1、白及膠對體外培養(yǎng)兔膽管成纖維細胞形態(tài)及活性的影響【摘要】目的觀察白及膠對成纖維細胞形態(tài)及活性的影響。方法別離培養(yǎng)日本大耳白兔膽管成纖維細胞，參加不同濃度白及膠進展共同培養(yǎng)，在光鏡下觀察日本大耳白兔膽管成纖維細胞形態(tài)的改變，用TT法比色法檢測日本大耳白兔膽管成纖維細胞活性。結果白及膠組成纖維細胞胞體較小，胞突少，多呈圓形，胞核較校白及膠組0.1、1.0、10.0g/L白及膠在作用72h時成纖維細胞活性與對照組比擬差異有統(tǒng)計學意義(P0.01，P0.05)。結論白及膠對日本大耳白兔膽管成纖維細胞形態(tài)的影響及白及膠對日本大耳白兔膽管成纖維細胞活性的抑制作用，可能是白及膠防治日本大耳白兔腹腔粘連的機制

2、之一?！娟P鍵詞】成纖維細胞；白及膠；藥物作用InfluenefHyainthbletilladetedaternfibrblastirphlgyandativityfrulturerabbitbiliarydut【Abstrat】bjetiveTbservetheinfluenefHyainthbletilladetedaternfibrblastirphlgyandativity.ethdsFibrblastiellsereseparatedfrulturerabbitbiliarydut.ThedifferentnentratinfHyaintabletilladetedatereread

3、dedandultured.hangesffibrblastirphlgyerebservedbylightirspe.FibrblastiativityeredetetedbyTTlrietriethd.ResultsInHyaintnbletillagrupfibrblastiellharesallsa,alittlespine.ThereasbviusdifferenenfibrblastiativitybeteenntrlgrupandHyaintnbletillagrupat0.1,1.0,10.0g/Ln72h(P0.01，P0.05).nlusinHyainthbletillad

4、etedaterhaveinhibitineffetnfibrblastiativityfrrabbitbiliarydut.【Keyrds】Fibrblastiell;Hyainthbletilla;Drugeffet成纖維細胞fibrblast，F(xiàn)B在損傷的修復過程中發(fā)揮著重要作用。過度活化的成纖維細胞可導致?lián)p傷部位纖維組織增生，是粘連形成的重要因素。目前，尚缺乏有效的藥物加以防治?？刂艶B的生物學特性和增殖功能是預防術后粘連形成的根底和關鍵。我們應用體外培養(yǎng)的兔膽管成纖維細胞，觀察白及膠對成纖維細胞形態(tài)及增殖活性的影響，討論白及膠防治術后腹腔粘連的可能機制。1材料與方法1.1材料1.2方

5、法1.2.1白及膠的制備將白及粗粉加適量蒸餾水浸泡過夜,煎煮2次，每次30in。合并煎液,用雙層紗布濾過，4000r/in離心15in。除去沉淀，濾液濃縮至每L相當于生藥1g，加95%乙醇，使醇含量達70%,攪勻，靜置過夜,濾去乙醇，沉淀水浴揮凈乙醇,沉淀加蒸餾水,攪勻(每L相當于白及生藥1g),得白及膠。1.2.2成纖維細胞的制備1日本大耳白兔禁食16h，20%烏拉坦(1g/kg體質量)耳緣靜脈注射麻醉，無菌開腹找到膽管，近腸壁端止血鉗鉗夾損傷膽管1.5后關腹。72h后再次無菌手術取膽管2，放入含有青霉素及鏈霉素的0.9%氯化鈉注射液中，在凈化臺中無菌操作剖開膽管，反復沖洗，盡量刮除膽管黏膜

6、層，眼科剪刀剪碎成約13的組織碎塊，參加DulbesdifiedEaglesediu(DE)營養(yǎng)液放入25L培養(yǎng)瓶中，瓶底倒置于2孵育箱中2h，盡量使組織塊與培養(yǎng)瓶壁粘附后補足含15%血清DE營養(yǎng)液培養(yǎng)細胞，營養(yǎng)液3日換液1次，待成纖維細胞至接近長滿培養(yǎng)瓶底后，移除組織塊用0.25%胰蛋白酶消化傳代，待細胞生長旺盛時用于實驗。1.2.3白及膠對成纖維細胞形態(tài)的影響將生長良好的成纖維細胞制成細胞懸液，調整細胞密度，接種于含蓋玻片的2塊培養(yǎng)皿中，其中1塊加白及膠為白及膠組，另1塊參加等量的培養(yǎng)液為對照組，放入2孵育箱培養(yǎng)72h，待細胞根本長成單層，取出蓋玻片，95%乙醇固定，染色，封片，顯微鏡觀察

