1、上課好單克隆抗體上課好單克隆抗體植物細胞A植物細胞B去掉細胞壁去掉細胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細胞壁雜種細胞細胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株溫故知新:植物體細胞雜交過程植物細胞A植物細胞B去掉細胞壁去掉細胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B一、動物細胞融合1.概念： 動物細胞融合（cell fusion）也成細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。 融合和形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳物質(zhì)的單核細胞，稱為雜交細胞。2、原理：細胞膜的流動性一、動物細胞融合1.概念： 動物細胞融合（ce3.融合過程：誘導融合的方法？3.融合過程：誘導融合的方法？誘導方法：物理方

2、法：化學法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇（PEG)誘導方法：物理方法：化學法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇 為什么滅活的 病毒能作誘導劑？3.融合過程： 為什么滅活的 病毒能作誘導劑？3.融合過程：滅活病毒誘導細胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。 滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。P52生物技術資料卡滅活病毒誘導細胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白4.意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、

3、動植物之間）成為可能。5.應用：最重要的用途是制備單克隆抗體4.意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（植物細胞雜交與動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理使用的酶誘導方法主要用途細胞膜的流動性細胞的全能性細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶 物理方法（離心、振蕩、電激） 化學方法（PEG）物理、化學方法滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導細胞融合植物細胞雜交與動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細思考？1. 抗體由何種細胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2. 抗體的化學本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點？ 主要分布在哪里？3

4、. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體思考？1. 抗體由何種細胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？(三)單克隆抗體上課好單克隆抗體思考？1. 抗體由何種細胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2. 抗體的化學本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點？ 主要分布在哪里？3. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體思考？1. 抗體由何種細胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？(三)單克隆抗體抗原決定簇：抗原表面具有的某些特定的化學基團，能決定抗原特異性，是免疫細胞識別抗原的重要依據(jù)。各種抗原的決定簇數(shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種?？乖瓫Q定簇：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點： 產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效

5、應B細胞動物體內(nèi)多種抗體抗原 抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點：多種效 血清抗體（也稱多克隆抗體） 由血清中提取的抗體是由不同淋巴細胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達百萬種以上，稱為多克隆抗體。特點： 產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應不夠靈敏?？乖患兛贵w不純 抗原 動物體內(nèi)刺激效應B 抗體血清抗體（也稱多克隆抗體）抗原不純抗體不純 抗原 每一個B淋巴細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一，特異性強的抗體。 如果利用單個B淋巴細胞進行無性繁殖（克?。?，形成細胞群，這樣的細胞群就有可能產(chǎn)生出化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體單克隆抗體。問題： 怎樣獲得化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體呢？ 每一個B淋巴細

6、胞只分泌一種化學性質(zhì)單一，特異性強的抗在體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細胞能無限增殖形成細胞群嗎？什么樣的細胞能夠在體外無限增殖呢？ 腫瘤細胞！在體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細胞能無限增殖形成細胞群嗎？單克隆抗體的制備單克隆抗體:單個細胞克隆產(chǎn)生的化學 性質(zhì)單一特異性強的抗體利用效應B細胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用細胞融合的技術將兩種細胞融合獲得雜交瘤細胞利用動物細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)雜交瘤細胞設計方案：單克隆抗體的制備單克隆抗體:單個細胞克隆產(chǎn)生的化學 性質(zhì)單如何誘導融合？ 加入聚乙二醇（PEG）如何得到B淋巴細胞？3.制備單克隆抗體的過程如何誘導融合？ 細胞兩兩融合后，有哪些

7、類型？B-B B-瘤(雜交瘤細胞) 瘤-瘤 如何篩選出雜交瘤細胞？ 首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞細胞兩兩融合后，有哪些類型？B-B 如何篩選出雜交細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。 你想到篩選雜交瘤細胞的方案了么？ 小資料：細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷 在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的

8、雜種細胞因為可以利用淋巴細胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。 在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細胞！上課好單克隆抗體陽性孔方法抗原-抗體雜交法 在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。陽性孔方法抗原-抗體雜交法 在單克隆抗體制備過程中如何得到大量的單克隆抗體？ 體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體 化學性質(zhì)單一、特異性強如何得到大量的單克隆抗體？ 骨髓瘤細胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B淋巴細胞（選擇培養(yǎng)基）（抗體檢測）細胞融合雜交細胞骨髓瘤細胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備1、（只考慮兩兩融合）融合細胞幾種類型？2

9、、本過程中進行了兩次篩選，目的分別是什 么？第1次篩選要淘汰哪些細胞？3、雜交瘤細胞有何特點？4、本過程利用的哪些技術？思考以下問題：思考以下問題：2、單克隆抗體的優(yōu)點特異性強、靈敏度高2、單克隆抗體的優(yōu)點特異性強、靈敏度高單克隆抗體篩選雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內(nèi)細胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細胞誘導細胞融合特異性雜交瘤細胞雜交瘤細胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術動物細胞培養(yǎng)技術單克隆抗體的制備過程：特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖特點：特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原免疫單克隆抗體篩選雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內(nèi)篩選骨髓瘤誘導細胞3、單克隆抗體的應用（1）作為診斷試劑最廣泛應用準確、高效