1、溫膽湯對(duì)鹽酸阿樸嗎啡誘發(fā)精神分裂癥模型鼠T細(xì)胞亞群、白介素2的【摘要】目的研究溫膽湯對(duì)鹽酸阿樸嗎啡AP誘發(fā)精神分裂癥模型大鼠全血中T細(xì)胞亞群和血清中白介素2IL-2的影響。方法采用隨機(jī)數(shù)字法，將30只清潔級(jí)SD大鼠分成3組：正常組A、模型組B、溫膽湯組，每組10只。組于造模前采用連續(xù)灌胃溫膽湯水煎劑，每次給藥20lkg-1(相當(dāng)于灌胃20gkg-1)；A和B組用等容量生理鹽水灌胃。灌胃1次/d，共21d。除A外，其它兩組大鼠最后3d給藥1h后，于左側(cè)腹腔注射40的AP，按5lkg-1體重的劑量注射，誘發(fā)SD大鼠精神分裂癥模型。A組予以生理鹽水腹腔注射。最后一天造模后進(jìn)展大鼠刻板行為評(píng)分，1h后

2、經(jīng)股動(dòng)脈取血，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群，雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)IL-2。結(jié)果給溫膽湯后大鼠全血中D3+，D4+T細(xì)胞數(shù)及D4+/D8+顯著比模型組高P0.05，各組間D8+的差異不大(P0.05)；血清IL-2含量較模型組升高(P0.05)；大鼠的刻板行為不同程度受到抑制P0.05。結(jié)論溫膽湯可以進(jìn)步精神分裂癥模型鼠全血中D3+，D4+亞群數(shù)和血清中IL-2的含量，能有效地增強(qiáng)模型鼠免疫調(diào)節(jié)的才能，并具有對(duì)抗AP引起的刻板行為的作用?！娟P(guān)鍵詞】溫膽湯；精神分裂癥；大鼠；T細(xì)胞亞群；白細(xì)胞介素2hinaAbstrat:bjetiveTexplretheeffetfendanDetin(D

3、D)nthelevelsfT-ellsubsetandinterleukin-2(IL-2)inratsithshizphreniainduedbyaprphinehydrhlride(AP).ethds30SDratseredividedrandlyint3grupsith10ineahgrup:nralgrup,delgrupandDDgrup.DDgrupasadinisteredintragastrially20lperkgDD;thethergrupsereadinisteredthesaevluefsdiuhlride.The3grupseregivendrugs.i.dfr21d

4、ays.Exeptthenralgrup,thethergrupseregiven40%APithsinistr-intraperitnealinjetintsettheshizphreniadelafter1hurfintragastrialadinistratininthelast3days.Thedsageas5lperkg.Afterthelastdayfsettingdel,thesteretypedbehavirsresfratserererded.After1hur,theblderesapledfrarteriaferalis,thenthelevelsfT-ellsubset

5、andinterleukin-2(IL-2)ereeasuredbyflyteter(F)anddubleantibdysandihELISArespetively.ResultsThelevelsfD3+andD4+TellandD4+/D8+ereinreasedrearkablyinDDgrup,paredithdelgrup(P0.05).ThedifferenesfD8+levelbeteenthegrupserentbvius(P0.05);thelevelfIL-2inDDgrupashigherthanthatfdelgrup(P0.05);thesteretypedbehav

6、irfratsasinhibitedindifferentdegrees(P0.05).nlusinDDaninreasethelevelsfD3+,D4+TellsubsetandIL-2inratsithshizphrenia,rEinfretheiunefuntinfratseffetivelyandalshastheanti-effettthesteretypedbehavirinduedbyAP.Keyrds:endanDetin;Shizphrenia;Rat;T-ellsubset;Interleukin-2溫膽湯是一首化痰經(jīng)典名方，臨床用治“無(wú)形之痰所致的精神疾患，療效得到肯定

