1、維藥白刺總黃酮對亞急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究【摘要】目的考察唐古特白刺果總黃酮對衰老模型小鼠氧化才能的影響。方法用D-半乳糖制備衰老模型小鼠，以酶標法測定小鼠血清和肝組織中DA,SD,GSH-PX指標的變化。結(jié)果白刺果中總黃酮能顯著降低衰老小鼠血清和肝組織DA程度，同時可進步SD和GSH-PX活力程度。結(jié)論唐古特白刺果總黃酮具有抗氧化作用。【關(guān)鍵詞】唐古特白刺總黃酮抗氧化ResearhntheAnti-xidativeEffetfTtalFlavnidsfUighurediinesNitrariatangutrunBbr.inSubauteAgingdelieAbstrat：bjetiv

2、eTstudytheeffetfanti-xidativeinsubauteagingdelieithttalflavnidsfUighurediinesNitrariatangutrunBbr.ethdsTheagedieereinduedbyipD(+)-galatsefr8eeks.Deterinedalndialdehyde(DA)superxidedisutase(SD),glutathineperxidase(GSH-PX)intheiesseruandHeparithdel680irplateSpetrphteter.ResultsTtalflavnidsfUighurediin

3、esNitrariatangutrunBbr.ntnlyhadsignifiantinhibitineffetnDAlevelsbutalsinreasedtheratifSDativityandGSH-PXativity.nlusinThettalflavnidsfUighurediinesNitrariatangutrunBbr.hasgdanti-xidativeeffet.Keyrds：NitrariatangutruBbr;Ttalflavnids;Anti-xidativeeffetD-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型因其衰老變化明顯,模型穩(wěn)定,在抗衰老研究中被廣泛應(yīng)用1。一般認為,D-

4、半乳糖引起的代謝紊亂使機體過氧化反響增強是其致老化反響的重要因素。唐古特白刺NitrariatangutrunBbr.為中國特有種,是蒺藜科典型的旱生荒漠植物，具有耐干旱，耐鹽堿，能適應(yīng)高溫低寒的特點。唐古特白刺資源豐富，分布廣泛，是新疆防風(fēng)固沙的優(yōu)良野生樹種2。唐古特白刺的果實在新疆作為維吾爾民間藥物入藥，具有健脾胃、調(diào)經(jīng)活血、降壓等作用。常用于治療消化不良、月經(jīng)不調(diào)和高血壓、頭暈等疾病，臨床證明療效確切，無毒副作用。近年來對唐古特白刺的研究報導(dǎo)很多，但對其藥理作用的研究甚少，僅見有關(guān)白刺果實有降血脂和抗氧化作用的報道3，果實中化學(xué)成分繁多復(fù)雜，到底哪種成分起效尚不清楚，因此，為了深化研究民

5、族藥，并為維藥白刺的充分開發(fā)利用提供科學(xué)根據(jù)，本文研究了維藥白刺總黃酮對衰老模型小鼠氧化才能的影響。現(xiàn)報道如下。1材料與方法1.1藥品1.1.1白刺果總黃酮提取與制備唐古特白刺果石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院閻平教授鑒定為NitrariatangutrunBbr.，采自新疆北部地區(qū)。樣品采集后自然晾干，機械粉碎，過20目篩后備用。稱取白刺果粗粉適量，置圓低燒瓶中，以料液比17參加80的乙醇，水浴加熱回流2h，重復(fù)提取4次，合并提取液并濃縮至浸膏。用堿溶解酸沉淀法制得白刺總黃酮樣品。1.1.2陽性對照藥維生素E膠丸上海中洋海洋生物工程股份，批號050902。1.1.3亞急性衰老模型藥D+半乳糖國藥集團化

