1、海南省地方標準尖鰭鯉種質(zhì)編制說明（征求意見稿）海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院2022年6月12日海南省地方標準尖鰭鯉種質(zhì)編制說明一、標準制訂的背景和意義尖鰭鯉(Cyprinus acutidorsalis Wang)，隸屬于鯉形目 (Cypriniformes)、鯉科(Cyprinidae)、鯉屬(Cyprinus)，俗稱“海鯉”或“海鯽”，是我國特有的生活于河流出?？诟浇虻奈ㄒ货庺~，是海南乃至全國極重要的水產(chǎn)種質(zhì)資源。尖鰭鯉在我國主要分布在海南萬泉河博鰲段、沙美內(nèi)海、九曲江和廣西欽江茅尾河口。近年來由于過度捕撈、水體污染等原因，加之其分布范圍較窄、總體資源量低等因素，尖鰭鯉的野生資源量急劇下降，

2、在其原有棲息地已很難捕捉到，目前僅在海南省瓊海市博鰲鎮(zhèn)的沙美內(nèi)海區(qū)域有少量分布，其種群數(shù)量已經(jīng)處于極度瀕危的狀況，隨時有滅絕的危險。為了保護這一珍稀魚類，國家批準在海南省瓊海市設(shè)立萬泉河國家級水產(chǎn)種質(zhì)資源保護區(qū)，尖鰭鯉被確定為兩種重點保護魚類之一，此保護區(qū)是目前海南設(shè)立的唯一一個國家級水產(chǎn)種質(zhì)資源保護區(qū)。當前，尖鰭鯉的保護仍處于初級階段，基礎(chǔ)研究滯后、育苗難關(guān)尚未突破、棲息地被破壞，種群瀕臨滅絕，對其進行保護已迫在眉睫。目前我國發(fā)布的關(guān)于魚類種質(zhì)的省級標準共有 10項，大多集中于一些主養(yǎng)經(jīng)濟品種，如鞍帶石斑魚、斜帶石斑魚、云紋石斑魚等，土著種類沒有，經(jīng)查目前國標和地標均未發(fā)布任何有關(guān)于尖鰭鯉的

3、標準。因此，制訂尖鰭鯉種質(zhì)標準已刻不容緩。本標準從尖鰭鯉的外部形態(tài)特征、生長與繁殖特性、遺傳學(xué)特性（染色體、DNA條形碼）、檢驗方法等方面入手制訂相關(guān)標準，旨在貫徹農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準體系建設(shè)的要求，建立相應(yīng)的尖鰭鯉的種質(zhì)鑒定標準，可為尖鰭鯉的引種、開發(fā)、增殖放流等提供判定標準，研究成果對尖鰭鯉資源的合理保護與利用，確保海南淡水土著魚類種質(zhì)資源的保護與可持續(xù)發(fā)展，具有重要的意義。二、標準編制過程（一）任務(wù)來源尖鰭鯉種質(zhì)標準是由海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院提出申請，2021年8月9日，經(jīng)海南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳和海南省市場監(jiān)督管理局審查批準，編制任務(wù)列入 2021年第二批海南省地方標準制修定項目計劃，項目編號為 20

4、21-Z037，立項文件見海南省市場監(jiān)督管理局關(guān)于下達海南省 2021年第二批地方標準制定項目計劃的通知。擬在12個月內(nèi)完成尖鰭鯉種質(zhì)標準的制訂工作，為了加強本標準的研究制定工作，更好地完成標準的起草任務(wù)，本單位參照海南省地方標準DB 46/ T74-2021地方標準制修訂工作程序，制定項目實施方案，并將按實施方案開展標準起草工作。（二）成立標準起草小組為了更好的完成尖鰭鯉種質(zhì)標準的編制任務(wù)，海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究所從本所抽調(diào)長期從事水生生物資源調(diào)查、水產(chǎn)技術(shù)研發(fā)的科研人員參與實施，組建了標準編制小組，對任務(wù)進行了分解和明確的分工。主要起草人及其所做的工作如下：申志新：項目負責人和

