1、鉛對(duì)洋蔥根尖細(xì)胞分裂及其染色體畸變影響第1頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三（1）了解微核發(fā)生的機(jī)制（2）學(xué)會(huì)鉛誘變?nèi)旧w畸變的各種類型，為進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)和誘變育種提供細(xì)胞學(xué)方面的依據(jù)。（3）初步掌握實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，數(shù)據(jù)整理及結(jié)果分析和論文撰寫等技能。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模旱?頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三實(shí)驗(yàn)原理： 在環(huán)境污染物中存在著許多具有誘變活性的物質(zhì)，能直接或間接的誘發(fā)生基因突變，染色體畸變等細(xì)胞遺傳損傷。微核也叫衛(wèi)星核，是染色體畸變?cè)陂g期細(xì)胞中的一種表現(xiàn)形式。在臨床骨髓和外周血檢中被稱為豪厄爾-若利小體。 細(xì)胞染色體發(fā)生斷裂后，細(xì)胞進(jìn)入下一次分裂

2、時(shí)，染色體片段不能隨有絲分裂進(jìn)入子細(xì)胞，在細(xì)胞質(zhì)中形成直徑在主核的1/3以下，嗜色與主核一致，完全與主核分開的圓形或杏仁狀結(jié)構(gòu)，稱為微核。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣，也具有合成DNA的能力。 近年來(lái)，由于自然因素和人類活動(dòng)影響，如農(nóng)業(yè)生中施用含Pb的肥料，灌溉含Pb的污水、污泥農(nóng)用，農(nóng)田土壤Pb污染日益嚴(yán)重，農(nóng)作物pb毒害現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。農(nóng)作物受到Pb污染后，不僅影響其產(chǎn)量和質(zhì)量，更為嚴(yán)重的是Pb經(jīng)食物鏈進(jìn)入人體，并在人體內(nèi)富集，危害人類健康。因此，環(huán)境Pb污染問(wèn)題不容忽視，Pb毒害的研究越來(lái)越引起人們的廣泛重視。 據(jù)有關(guān)研究表明，cd、Pb可引起光合強(qiáng)度下降、保護(hù)性酶發(fā)生變化、體

3、內(nèi)營(yíng)養(yǎng)元素失調(diào)等。植物細(xì)胞微核、染色體畸變、有絲分裂指數(shù)等細(xì)胞遺傳學(xué)指標(biāo)被公認(rèn)為是評(píng)價(jià)環(huán)境化學(xué)物質(zhì)遺傳性的有效方法之一。對(duì)大麥、洋蔥、蠶豆等根尖細(xì)胞的觀察結(jié)果表明，cd、Pb等元素可引起根尖細(xì)胞分裂出現(xiàn)障礙或不正常分裂，表現(xiàn)為細(xì)胞分裂周期延長(zhǎng)，產(chǎn)生染色體畸變。因此在此基礎(chǔ)上，我們研究Pb對(duì)小麥根尖細(xì)胞分裂和染色體畸變的影響第3頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡 剪刀 載玻片 蓋玻片 吸水紙 紗布 培養(yǎng)皿 滴管 刀片 解剖針 鑷子 燒杯（5個(gè)）第4頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三實(shí)驗(yàn)材料：在學(xué)校附近農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)買取五個(gè)洋蔥，用蒸餾水培

4、養(yǎng)至不定根長(zhǎng)至11.5cm時(shí)。實(shí)驗(yàn)試劑：蒸餾水 1mol/L HCL Carnoy固定液 （冰乙酸：無(wú)水乙醇=1:3） 70%乙醇 改良品紅染液 氯化鉛（0.01 ug/ml 0.1 ug/ml 1 ug/ml 5 ug/ml 10 ug/ml）第5頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)組取制備好的實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行染毒處理，選擇4個(gè)洋蔥，用配好的不同濃度氯化鉛染毒（浸沒(méi)根尖即可）處理12d。然后取出根尖，用蒸餾水沖洗，并移至蒸餾水中培養(yǎng)2226h。材料固定：取恢復(fù)培養(yǎng)結(jié)束的洋蔥，切下0.51cm根尖，置于Carnoy固定液中1214小時(shí)。固定后的根如果不立即制片，

5、可轉(zhuǎn)入70%乙醇中置于4冰箱中保存。材料解離：將固定后的根尖材料用蒸餾水浸洗2次，然后用0.1mol/L的鹽酸在60恒溫水浴中解離1520min，幼根軟化即可。制片：將解離后的根尖材料用蒸餾水漂洗數(shù)次，取出根尖置于載玻片上，叢根冠起切取1105mm，用解剖針搗碎，加1或2滴改良品紅染液，染色1015min后，蓋上蓋玻片輕壓。鏡檢：在低倍鏡下找到分生區(qū)細(xì)胞分散均勻，分裂相對(duì)較多的部位，再轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。觀察微核，及細(xì)胞分裂異變的各種形態(tài)。第6頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三對(duì)照組：材料固定：，切下0.51cm根尖，置于Carnoy固定液中1214小時(shí)。固定后的根如果不立即

6、制片，可轉(zhuǎn)入70%乙醇中置于4冰箱中保存。材料解離：將固定后的根尖材料用蒸餾水浸洗2次，然后用1mol/L的鹽酸在60恒溫水浴中解離1520min，幼根軟化即可。制片：將解離后的根尖材料用蒸餾水漂洗數(shù)次，取出根尖置于載玻片上，叢根冠起切取1105mm，用解剖針搗碎，加1或2滴改良品紅染液，染色1015min后，蓋上蓋玻片輕壓。鏡檢：在低倍鏡下找到分生區(qū)細(xì)胞分散均勻，分裂相對(duì)較多的部位，再轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。觀察微核，及細(xì)胞分裂異變的各種形態(tài)。第7頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三實(shí)驗(yàn)結(jié)果：對(duì)照組： 有絲分裂中期 有絲分裂后期 第8頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)2

7、7分，星期三有絲分裂后期第9頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三實(shí)驗(yàn)組： 0.1 ug/ml 氯化鉛1 ug/ml 氯化鉛第10頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三 5ug/ml氯化鉛100ug/ml氯化鉛第11頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三500ug/ml氯化鉛第12頁(yè)，共14頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)27分，星期三結(jié)果分析：實(shí)驗(yàn)結(jié)果不太明顯，沒(méi)有在顯微鏡下看見明顯的染色體畸變，可能是濃度梯度設(shè)置的不好，也可能是氯化鉛對(duì)染色體畸變影響不明顯。實(shí)驗(yàn)感悟：此次實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)前做的準(zhǔn)備還算充分，但是在實(shí)驗(yàn)中制片染色不是很好，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象不足明顯，但沒(méi)一位組員都不放棄，團(tuán)結(jié)