生產(chǎn)許可證（生 產(chǎn)批準(zhǔn)文件），停止生產(chǎn)。自2013年10月31日起，停止銷(xiāo)售和使用。根據(jù)以上情況，制定出有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的快速檢測(cè)方法，加強(qiáng)對(duì)農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)一成為十分必要的監(jiān)管措施。7、農(nóng)藥殘留主要檢測(cè)方法有兩種:色譜檢測(cè)法：色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。色譜法（包括氣相色譜、液相色譜、氣

8、質(zhì)聯(lián)用等）。優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、準(zhǔn)確、定性定量；缺點(diǎn)：成本高、操作復(fù)雜、時(shí)間較長(zhǎng)。速測(cè)儀法：速測(cè)儀法只能作為農(nóng)殘定性分析，易于在基層推廣等特點(diǎn)， 是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法，也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用最廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。A、速測(cè)儀法的主要優(yōu)點(diǎn)：1、該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)便、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，適用于現(xiàn)場(chǎng)定性測(cè)定，特別適合 在蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場(chǎng)及農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門(mén)開(kāi)展快速檢測(cè)工作。2、該方法可對(duì)有農(nóng)藥殘留的蔬菜進(jìn)行粗篩，將一部分農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜控制在市場(chǎng)之外，避免因農(nóng)藥殘留發(fā)生中毒事件。B、速測(cè)儀法的主要缺點(diǎn)：1、酶試劑易失活，導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不好

9、，實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率大約為60%70%左右；2、存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類(lèi)農(nóng)藥，不能檢測(cè)有機(jī)氯類(lèi)、菊酯和其 它類(lèi)別的劇毒農(nóng)藥；3、不適合檢測(cè)蔥蒜類(lèi)、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、菱白、蘑菇、花椒等 14種容易出現(xiàn)假 陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品。8、速測(cè)儀的檢測(cè)方法有兩種：1、速測(cè)卡法（紙片法）2、酶抑制率法（分光光度法）9、兩種快速檢測(cè)方法的技術(shù)原理根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥能抑制昆蟲(chóng)中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲(chóng)中毒致死的原理而設(shè)計(jì)。如果蔬菜中不含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥，乙酰膽堿酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色。如果蔬菜

10、中含有可以抑制乙酰膽堿的活性的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥，這種酶就不 能被水解，從而無(wú)顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酶和顯色劑，用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留是否存 在。10、速測(cè)卡法（紙片法）1、試劑固有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測(cè)卡）。pH7.5緩沖液溶液：分別取 15.0g磷酸氫二鈉與1.59g無(wú)水磷酸二氫鉀用 500mL蒸儲(chǔ)水 溶解。2、儀器2.1、常量天平有條件配備37c 2C恒溫裝置。3、分析步驟整體測(cè)定法選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見(jiàn)放碎片，取 5g放入帶蓋瓶中，加入10mL緩沖溶液，震搖 50次，靜置2min以上。取一片速測(cè)卡，用白色藥片沾取

11、提取液，放置 10min以上進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，有條件時(shí)在37c恒溫裝置中放置 10min,預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤(rùn)。講速測(cè)卡對(duì)折，用手捏 3min或用恒溫裝置3min ,使紅色藥片與白色藥片疊合反應(yīng)。每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一個(gè)緩沖液的空白對(duì)照卡。表面測(cè)定法（粗篩法）擦去蔬菜表面泥土，滴23滴緩沖溶液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。取一片速測(cè)卡，講蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。放置10min以上進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，有條件時(shí)在37c恒溫裝置中放置 10min。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤(rùn)。將速測(cè)卡對(duì)折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫 3min ,使紅色藥片疊合反應(yīng)。每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一個(gè)緩沖液的空白對(duì)照卡。結(jié)果

12、判定：1、結(jié)果以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥抑制（為陽(yáng)性）、未抑制（為陰性）表示。2、與空白對(duì)照卡比較，白色藥片不變色或略淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或 與空白對(duì)照卡相同，為陰性結(jié)果。3、對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其他分析方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。速測(cè)卡法（紙片法）注意事項(xiàng)1、有些蔬菜如生姜、蔥、蒜、辣椒和番茄等汁液中含有破壞酶活性或者使藍(lán)色產(chǎn)物褪色的 物質(zhì)，處理這類(lèi)蔬菜時(shí)，不要讓其汁液太多釋放出來(lái)，不要剪得太碎，浸提時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)， 必要時(shí)可采用整枝蔬菜浸提或采用表面測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可以采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。2、試紙上的提取液不