5、第一起草人，負責標準的申報、組織實施、標準內(nèi)容設(shè)計、標準草案起草及征求意見等工作。董楊：主要起草人，負責標準內(nèi)容設(shè)計、方案的實施和開展具體的試驗等工作。李芳遠：主要起草人，負責項目中魚類生活習(xí)性調(diào)查，協(xié)助起草標準等工作等。蔡杏偉：主要起草人，負責標準中魚類形態(tài)測定，協(xié)助起草標準等工作。張清鳳：主要起草人，負責標準中DNA含量和條形碼測定，協(xié)助起草標準等工作。王吉：主要起草人，負責標準中性狀測定、繁殖性能測定，協(xié)助起草標準等工作。王世鋒：主要起草人，負責標準中染色體的測定。李高?。褐饕鸩萑?，協(xié)助制定項目實施方案，協(xié)助魚樣的收集、鑒定等。本標準按照GB-T1.1-2020標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)

6、則給出的規(guī)則進行起草，標準起草小組查閱了有關(guān)文獻，進行了充分的調(diào)查研究，在此基礎(chǔ)上形成了尖鰭鯉種質(zhì)標準的征求意見稿。（三）標準文稿編制的主要工作過程1.編寫標準前，海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究所已在尖鰭鯉的資源調(diào)查、馴養(yǎng)、保種等方面進行了4年的研究，積累了尖鰭鯉棲息地環(huán)境、基礎(chǔ)生物學(xué)數(shù)據(jù)、生長等大量的背景資料。在2021年申報之初即選調(diào)相關(guān)人員成立了專門的標準起草小組，經(jīng)過多次開會，反復(fù)研討，最終確定了標準的基本編制思路和內(nèi)容，制定工作計劃，明確了人員分工，落實了實施方案。2.查閱和學(xué)習(xí)相關(guān)政策和文獻，收集了與水產(chǎn)種質(zhì)標準，包括DB37T 2290-2013半滑舌鰨（種質(zhì)）、DB52T

7、1114-2016貴州省昆明裂腹魚種質(zhì)標準、DB42T 1595-2020中華沙塘鱧種質(zhì)標準等標準，以及GB/T 1.1-2020標準化工作導(dǎo)則、GB/T 18654養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗國家和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部有關(guān)質(zhì)量管理規(guī)定、產(chǎn)業(yè)政策等素材。3.標準起草小組按照既定工作計劃，開展了深入的調(diào)查，數(shù)據(jù)測量、分析、檢測等方面的工作，完成了尖鰭鯉種質(zhì)標準草案稿，并且征求了淡水土著魚類保育、種質(zhì)鑒定等研究方向的相關(guān)科研人員的意見，在查閱了近五年來國家或地方有關(guān)魚類種質(zhì)相關(guān)標準，合理設(shè)置標準的框架結(jié)構(gòu)，在聽取各方面意見建議的基礎(chǔ)上確定了標準的技術(shù)內(nèi)容，于2022年6月形成了標準的征求意見稿和編制說明。三、標準編制原

8、則和確定標準主要內(nèi)容的論據(jù)1.標準編制的原則水生生物種質(zhì)資源是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要基礎(chǔ)。世界各國都對其很重視，紛紛出臺規(guī)定和開展相關(guān)領(lǐng)域的研究。我國自上世紀80年代以來開始淡水魚類種質(zhì)資源的研究，先后建立種質(zhì)資源保護區(qū)、種質(zhì)資源庫并開展了水產(chǎn)種質(zhì)資源的調(diào)查，同時開展了相關(guān)養(yǎng)殖魚類種質(zhì)的鑒定技術(shù)、出臺相關(guān)標準參數(shù)，取得了一定的成果。但對野生魚類的種質(zhì)標準的制訂相對滯后，因此本標準編制的主要原則，首先是要填補尖鰭鯉這一物種種質(zhì)標準的空白；其次是本標準要能夠比較全面的反映近年來我國在尖鰭鯉方面的研究成果；最后是標準的可操作性，使用者可以通過本標準所列的各項數(shù)據(jù)，對尖鰭鯉種質(zhì)資源進行檢測和鑒定。本標準