7、1,2。本實(shí)驗(yàn)從精神分裂癥多巴胺(DA)功能亢進(jìn)的發(fā)病機(jī)制討論溫膽湯的作用及其作用機(jī)理，從行為學(xué)、免疫等方面，觀(guān)察溫膽湯對(duì)精神分裂癥模型鼠體內(nèi)T細(xì)胞亞群、白細(xì)胞介素-2IL-2的影響,證實(shí)其免疫調(diào)節(jié)的作用，為臨床廣泛應(yīng)用提供參考。1材料1.1動(dòng)物與分組清潔級(jí)SD大鼠，雌性，(20020)g，30只，由江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)環(huán)境溫度(251)，自然光照，給予充足的飲水和攝食，適應(yīng)5d后開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分為3組：正常組、模型組、溫膽湯組，每組10只。1.2藥物與試劑1.2.1中藥湯劑制備溫膽湯組方(劑量以我們前期臨床、實(shí)驗(yàn)研究劑量為根據(jù))：半夏10g，茯苓30g，竹茹10g，枳實(shí)10g，

8、陳皮10g，甘草6g，每劑含生藥76g，由江西省中醫(yī)院中藥房提供。經(jīng)鑒定合格，各藥物先加水浸泡30in，一煎加藥材量的8倍的水，沸騰后煎40in，過(guò)濾取汁，二煎加藥材量的6倍的水，沸騰后煎30in，過(guò)濾兩煎所得濾液混合后濃縮成11，4冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2試劑鹽酸阿樸嗎啡AP，美國(guó)SIGA公司消費(fèi)。異硫氰酸熒光素標(biāo)記的單克隆抗體FIT標(biāo)記小鼠抗大鼠D3單克隆抗體，藻紅蛋白(PE)標(biāo)記小鼠抗大鼠D4單克隆抗體,多藻葉綠素蛋白PerP標(biāo)記小鼠抗大鼠D8單克隆抗體，紅細(xì)胞裂解液，均為美國(guó)altag公司產(chǎn)品；白介素-2試劑盒ELISA法，美國(guó)原裝進(jìn)口，上海天呈科技提供；PBS緩沖液。1.3儀器流式細(xì)

9、胞儀：美國(guó)BD公司FASalibur型，氰離子激光器，激發(fā)光波長(zhǎng)488n，分析軟件為ELLQuest軟件；高速離心機(jī)TDL-40B,上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)消費(fèi)；K3酶標(biāo)儀：LABSYSTE產(chǎn)品。2方法2.1給藥方法3溫膽湯組于造模前采用連續(xù)灌胃給藥，每次給藥20lkg-1(相當(dāng)于灌胃20gkg-1)；正常組和模型組用等容量生理鹽水灌胃。灌胃1次/d，共21d。2.2動(dòng)物模型的建立4動(dòng)物適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境5d后進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，給藥21d，除正常組外，其它兩組大鼠最后3d給藥1h后，左側(cè)腹腔注射40的AP，按5lkg-1體重的劑量注射，誘發(fā)SD大鼠精神分裂癥模型。正常組予以生理鹽水腹腔注射。2.3觀(guān)察指標(biāo)2.3.

10、1一般情況實(shí)驗(yàn)期間觀(guān)察記錄動(dòng)物行為活動(dòng)、外觀(guān)體征、糞便性狀等。2.3.2刻板行為評(píng)分5每組大鼠均于末次給藥1h后腹腔注射AP后觀(guān)察刻板行為，每隔10in評(píng)分1次，共觀(guān)察60in。其評(píng)分級(jí)別見(jiàn)表1。表1刻板行為評(píng)分略2.3.3血液指標(biāo)測(cè)定最后1次造模1h后處死大鼠，股動(dòng)脈剪開(kāi)取全血和血清測(cè)定T細(xì)胞亞群數(shù)和IL-2的含量。選用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，應(yīng)用ELLQuest分析軟件，陽(yáng)性峰細(xì)胞熒光強(qiáng)度作為T(mén)淋巴細(xì)胞外表分子D3，D4和D8的表達(dá)量。采用雙抗體夾心ELISA法，按說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定IL-2含量。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件先進(jìn)展正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，呈正態(tài)分布且