7、，照相保存結果。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.1.2.4四甲基偶氮唑藍(TT)法測定不同濃度白及膠對成纖維細胞活性的影響用0.125%胰蛋白酶消化成纖維細胞，細胞懸浮后參加50L離心管中；1500r/in10in離心洗細胞2次，棄上清后參加DE或RPI-1640細胞培養(yǎng)基完全營養(yǎng)液重新懸浮細胞充分混勻。臺酚蘭染色，計數(shù)細胞成活率95%，調細胞數(shù)至1104/L。將1104/L細胞懸液充分混勻后參加96孔板中。96孔板每孔0.15L。分別將10.0、1.0、0.1g/L濃度的白及膠參加96孔板，做6個平行孔。放入5%2孵育箱中培養(yǎng)分別于24、48、72h測定細胞活性。培養(yǎng)完畢前4h摻入TT5g/L20L繼

8、續(xù)培養(yǎng)至完畢，棄培養(yǎng)上清液參加1300鹽酸-異丙醇溶液100L，微量震蕩器震蕩10in，用2022型全自動酶標儀620n測定D值。1.3統(tǒng)計處理經SPSS11.0統(tǒng)計軟件進展方差分析，比擬各組差異,以P0.05為有統(tǒng)計學意義。2結果2.1白及膠對成纖維細胞形態(tài)的影響對照組細胞胞體較大，胞漿豐富，胞突多，呈多角型或梭型，胞核大，有形成細胞增殖巢趨勢，見圖1。白及膠處理組成纖維細胞胞體較小，胞突少，多呈圓形，胞核較校見圖2。2.2不同濃度白及膠對成纖維細胞活性的影響見表1。表1不同濃度白及膠對成纖維細胞活性的影響略由表1可見，0.1、1.0、10.0g/L白及膠均在作用72h時顯示出對成纖維細胞增

9、殖具有顯著的抑制作用。3討論術后腹腔粘連形成是一個復雜的過程，涉及到生物化學及生物物理的多方面因素。多項研究說明，受損的漿膜創(chuàng)面和相鄰腹膜的接觸是粘連形成的重要因素，所以選擇保護隔離創(chuàng)面的方法是一種行之有效的預防措施2。隨著細胞生物學和分子生物學的迅速開展，近年來有證據(jù)說明，成纖維細胞與術后腹腔粘連的形成有著親密關系。有研究證實，腹膜損傷后，其中有大量成纖維細胞被激活，激活的成纖維細胞自身可分泌大量細胞外基質，分泌多種細胞因子，其他多種炎型細胞分泌的炎癥因子對成纖維細胞均有顯著刺激作用，這些均與粘連的形成有親密聯(lián)絡3。因此，抑制成纖維細胞的增殖與活化可能是預防術后腹腔粘連的重要措施。成纖維細胞是一種主要修復細胞，其生物學特征被認為是創(chuàng)傷愈合于纖維化過程中起主要作用的因素。其生物學活性包括：參與細胞的遷移與增生；合成多種細胞外基質E，主要包括膠原、纖維黏連蛋白、彈力蛋白等；釋放膠原酶，降解細胞外基質；分泌細胞因子調控自身增殖和合成功能，影響其他多種細胞參與愈合過程46。中藥白及為蘭科多年生草本植物白及的枯燥塊莖，味苦、甘、澀，性微寒，歸肺、肝、胃經。成效主收斂止血，消腫生跡本研究發(fā)現(xiàn)，白及膠部分涂抹于損傷的漿膜外表，可以有效地減輕腹腔粘連的形成，因此推測中藥白及可能對損傷部分成纖維細胞有一定的抑制作用。本研究應用體外培養(yǎng)的成纖維細胞，