9、的制訂是依托編寫團隊近5年來在尖鰭鯉資源調(diào)查、生活史、生物學(xué)習(xí)性、馴養(yǎng)保種等方面取得的研究成果，在充分查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻資料的基礎(chǔ)上，借鑒和參考國內(nèi)其它魚類種質(zhì)標準的編寫格式和內(nèi)容而制定。本標準嚴格按照 GB/T1.1-2020標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的技術(shù)要求進行了編制起草，包括（1）范圍、（2）規(guī)范性引用文件、（3）術(shù)語和定語、（4）學(xué)名與分類、（5）分布與生態(tài)習(xí)性、（6）主要形態(tài)構(gòu)造特征；（7）生長和繁殖、（8）肌肉生化組分和主要氨基酸組成、（9）遺傳學(xué)特性；（10）規(guī)范性附錄（檢測方法），共10部分。2.確定標準主要內(nèi)容的依據(jù)本標準主要包括四個方面的內(nèi)容，一是尖

10、鰭鯉主要形態(tài)構(gòu)造特征，包括外部形態(tài)描述，鰭式、須、側(cè)線鱗等可數(shù)性狀，全長、體長、體高等可量性狀方面的形態(tài)學(xué)分類依據(jù)和標準；二是生長和繁殖特征，包括體長與體重的關(guān)系、繁殖生物學(xué)基本數(shù)據(jù)等；三是肌肉生化組分和主要氨基酸組成，包括魚肉中粗蛋白、粗脂肪等常規(guī)成分以及氨基酸種類和質(zhì)量；四是遺傳學(xué)特性，包括染色體數(shù)目、核型分析和線粒體COI基因。本標準測定了野生尖鰭鯉染色體數(shù)目、臂數(shù)、核型和DNA條形碼靶基因，以此作為其種質(zhì)判定的依據(jù)。標準內(nèi)容主要依據(jù)編制小組對從萬泉河采集的野生尖鰭鯉的各項測量、檢測與理化分析的結(jié)果，同時也研究、參照和對比了其他學(xué)者對尖鰭鯉的形態(tài)特征、細胞遺傳學(xué)特征等方面的研究成果。2.

11、1物種分類參考相關(guān)魚類分類學(xué)書籍，根據(jù)其外部形態(tài)給予分類。2.2分布與生態(tài)習(xí)性根據(jù)魚類資源調(diào)查的結(jié)果，參考相關(guān)文獻，以及保種馴養(yǎng)過程中的觀察、試驗，初步分析和總結(jié)出其分布與生態(tài)習(xí)性。2.3外部形態(tài)、可數(shù)性狀、可量性狀特征的描述2.3.1外部形態(tài)根據(jù)尖鰭鯉的外部形態(tài)特征，按照魚類外形描述的通用規(guī)則，如外形、口位、須等采用規(guī)范化的語言和格式進行描述。2.3.2可數(shù)性狀和可量性狀根據(jù)GB/T 18654.1-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第1部分：檢驗規(guī)則、GB/T 18654.2-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第2部分：抽樣方法、GB/T 18654.3-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第3部分：性狀測定的相關(guān)

12、要求，采集尖鰭鯉的活體樣本進行鰭式、鱗式、鰓耙數(shù)等可數(shù)性狀的計數(shù)和體長、體高、體寬、眼徑、尾柄長等各項生物學(xué)指標的測量，對數(shù)據(jù)進行分析與統(tǒng)計，獲得相關(guān)統(tǒng)計結(jié)果。2.4生長與繁殖特性根據(jù)GB/T 18654.4-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第4部分：年齡與生長的測定和GB/T 18654.6-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第6部分：繁殖性能的測定的相關(guān)要求，采集尖鰭鯉活體樣本，進行計數(shù)、測量和解剖，對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，獲得最終統(tǒng)計結(jié)果。2.5肌肉生化組分和主要氨基酸組成根據(jù)GBT 18654.10-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第10部分：肌肉營養(yǎng)成分的測定、GBT 18654.11-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)

13、檢驗 第11部分：肌肉中主要氨基酸含量的測定的相關(guān)要求，采集尖鰭鯉活體樣本，進行檢測。2.6細胞遺傳學(xué)特性按照GBT 18654.12-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第12部分：染色體組型分析的方法，參考尖鰭鯉和其它鯉科魚類染色體分析的相關(guān)文獻，采集尖鰭鯉樣本，進行了實驗驗證。2.7分子遺傳學(xué)特性參考尖鰭鯉和其它鯉科魚類有關(guān)線粒體CO基因分析的相關(guān)文獻，根據(jù)本標準給出的方法，采集尖鰭鯉樣本進行了實驗驗證。3.主要編制內(nèi)容分析3.1分類地位尖鰭鯉(Cyprinus acutidorsalis Wang)，隸屬于鯉形目 (Cypriniformes)、鯉科(Cyprinidae)、鯉屬(Cyprinu