13、可太多而溢出試紙，亦不可太少而使反應(yīng)不完全。3、最好將每一批樣品處理好后一起加樣，一面時(shí)間過(guò)長(zhǎng)蒸干。4、當(dāng)溫度條件低于 37C,酶反應(yīng)的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)， 延長(zhǎng)時(shí)間的確定，應(yīng)以空白對(duì)照卡用（體溫）手指捏3分鐘時(shí)可以變藍(lán)，即可往下操作。注意樣品放置的時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照卡放置的時(shí)間一致才有可比性。5、空白對(duì)照卡不變色的原因：一是藥片表面緩沖溶液加的少，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面不夠濕 潤(rùn)，二是溫度太低。6、如有條件，將農(nóng)藥速測(cè)卡放在10c以下保存效果會(huì)更好，每小包產(chǎn)品開(kāi)封后最好在三天內(nèi)用完，如用不完，可放入將有變色硅膠吸潮劑的瓶中密封保存，如發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥測(cè)速卡的紅色藥片由鮮紅橙色變

14、為暗淡的褐紅色，說(shuō)明紙片已吸潮失效。PR-3便攜式農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀操作步驟：1、接通電源，右側(cè)開(kāi)關(guān)撥至“開(kāi)”，打開(kāi)上蓋按“ START鍵預(yù)熱；2、當(dāng)預(yù)熱達(dá)到設(shè)置反應(yīng)溫度 TEMP時(shí)，聽(tīng)到“嘩” 一聲，屏幕顯示“ TEMP1”，預(yù)熱結(jié)束， 等待倒計(jì)時(shí)；1 -2滴提取液;3、去試紙外模，插入試紙（白片在下端），在白片上分別加 4、再次按“START鍵，單片電腦開(kāi)始“ TEMPI”倒計(jì)時(shí)；5、當(dāng)聽(tīng)到連續(xù)“嘩、嘩、嘩”聲，屏幕顯示“ CLOS ,提示合上前蓋，進(jìn)入“ TEMP2”倒 計(jì)時(shí)；6、當(dāng)聽(tīng)到六聲“嘩。嘩、嘩”音，本次操作結(jié)束，打開(kāi)上蓋觀察試紙顏色變化；7、試紙顯示藍(lán)色為陰性，淺藍(lán)色為弱陽(yáng)性，

15、白色為陽(yáng)性；8、測(cè)試完畢，向上取下試紙進(jìn)行下一次的檢測(cè)。酶抑制率法（分光光度法）1、試劑pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無(wú)水磷酸氫二鉀與 3.2g磷酸二氫鉀，用1000mL蒸儲(chǔ)水 溶解。顯色劑：分別取 160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20m 了 緩沖溶液溶解，4 C冰箱中保存。底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.0mL蒸儲(chǔ)水溶解，搖勻后置4c冰箱中保存?zhèn)溆谩?保存期不超過(guò)兩周。酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3min的吸光度變化A Ao值應(yīng)控制在0.3以上。搖勻后置 4c冰箱中保存?zhèn)溆?，保存期不超過(guò)四天?？蛇x用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰

16、膽堿酯酶的AAo值應(yīng)控制在0.3以上。2、儀器2.1、分光光度計(jì)或相應(yīng)測(cè)定儀及常量天平。3、分析步驟樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取樣品1g,放入燒杯或提取液瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出提取液，靜置35min, 待用。對(duì)照溶液測(cè)試：先于試管中加入 2。5mL緩沖溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL顯色齊山 搖勻后于37c放置15min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.1mL底物搖勻，此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值A(chǔ) Ao。樣品溶液測(cè)試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其他

17、操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值A(chǔ) At。結(jié)果的表述計(jì)算1、檢測(cè)結(jié)果按公式計(jì)算：2、抑制率（% = （AAo-AAt） / AAoX1003、式中：A Ao對(duì)照溶液反應(yīng) 3min吸光度的變化值：4、A At樣品溶液反應(yīng) 3min吸光度的變化值：結(jié)果判定1、結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率R50%M,表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陰性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其他方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。酶抑制率法注意事項(xiàng)1、蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、菱白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物 次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)樣品時(shí)，可采取整株（體）蔬菜浸提。對(duì)一些含葉綠 素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提方法，減少色素的干擾。2、當(dāng)溫度條件低于 37 C,酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng)，延長(zhǎng)時(shí)間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min的吸光度變化A Ao值在0.3以上，即可往下操作。注意樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照溶液放置時(shí)間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對(duì)照溶液 3min的吸光度變化A Ao值0.3的