6、學(xué)試劑，批號F20220711。1.2試劑與儀器SD試劑盒南京建成生物工程研究所，批號20221108；DA試劑盒南京建成生物工程研究所，批號20221221；GSH-PX試劑盒南京建成生物工程研究所，批號20221111；蛋白定量測試盒南京建成生物工程研究所,批號20221220；del680酶標儀美國BI-RAD公司；TDL-5000低溫冷凍離心機上海安亭科學(xué)儀器廠；PufferHubbard超低溫冰箱美國HARRIS公司；X-80A旋渦混合器上海精科實驗；電熱恒溫水浴鍋北京泰克儀器；TN型托盤式扭力天平上海第二天平儀器廠。1.3動物分組與處理安康昆明小鼠96只(石河子大學(xué)實驗動物中心提供

7、)，體重(255)g，雌()雄()各半，喂養(yǎng)普通飼料適應(yīng)1周后,空腹稱重，眼底靜脈采血測血清DA后隨機分為6組，每組16只，各半。組間體重、血清DA程度無明顯差異。6組分別是正常組腹腔注射(ip)生理鹽水+灌胃(ig)蒸餾水，衰老模型組ipD+半乳糖200g/kg+ig蒸餾水，低劑量組ipD+半乳糖200g/kg+ig白刺果總黃酮50g/kg，中劑量組ipD+半乳糖200g/kg+ig白刺果總黃酮100g/kg，高劑量組ipD+半乳糖200g/kg+ig白刺果總黃酮200g/kg，陽性對照組ipD+半乳糖200g/kg+ig維生素E100g/kg。1.4標本采集本實驗用昆明小鼠ipD+半乳糖造

8、成衰老模型，ipD+半乳糖后6周，模型組小鼠血清DA高于正常對照組，但無統(tǒng)計學(xué)意義；當(dāng)時間增至8周后，血清DA明顯高于正常，兩組數(shù)據(jù)比擬有顯著意義，故實驗時間定為8周。8周后取材，所有小鼠于取材前1d停飼料，并禁食12h，乙醚麻醉，眼底靜脈取血，頸椎脫離處死，取肝臟，制備血清及肝勻漿，儲存于-20備用。1.5統(tǒng)計方法采用SPSS12.0軟件處理，實驗數(shù)據(jù)以s表示，多組間比擬用方差分析，兩均數(shù)比擬用t檢驗。2結(jié)果2.1白刺果總黃酮對實驗性衰老模型小鼠肝系數(shù)的影響小鼠造模8周后,各給藥組與模型和正常對照組的肝系數(shù)雖有差異，但各組之間比擬,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析無顯著性差異(P0.05)。見表1。表1白刺果總

9、黃酮對實驗性衰老模型小鼠肝系數(shù)的影響略2.2白刺果總黃酮對衰老模型小鼠血清和肝組織脂質(zhì)過氧化物DA含量的影響DA常常可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷的程度。血清DA測定數(shù)據(jù)顯示：模型組血清脂質(zhì)過氧化物DA含量比正常飼料組有明顯增高(P0.001)，陽性對照組及高、中劑量組均能明顯降低血清DA程度，與模型組比擬均有顯著性意義(P0.01)；低劑量組血清DA與模型組比擬有所降低，但無統(tǒng)計學(xué)意義P0.05；肝組織DA測定數(shù)據(jù)顯示：模型組肝組織DA含量造模后比正常飼料組DA有極明顯增高(P0.001)，而陽性對照組、高劑量組、中、低劑量組均能明顯降低肝組織DA程度，與模型組比擬均有顯

10、著意義(P0.01)。見表2。表2白刺果提取物對實驗性高脂模型大鼠DA的影響略2.3白刺果總黃酮對衰老模型小鼠血清和肝組織超氧化物歧化酶SD含量的影響SD對機體的氧化和抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用。血清SD測定數(shù)據(jù)顯示,模型組血清SD含量造模后比正常飼料組有極明顯降低(P0.001),陽性對照組及高、中劑量組均能明顯升高血清SD活力程度，與模型組比擬均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，低劑量組血清SD與模型組比擬有所升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義P0.05；肝組織SD測定數(shù)據(jù)顯示：模型組肝組織SD含量造模后比正常飼料組SD有明顯增高(P0.001),而陽性對照組、高劑量組均能明顯升高肝組織SD活力程度,與