14、s)，俗稱“海鯉”或“海鯽”，是我國特有的生活于河流出?？诟浇虻奈ㄒ货庺~。3.2分布與生態(tài)習(xí)性根據(jù)近年來海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院開展的南渡江、昌化江、萬泉河魚類資源調(diào)查和尖鰭鯉及其生境專項調(diào)查，以及派遣專業(yè)技術(shù)人員赴廣西調(diào)查尖鰭鯉資源的相關(guān)結(jié)果，參考相關(guān)文獻，可知在我國尖鰭鯉主要分布在海南萬泉河博鰲段、沙美內(nèi)海、九曲江和廣西欽江茅尾河口。主要棲息于鹽度較低的半咸水區(qū)域的中下層，棲息地底質(zhì)為泥沙底。耐受鹽度的范圍為020，屬河口性咸淡水中型魚類。雜食性，以底棲生物為食。3.3外部形態(tài)特征體側(cè)扁，背部隆起，腹部呈弧形。體色為青灰色，腹部白色，各鰭均呈青灰色，背鰭和尾鰭具黑色邊緣。頭較大。前位口，

15、下頜比上頜稍長，口裂未伸達到眼前緣。有2對須，吻須和頜須各1對，均較短。眼中等大，側(cè)上位。背部隆起，背鰭1個，具鋸齒狀硬棘，起點位于腹鰭起點之后，背鰭展開后可見從頂端至尾部有一個明顯拆線下墜，外形呈旗狀。腹部呈弧形，胸鰭和臀鰭各具鋸齒狀硬棘，胸鰭末端未伸達腹鰭，腹鰭末端距肛門較遠。尾鰭叉形，上下葉幾乎齊平。尖鰭鯉的外部形態(tài)見圖1。圖1 尖鰭鯉外部形態(tài)（成魚）3.4可數(shù)性狀尖鰭鯉的可數(shù)性狀在海南島淡水及河口魚類志、廣東淡水魚類志、廣西淡水魚類志等書中均有描述。本標準在編寫過程中，根據(jù)對大量尖鰭鯉樣本的實測數(shù)據(jù)與上述文獻的描述進行了對比與驗證，實測數(shù)據(jù)均處于上述文獻數(shù)據(jù)的范圍內(nèi)，因此以實測數(shù)據(jù)為基

16、礎(chǔ)，采用文獻中描述的相關(guān)數(shù)據(jù)作為標準的生物學(xué)數(shù)據(jù)。即背鰭IV-1518，胸鰭I-1415，腹鰭I-8，臀鰭-5，尾鰭2021，側(cè)線鱗3233，側(cè)線以上鱗片行數(shù)6行，側(cè)線以下鱗片行數(shù)45行，鰓耙 1922。3.5可量性狀2021年2022年采集萬泉河流域野生尖鰭鯉31尾作為樣本對其的體長、體高、體寬、眼徑、頭長、眼間距、尾柄長、尾柄高等進行了測量，測量公具為游標卡尺（精確度為0.01mm），魚樣規(guī)格為體長215.00mm491.00mm、體重220.00g2250.00g。經(jīng)過測量和計算得出以下數(shù)據(jù)，尖鰭鯉體長為體高的2.960.20倍，為頭長的3.951.00倍，為尾柄長的5.560.43倍，

17、為尾柄高的7.540.53倍，頭長為吻長的4.040.45倍，為眼徑的4.680.46倍，為眼間距的2.430.34倍，尾柄長為尾柄高約為1.360.14倍左右。3.6內(nèi)部構(gòu)造通過解剖尖鰭鯉可很直觀的對其內(nèi)部構(gòu)造進行描述。鰾2室，前室較大，末端尖。脊椎骨3233，腹膜為白色或灰白色。3.7生長與繁殖3.7.1生長從野外搜集野生尖鰭鯉中隨機抽取31尾作為本標準制定的研究對象。體長范圍215.00mm491.00mm、體重220.00g2250.00g，進行了詳細的生物學(xué)測定，用游標卡尺和電子秤測量每個樣本的全長、體長、體重、體高等多項生長指標。對體長與體重的參數(shù)進行線性回歸方程式的構(gòu)建，尖鰭鯉體

