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打開主頁后，選擇Gene，然后在后面輸入目的基因名，基因后面可以加空格然后加種屬縮寫，不知道種屬縮寫也可以不加點(diǎn)擊Search找到目的基因，注意后面標(biāo)記的種屬，然后點(diǎn)基因名進(jìn)入下一頁面后，向下拉，直到mRNA and Protein，點(diǎn)擊紅框內(nèi)數(shù)字向下拉復(fù)制序列，然后另打開NCBI主頁，點(diǎn)紅框內(nèi)Blast向下翻到specialized blast，點(diǎn)Primer-Blast注意為FASTA sequence，因此在第一行鍵入ACTB（ACTB為目的基因名），然后回車，粘貼剛剛復(fù)制的序列將上圖紅框內(nèi)數(shù)字改成下圖數(shù)字繼續(xù)上圖紅框內(nèi)可以選上，但如果選上得不到結(jié)果，就可以不選。以上兩步都是為了防止DNA污染。其它都可以不改，然后點(diǎn)Get Primers需要運(yùn)行幾十秒，得到10對(duì)引物后進(jìn)行選擇，最好GC百分比在45%-55%之間，Tm在60左右。

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