11、模型組比擬均有顯著意義(P0.01)，中劑量組雖沒有陽性對照組作用強，但與模型組比擬具有顯著性差異(P0.05)，低劑量組作用與模型組比擬，雖有所升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。表3白刺果總黃酮對衰老模型小鼠SD活力的影響略2.4白刺果總黃酮對衰老模型小鼠血清和肝組織GSH-PX含量的影響GSH-PX是機體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶。它特異的催化復(fù)原型谷胱甘肽GSH對過氧化氫的復(fù)原反響，可以起到保護細胞膜構(gòu)造和功能完好的作用。血清GSH-PX測定數(shù)據(jù)顯示:模型組血清GSH-PX含量造模后比正常飼料組有極明顯降低(P0.001)，陽性對照組及高劑量組均能明顯升高血清GSH-PX程度

12、，與模型組比擬均有顯著意義(P0.001)，中劑量組雖沒有陽性對照組作用強，但與模型組比擬具有顯著性差異(P0.05)，低劑量組作用與模型組比擬，雖有所升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義；肝組織GSH-PX測定數(shù)據(jù)顯示:模型組肝組織GSH-PX含量造模后比正常飼料組GSH-PX有明顯降低(P0.001)，而陽性對照組、高、中劑量組均能明顯升高肝組織GSH-PX活力程度，與模型組比擬均有極顯著意義(P0.001)，低劑量組作用與模型組比擬，雖有所升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義。見表4。表4白刺果總黃酮對衰老模型小鼠GSH-PX的影響略3討論在模型形成期間，可以逐漸觀察到模型組小鼠的皮毛，活動狀態(tài)與正常組及其它組的區(qū)別。

13、模型組小鼠的皮毛顏色暗淡，有掉毛的傾向，并且活動緩慢。一般認為給小鼠連續(xù)注射D-半乳糖后,因其代謝產(chǎn)物半乳糖醇不能進一步代謝而堆積在細胞內(nèi),導(dǎo)致細胞腫脹,致使小鼠組織細胞出現(xiàn)衰老時的退行性改變以及功能的改變410，同時D-半乳糖在體內(nèi)氧化產(chǎn)生的大量自由基超過機體的去除才能,引發(fā)脂質(zhì)過氧化的鏈式反響,并且過氧化脂質(zhì)(LP)的分解終產(chǎn)物(如DA)可與DNA,RNA蛋白質(zhì)、磷脂等物質(zhì)結(jié)合,損傷細胞膜,引起神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙12，13，18，19。通過檢測小鼠血清、肝組織DA，SD，GSH-PX的程度，得出模型組的DA程度顯著升高，SD，GSH-PX活力程度顯著降低。實驗證明,高劑量組與陽性對照組比擬

14、，小鼠中血清、肝組織DA降低、SD，GSH-PX的活力升高；中劑量組與陽性對照差異有的不是很顯著，提示在進一步的研究時劑量可以以中劑量組的數(shù)據(jù)做參考進展相關(guān)數(shù)據(jù)換算11，1417。低劑量組雖沒有陽性對照組作用顯著，但與模型組比擬也可以降低小鼠中血清、肝組織DA、升高小鼠中血清、肝組織SD，GSH-PX的活力。因此推測白刺總黃酮可能通過進步機體內(nèi)SD和GSH-PX活性,增強其對自由基的去除才能,抑制脂質(zhì)過氧化，降低體內(nèi)DA的生成,從而起到保護機體組織的作用，同時到達延緩衰老的目的20?！緟⒖嘉墨I】1邵義祥.醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)教程.南京：東南大學(xué)出版社，2022：224.2嚴奉偉,羅祖友,吳季勤，等.

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