18、重（W）與體長(L)關(guān)系式見：W= 0.0349L2.8672，R = 0.9261式中，W-體重，單位為克（g）；L-體長，單位為厘米（cm）；圖2 尖鰭鯉（海南島淡水及河口魚類志 P139）外形測量示意圖3.7.2繁殖自然條件下，雌魚2齡，雄魚1+齡初次性成熟。繁殖期為每年的3月至7月。性腺每年成熟1次，分批產(chǎn)卵，卵具粘性。性成熟尖鰭鯉的性腺見圖3，2+以后的個體相對繁殖力為130粒/g體重245粒/g體重，卵徑為0.81.0mm。 圖3 性成熟尖鰭鯉的性腺（左側(cè)為卵巢，右側(cè)為精巢）3.78肌肉生化組分和主要氨基酸組成尖鰭鯉的肌肉生化組分和主要氨基酸組成在姚東林等所發(fā)表的尖鰭鯉的肌肉基本營

19、養(yǎng)成分和脂肪酸組成的論文中有描述，但其所用的樣本為廣西群體，尖鰭鯉海南群體的肌肉營養(yǎng)分析尚未有論文發(fā)表。本標準在編寫過程中，從萬泉河流域采集野生尖鰭鯉的肌肉檢測其基本營養(yǎng)成分，所測數(shù)據(jù)與廣西群體略有差異。以實測數(shù)據(jù)作為本標準中所用數(shù)據(jù)。經(jīng)檢測野生尖鰭鯉每100g肌肉中的生化組分質(zhì)量為粗蛋白質(zhì)18.3g，粗脂肪1.0g，粗灰分1.2g，水分79.3g。每100g肌肉中的氨基酸總質(zhì)量為13.71g，其中天門冬氨酸的含量為1.41g，異亮氨酸的含量為0.67g，蘇氨酸的含量為0.64g，亮氨酸的含量為1.21g，絲氨酸的含量為0.54g，酪氨酸的含量為0.50g，谷氨酸的含量為2.06g，苯丙氨酸的

20、含量為0.70g，甘氨酸的含量為0.63g，賴氨酸的含量為1.37g，丙氨酸的含量為0.82g，組氨酸的含量為0.44g，胱氨酸的含量為0.16g，精氨酸的含量為0.88g，纈氨酸的含量為0.76g，脯氨酸的含量為0.52g，蛋氨酸的含量為0.39g。粗蛋白質(zhì)/g粗脂肪/g粗灰分/g水分/g3.8細胞遺傳學(xué)特征染色體核型分析參考劉良國等的尖鰭鯉的染色體組型研究制備尖鰭鯉的染色體標本。向?qū)嶒烎~腹腔內(nèi)注射PHA溶液，解剖前2h注射秋水仙素，取樣，向細胞懸液中加入0.075mol/L KCl溶液，卡諾氏固定液固定，火焰干燥制片，Giemsa染色，蒸餾水沖洗，晾干后放置于玻片盒中室溫保存, 用于后續(xù)研

21、究。染色體標本經(jīng)Giemsa染液染色后, 置于顯微鏡下進行觀察和拍照. 選取來自不同個體的115個分散良好的中期分裂相, 在顯微鏡下進行計數(shù), 經(jīng)統(tǒng)計分析后確定尖鰭鯉二倍體的染色體數(shù)目。選取多個數(shù)目完整、形態(tài)清晰、分散良好、長度適中、著絲點清楚、兩條單體適度分開的分裂相進行顯微攝相和測量. 計算其相對長度和臂比等, 并按LEVAN提出的標準進行分類、配對和核型圖。3.8.1二倍體染色體數(shù)目對尖鰭鯉115個分散良好的中期分裂進行觀察和計數(shù)結(jié)果表明 （表1），尖鰭鯉中72.2%的中期分裂相的二倍體染色體數(shù)目為100，由此可以判定尖鰭鯉二倍體染色體數(shù)目為100。表1 尖鰭鯉二倍體染色體計數(shù)結(jié)果染色體

