1、河南省博士后項(xiàng)目啟動(dòng)經(jīng)費(fèi)資助總結(jié)報(bào)告姓名 宇文延青 編號(hào) 2012059 所 在 設(shè)站 單 位 河南師范大學(xué) 項(xiàng)目名稱 日本三角渦蟲(Dugesia japonica)成體干細(xì)胞的分離純化及在損傷修復(fù)中作用 資助金額 3萬(wàn)元 填報(bào)日期 20140526 河南省博士后管理委員會(huì)辦公室制資助經(jīng)費(fèi)使用情況開支項(xiàng)目名稱金 額備 注儀器設(shè)備使用費(fèi)5,000元試驗(yàn)用材料費(fèi)17,500元測(cè)試費(fèi)3,500元差旅費(fèi)2,500元科研管理費(fèi)1,500 合計(jì)：30,000元 余額：0元本研究項(xiàng)目其它經(jīng)費(fèi)來(lái)源情況經(jīng)費(fèi)來(lái)源金 額 合計(jì)：剩余資金以及用資助金購(gòu)買的儀哭設(shè)備、圖書資料等物品的處理情況剩余資助金或物品名稱留給設(shè)

2、站單位帶 走 資助金在科研工作中起到的作用 彌補(bǔ)了課題研究過(guò)程中經(jīng)費(fèi)的不足，充足的資助金保障了研究工作的順利進(jìn)行。研究工作總結(jié)1主要研究?jī)?nèi)容、研究方法及研究成果：1.1 主要研究?jī)?nèi)容日本三角渦蟲（Dugesia japonica）具有極強(qiáng)的再生能力，是動(dòng)物再生機(jī)制研究的優(yōu)良的模式動(dòng)物，而neoblast細(xì)胞是D, japonica體內(nèi)唯一具有增殖能力的全能干細(xì)胞，是其再生的生物學(xué)基礎(chǔ)。本項(xiàng)目的研究?jī)?nèi)容主要包括以下三個(gè)方面：（1）采用機(jī)械切割與胰蛋白酶消化相結(jié)合的方法，建立D. japonica的組織分散方法，并研究neobalst的分離純化方法；（2）采用SMART RACE方法克隆neobl

3、ast細(xì)胞的標(biāo)志基因，為neoblast標(biāo)記奠定基礎(chǔ)；（3）在分離neoblast的基礎(chǔ)上，通過(guò)體外培養(yǎng)技術(shù)和移植技術(shù)研究neoblasts對(duì)D. japonica再生能力的影響。1.2 研究方法（1）組織分散方法D. japonica組織分散主要采用機(jī)械切割與胰蛋白消化相結(jié)合的方法，采用正交設(shè)計(jì)對(duì)影響胰蛋白酶消化效果的主要因素溫度、時(shí)間和胰酶濃度進(jìn)行篩選，以細(xì)胞分散較好、細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整和細(xì)胞損失較少為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出最佳消化溫度、時(shí)間及胰酶嘗試，初步建立D, japonica組織分散方法。（2）標(biāo)志基因克隆方法標(biāo)志基因克隆主要采用同源克隆方法：首先在GenBank上搜索和下載全能干細(xì)胞的標(biāo)志基因，

4、在用生物學(xué)軟件對(duì)序列進(jìn)行同源性分析的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物克隆該基因的保守區(qū)，然后用SMART RACE方法擴(kuò)增其全長(zhǎng)。（3）Neoblast功能研究主要采用體外培養(yǎng)和移植技術(shù)進(jìn)行研究。通過(guò)輻射技術(shù)清除D. japonica體內(nèi)的neoblasts，再將體外分離培養(yǎng)的neoblasts植入處理的D. japonica體內(nèi)，研究neoblasts對(duì)D. japonica再生能力的影響。1.3 研究成果（1）初步建立的D. japonica的組織分散方法，具體方法如下：以0.25%胰酶（pH = 7.4）按5:1（體積比）加入待消化組織，在20水浴條件下消化15 min，然后以4、1000 rpm離

5、心3 min收集分散細(xì)胞；（2）成功克隆neoblast細(xì)胞標(biāo)志基因pumilio，并進(jìn)行了深入的生物學(xué)分析。（3）發(fā)表相關(guān)研究論文（SCI）2篇。*Yuwen Y.Q, Dong Z.M., Si X.H. & Chen G.W*. 2014. A pumilio homolog in Polycelis sp. Development Genes Evolution, 224 (1): 53-56.*Dong Z.M., Yuwen Y.Q., Wang Q.H., Chen G.W*. & Liu D.Z. 2012. Eight genes expression patterns du

6、ring visual system regeneration in Dugesia japonica. Gene Expression Patterns. 12 (1-2): 1-6.2研究成果的科學(xué)意義、應(yīng)用前景、推廣開發(fā)價(jià)值、以及經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益： 近年來(lái)，胚胎干細(xì)胞（ES cells）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Induced Pluripotent Stem Cells , iPS）被廣泛用于醫(yī)療，但二者的缺點(diǎn)是：（1）分化過(guò)程必須在體外完成；（2）移植細(xì)胞中不能含有多能干細(xì)胞，以防止畸胎瘤的形成?？朔@些問(wèn)題較理想的策略是促進(jìn)機(jī)體固有的成體干細(xì)胞在體內(nèi)的再生過(guò)程，這就需要對(duì)干細(xì)胞在體內(nèi)的生物學(xué)

7、特性進(jìn)行研究，這種研究在哺乳動(dòng)物模型上進(jìn)行比較困難，而D. japonica是成體干細(xì)胞的體內(nèi)生物學(xué)研究的理想替代模型，而建立neoblasts的高效分離與純化方法，對(duì)其的體外生物學(xué)開展深入研究，是對(duì)其體內(nèi)生物學(xué)研究的基礎(chǔ)，因此D. japonica的neoblasts分離純化技術(shù)的研究必將促進(jìn)成體干細(xì)胞的體內(nèi)生物學(xué)研究。研究表明，neoblasts是D. japonica再生的生物學(xué)基礎(chǔ)，因此對(duì)neoblasts的分離純化及體外培養(yǎng)為進(jìn)一步深入了解其生物學(xué)特性奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，并推動(dòng)以neoblasts為基礎(chǔ)的D. japonica的再生機(jī)制研究。3資助項(xiàng)目完成論著情況(包括論著名稱、發(fā)表時(shí)間、登載論文的刊物名稱及卷期或出版專著的出版社全稱)：在該項(xiàng)目資助下發(fā)表SCI論文2篇：1Yuwen Y.Q, Dong Z.M., Si X.H. & Chen G.W*. 2014. A pumilio homolog in Polycelis sp. Development Genes Evolution, 224 (1): 53-56.2Dong Z.M., Yuwen Y.Q., Wang Q.H., Chen G.W*. & Liu D.Z. 2012. Eight genes expression patterns during visual system regenerati