1、LC-10AT島津高效液相色譜儀的操作流程流動相應(yīng)使用HPLC級別有機試劑，均須經(jīng)0.45微米濾紙過濾，除去溶液中氣泡避免影響出峰，以及避免氧氣與樣品的反應(yīng)。按照標準操作規(guī)范（SOR）放置流動相以及連接合適的色譜柱，打開儀器并連接電腦,雙擊啟動軟件豆皿八心如下:在線分析液相方法的創(chuàng)建：依據(jù)SOR創(chuàng)建方法程序(File-newmethodfile)，方法設(shè)置參數(shù)為檢測波長(DetectorAWavelengthChi:)、洗脫時間(LcStopTime)、洗脫程序(Pump&LcTimeProg)、柱壓限度(Advanced-Pump)。|InstruneritParanetersViewNor

2、mal心曲3門匚詞|miil兩IIef.acterAWavelengthChi：ftaT.relyngthCti2：Jn.lTitia:tiu1口rrmLiminmLitiinSimpleSettingsJJCTirhsFrog.AutoFurgeTimePrcgi_:=jtiApplytoall金r*rnitui*1nn+1mUJStQpTim已；Funipr,_|jjripAFlow:PumpIFlow:檢測波長：檢測器一般為紫外分光檢測器，其檢測波長(DetectorAWavelengthChi:范圍為200400nm。檢測時間：初次創(chuàng)建方法，因保留時間不確定，檢測時間(LcStopTi

3、me)應(yīng)設(shè)置長一些。若在序列、甘運行之后，方法時間設(shè)置不夠，可延長方法時間(changeanalsistime)，請注意此方法并未更改方法文件，故下一針的方法時間還是與之前一樣，應(yīng)當停止序列，更改檢測時間并保存后才生效。洗脫程序：洗脫程序分為等度洗脫與梯度洗脫，前者為恒定流速(一般為1.0ml/min)下，固定組分比例洗脫；后者為恒定流速(一般為1.0ml/min)下，組分比例隨時間變化的洗脫。等度洗脫設(shè)置：Pump-Mode-Isocraticflow項下A，B泵流速(即A，B泵組分)的設(shè)置。梯度洗脫的設(shè)置較等度洗脫多了一個洗脫程序(LcTimeProg)，以中藥材三七的液相方法為例：Tim

4、e0121260A(%)19B(%)8119369164置;Pump-Mode-binarygraient項下流速（一般設(shè)置為l.Oml/min）和方法初始B組分的設(shè)bInstrumentParametBrsViewNormal直加曲亡記|SimpleSettingsLJCTimePrAutoPurgeTimeFrn=iinLIZStepTime:1-1-l-11-1minApplytoallarnmui十innt1rnpFunip呃亞:|$iiL：it-7gi_adient.17DetectorAWaveleRgthCM：103nmWavslsiLg+hCh2:(254EniTime:Ko.

5、0minTotalFlow；TuirijiECone.:|1-l-11-11-1(Tll/fTliILTo%LcTimeProg項下設(shè)置時間以及相對應(yīng)的組分，A組分為（100%-B組分），故僅設(shè)置B組分即可。此外，連續(xù)進樣中，應(yīng)在方法結(jié)束時增加平衡時間（6070）。柱壓限度：柱壓限度（Advanced-pump）的設(shè)置是為保護色譜柱，壓力過大會導(dǎo)致色譜柱填料的塌陷，進而影響色譜柱的柱效。柱壓限度設(shè)置為最大值30MPa，最低值0MPa：JInshumentParametersViewNmm日I|Adv日nMDataA.cqui5itionLCTimeFrog：.PspDetectorAContr

6、oilerA.utosaniplerAutoFlTressweLimits(Pijjtiji扎B)Manimuni：|30.0MFaMimmuni：|o?0MFa方法創(chuàng)建完成之后，以樣品命名并保存，方便下次調(diào)用。序列表的創(chuàng)建表的一般操作右鍵序列表可對表內(nèi)容進行：復(fù)制、粘貼、剪切、填充、序列填充、插入行、增加行。進樣程序的編輯：在線分析中打開序列表，右鍵選擇表樣式(tablestyle)，除去一些無關(guān)緊要的參數(shù)，僅留下進樣位置(Vial#)、樣品名稱(SampleName)、方法文件(methodfile)、數(shù)據(jù)文件(datafile)、進樣體積(injet.Volume)。依次填入樣品信息，調(diào)

7、用創(chuàng)建的方法，設(shè)置保存位置(數(shù)據(jù)文件)。在走完樣品序列之后，設(shè)置方法沖洗保存色譜柱時，并不需要進樣，進樣位置可設(shè)置為-1,這樣會跳過進樣按照方法走。操作注意使用前，應(yīng)先用5%甲醇水1.0ml/min沖洗40min。一般250cm反相色譜柱平衡柱體積為22ml,加上管道，沖洗體積最低應(yīng)為30ml。(本文所述色譜柱均為反相色譜柱，不再重復(fù)。)而后更換流動相，運行方法，等待系統(tǒng)達到平衡即可運行序列。系統(tǒng)平衡：基線壓力線均應(yīng)平滑，基線噪音波動范圍在0.05之間，各泵的壓力變化應(yīng)在5bar以內(nèi)。連續(xù)兩針進樣峰面積以及出峰時間變化不大。色譜柱的維護實驗完成后，用5%甲醇水沖洗40ml,而后用純甲醇沖洗40ml。若當天不能及時沖洗色譜柱，可設(shè)置方法讓Lc系統(tǒng)以0.1ml/min低流速沖過夜，