22、數(shù)目(2n)100合計分裂相數(shù)目33354410830100所占百分比（%）2.62.62.64.33.53.58.772.201003.8.2染色體核型分析選取形態(tài)清晰，著絲點易辨的中期分裂相進行觀察、測量和統(tǒng)計分析，獲得尖鰭鯉染色體相對長度和臂比，結(jié)果見表2，尖鰭鯉染色體組由11對中部著絲粒染色體，15對亞中部著絲粒染色體，8對亞端部著絲粒染色體和16對端部著絲粒染色體構(gòu)成，其核型公式為2n=22m+30sm+16st+32t，染色體臂數(shù)(NF)為152。根據(jù)測量結(jié)果并結(jié)合形態(tài)相似性分析, 構(gòu)建了尖鰭鯉的染色體核型 (圖4)。表2 尖鰭鯉的相對長度和臂比編號相對長度臂比類型編號相對長度臂比

23、類型12.720.171.430.28M261.620.112.680.42SM22.580.131.440.35M272.360.163.950.42ST32.400.031.310.22M282.110.054.411.01ST42.300.051.660.09M292.010.054.020.94ST52.220.051.480.27M301.930.025.342.28ST62.130.051.380.13M311.860.095.992.05ST72.050.031.520.31M321.800.074.851.30ST82.000.021.380.22M331.630.084.41

24、1.72ST91.960.041.410.20M341.380.054.530.77ST101.880.051.390.13M352.190.090T111.740.061.450.18M362.000.020T123.190.042.450.48SM371.970.050T133.000.032.110.16SM381.890.030T142.800.032.720.48SM391.850.040T152.650.082.400.37SM401.820.060T162.460.082.310.42SM411.780.040T172.290.052.030.28SM421.730.030T18

25、2.220.022.490.43SM431.660.070T192.130.032.430.54SM441.600.050T202.070.031.990.13SM451.550.030T212.020.042.300.43SM461.510.030T221.970.062.130.22SM471.470.040T231.940.082.070.27SM481.410.040T241.860.092.320.50SM491.370.050T251.750.082.190.47SM501.170.100T 圖4 尖鰭鯉中期分裂相(a)及染色體核型(b)3.9分子遺傳學(xué)特征DNA條形碼分析（CO基

26、因）尖鰭鯉線粒體CO基因序列分析方法3.9.1 DNA 提取 取魚鰭組織，盡量剪碎，用試劑盒的方法提取基因組DNA，溶解后-20保存?zhèn)溆谩?.9.2 PCR擴增上游引物：5-CACAAAGACATTGGCACCCT-3；下游引物：5-AGTCAGCTGAAKACTTTTAC-3。擴增反應(yīng)條件：反應(yīng)體系為50L，其中Takara公司Premix Taq 25L，10mol/L的引物2L，DNA模板50ng，無菌ddH2O補足50L。擴增條件為：94變性3min，1個循環(huán)，94變性30s，60退火30 s，72延伸45s，35個循環(huán)；72延伸10min，4保存。3.9.3序列測定 PCR產(chǎn)物經(jīng)回收

27、純化后，在DNA測序儀上測序；為保證測序的可靠性和準確性，采用雙向測序，并進行人工核對、校正。3.9.4結(jié)果計算序列歧異度(D)按下式計算D=序列內(nèi)變異堿基數(shù)/序列堿基總數(shù)全序列共740個堿基，堿基組成比例為A占26.5%；C占28.1%；G占17.4%；T占28.0%。經(jīng)檢測尖鰭鯉種內(nèi)的序列歧異度D0.5%，與種間的同源序列差異極顯著（p0.01），尖鰭鯉DNA條形碼序列如下：1 AGCCTCCTCATTCGGGCCGAACTTAGCCAACCCGGGTCGCTTCTAGGTGATGACCAAATT 6061 TATAACGTTATCGTCACTGCCCACGCCTTTGTAATAATTTTCTTTATAGTAATGCCTATC 120121 CTTATTGGAGGATTTGGAAACTGACTTGTACCACTAATAATCGGAGCCCCAGACATAGCA 180181 TTCCCACGAA