1、HPLC法測(cè)定復(fù)方靈芝顆粒中五味子甲素的含量【關(guān)鍵詞】復(fù)方靈芝顆粒摘要:目的建立復(fù)方靈芝顆粒中五味子甲素含量測(cè)定的方法。方法用高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件為：18柱，(5,2504.6)，流動(dòng)相為甲醇水體積比7525，檢測(cè)波長(zhǎng)為254n。結(jié)果五味子甲素在0.16086.432g范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系r=09996，平均加樣回收率為99.27，rsd=1.02%n6。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，建立的定量方法可用于復(fù)方靈芝顆粒質(zhì)量的控制。關(guān)鍵詞:hpl；復(fù)方靈芝顆粒；五味子甲素abstrat:bjietivetestablishaethdfrthententdeterinatinfdex

2、yshizandrininplexlingzhigranule.ethdshplasperfrednands-18lun(5,2504.6)usingethanlater(7525)asthebilephaseunderthedetetinavelengthf254n.resultsthelinearrangefdexyshizandrinas0.1608-6.432g.theeanreveryas99.27ithrsd1.02n6.nlusinthisethdissiple,reprduibleandauratefrthententdeterinatinfdexyshizandrininpl

3、exlingzhigranule.keyrds:hpl；plexlingzhigranule；dexyshizandrin復(fù)方靈芝顆粒具有保護(hù)肝臟降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶和退黃作用，用于急性傳染性黃疸肝炎，遷延性肝炎，慢性肝炎，單項(xiàng)谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高等癥，其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)2冊(cè)，該藥由靈芝、柴胡、五味子和郁金4味藥材組成，五味子為方中主藥之一，為了進(jìn)步及控制復(fù)方靈芝顆粒的質(zhì)量，本文對(duì)五味子中的五味子甲素進(jìn)展含量測(cè)定，建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。1儀器和試藥日本島津l-10athpl儀；n2000色譜工作站。甲醇色譜純，erk公司出品；雙蒸餾水自制，其他試劑為分析純。五味子甲素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照

4、品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所供含量測(cè)定用，批號(hào)為110764-200107，復(fù)方靈芝顆粒自制，批號(hào)：20220201、20220202、20220203、20220204。2方法與結(jié)果2.1色譜條件的選擇色譜柱:inertsil(18,5,2504.6)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254n；流動(dòng)相：甲醇-水7525,流速：1lin-1；進(jìn)樣量10l；柱溫：30。取一定濃度樣品進(jìn)展測(cè)定，此條件下所測(cè)五味子甲素與樣品中其他組分色譜峰完全別離，色譜峰形對(duì)稱而鋒利拖尾因子t1.00，按五味子甲素峰計(jì)算，理論板數(shù)不小于2000。2.2陰性對(duì)照試驗(yàn)取處方量以一樣工藝制備的陰性對(duì)照缺五味子，按上述方法測(cè)定，結(jié)果為：陰性對(duì)照

5、色譜圖中在與五味子甲素對(duì)照品色譜圖相對(duì)應(yīng)的保存時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，結(jié)果說(shuō)明陰性對(duì)照含靈芝、柴胡和郁金三味藥材用一樣制備方法下提取的成分在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)吸收，故其他成分其他對(duì)五味子甲素測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。2.3樣品溶液制備2.3.1對(duì)照品溶液的制備取五味子甲素對(duì)照品1005g，精細(xì)稱定，置25l量瓶中，加甲醇溶解后稀釋至刻度,搖勻，精細(xì)量取1l，置10l量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液(40.2gl-1)。2.3.2供試品溶液的制備取本品約4g，研細(xì)，精細(xì)稱定，置100l錐形瓶中，加氯仿約40l，超聲處理30in，濾過(guò)，殘?jiān)勇确?0l，超聲處理30in，濾過(guò)，合并兩次濾液，將容器和濾紙屢次

6、洗滌液并入濾液中，揮干,殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移置10l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.4線性關(guān)系考察精細(xì)汲取五味子甲素對(duì)照品貯備液(0.402gl-1)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0l，置5l量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別取上述對(duì)照品溶液各10l進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積(a)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量()為橫坐標(biāo)，進(jìn)展線性回歸，得回歸方程a=119473359047，r=0.9996。其線性范圍為0.4026.432g，結(jié)果說(shuō)明在此范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.5精細(xì)度試驗(yàn)取上述對(duì)照品溶液10l，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，其rsd=0.75%n

7、=6。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述對(duì)照品溶液10l，分別在0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣測(cè)定，其rsd=0.98%n=6,說(shuō)明樣品在12h以內(nèi)是穩(wěn)定的。2.7重復(fù)性試驗(yàn)取供試品批號(hào)：202202016份，每份約4g，按“23項(xiàng)下方法制備并測(cè)定，測(cè)出五味子甲素平均含量為15.3gg-1，rsd=1.21%n=6。2.8加樣回收試驗(yàn)取含量供試品批號(hào)：20220201，含量15.3gg-1，參加定量的五味子甲素對(duì)照品溶液，依樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，計(jì)算其回收率=99.27%，rsd=1.02%n=6，結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率測(cè)定結(jié)果略2.9樣品測(cè)定分別汲取對(duì)照品和供試品溶液各10l，按上述方法測(cè)定供試品中五

8、味子甲素含量，其結(jié)果n=3為：批號(hào)20220201為15.3gg-1、批號(hào)20220202為14.2gg-1、批號(hào)20220203為16.5gg-1和批號(hào)20220204為13.7gg-1。3討論3.1本品由靈芝、五味子等4味藥材組成，曾經(jīng)對(duì)靈芝所含腺苷等成分進(jìn)展測(cè)定1，但其含量較低低于0.01%，干擾嚴(yán)重，不宜作為指標(biāo)成分；結(jié)果選用五味子中的五味子甲素作為定量指標(biāo)，用hpl法測(cè)定其含量，結(jié)果陰性無(wú)干擾，且方法穩(wěn)定可靠，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好。3.2測(cè)定時(shí)應(yīng)注意掌握好樣品前處理，曾經(jīng)采用索氏提取2，加熱回流，超聲提取對(duì)樣品進(jìn)展處理，結(jié)果以超聲提取兩次較為完全，操作簡(jiǎn)單快捷。3.3經(jīng)過(guò)比擬不同比例的甲醇水6535、7525、8515，乙腈-水-冰醋酸70:30:0.13等流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)本品中五味子甲素與雜質(zhì)的別離度與保存時(shí)間，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相甲醇水7525能保證所測(cè)本品與雜峰完全別離別離度r1.5，色譜峰形對(duì)稱而鋒利拖尾因子t1.00。參考文獻(xiàn):1江英橋.靈芝膠囊質(zhì)量控制方法研究j.西北藥學(xué)雜志，