11、方差齊同那么應(yīng)用單因素方差分析ne-ayANVA及兩兩q檢驗(yàn)；呈偏態(tài)分布或方差不齊那么作多組樣本秩和h檢驗(yàn)，進(jìn)而作秩和q檢驗(yàn)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1一般情況整個(gè)給藥期間未見(jiàn)動(dòng)物死亡，造模前大鼠行為活動(dòng)未見(jiàn)異常，外觀(guān)體征、糞便性狀均正常。3.2刻板行為評(píng)分結(jié)果模型組10只大鼠造模后均出現(xiàn)了聞、咬、舔等刻板行為，活動(dòng)十清楚顯，而正常組大鼠無(wú)此運(yùn)動(dòng)，比擬后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05，說(shuō)明造模成功。與模型組比擬，溫膽湯組大鼠刻板行為在20in后受到抑制P0.05。說(shuō)明溫膽湯具有對(duì)抗AP引起的刻板行為的作用。見(jiàn)表2。表2各組大鼠的刻板行為評(píng)分略3.3血液檢測(cè)結(jié)果3.3.1T細(xì)胞亞群檢測(cè)從表3

12、可見(jiàn)，模型組全血中D3+,D4+T細(xì)胞數(shù)及D4+/D8+比例顯著比正常組和溫膽湯組低，各組間D8+的差異不大；使用溫膽湯組大鼠的D3+，D4+T細(xì)胞數(shù)及D4+/D8+比例比模型組顯著升高。表3各組大鼠全血D3，D4，D8，D4/D8的比擬略圖1為流式細(xì)胞儀檢測(cè)的各組大鼠全血中T細(xì)胞亞群D3+，D4+和D8+的比例的代表圖。圖中的上、中、下列圖分別為正常組、溫膽湯組、模型組大鼠全血中的D3+，D4+和D8+所占的比例。3.3.2IL-2檢測(cè)表4顯示，模型組大鼠血清IL-2含量較正常組和溫膽湯組降低，而溫膽湯組IL-2含量較模行組升高，提示溫膽湯可通過(guò)進(jìn)步IL-2含量來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。表4各組

13、大鼠血清IL-2的比擬略4討論精神分裂癥是一種較常見(jiàn)的精神疾病，具有思維、情感、行為等多方面的障礙，以精神活動(dòng)與環(huán)境不協(xié)調(diào)為特征。目前,臨床治療精神分裂癥的西藥有酚噻嗪類(lèi)、硫雜蒽類(lèi)、丁酰苯類(lèi)、苯酰胺類(lèi)等化合物，在治療過(guò)程中易出現(xiàn)錐體外系不良反響和鎮(zhèn)靜、體位性低血壓與植物神經(jīng)紊亂的不良反響，且對(duì)慢性遷延病程者療效不佳。因此，探究療效好、副作用小的抗精神分裂癥的中草藥甚為迫切。目前國(guó)內(nèi)尚未有人開(kāi)展有關(guān)中藥配伍治療精神分裂癥的根底實(shí)驗(yàn)研究，溫膽湯對(duì)精神分裂癥模型鼠免疫調(diào)節(jié)的實(shí)驗(yàn)是我們系統(tǒng)研究中的一局部。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)精神分裂癥的發(fā)病與腦內(nèi)多巴胺DA功能亢進(jìn)親密相關(guān)，給予動(dòng)物DA受體沖動(dòng)劑AP后，動(dòng)物出

14、現(xiàn)反復(fù)、刻板行為，如不停的嗅、舔、咬和運(yùn)動(dòng)增多等行為，它是腦內(nèi)中腦-邊緣和中腦-皮層DA系統(tǒng)興奮的表現(xiàn)，觀(guān)察藥物抗刻板行為的強(qiáng)弱可以推論它對(duì)精神疾病的治療效果。本實(shí)驗(yàn)用AP造模誘發(fā)SD大鼠精神分裂癥模型，表1可以看出未治療的模型組大鼠全部出現(xiàn)明顯的刻板行為，大鼠連續(xù)咬、啃、舔，有時(shí)全身迅速挪動(dòng)。而使用溫膽湯組大鼠刻板行為在20in后受到抑制，說(shuō)明溫膽湯具有對(duì)抗AP引起的刻板行為的作用。而AP之所以能引起刻板行為的發(fā)生是由于DA大量與受體結(jié)合導(dǎo)致DA功能亢進(jìn)，溫膽湯在阻止DA與受體結(jié)合方面發(fā)揮了作用，從而抑制了刻板行為。T淋巴細(xì)胞的主要功能是介導(dǎo)細(xì)胞免疫，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，Arlt-V等6研究

15、精神分裂癥患者外周血中的T細(xì)胞因子系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素-2IL-2比正常對(duì)照組要顯著降低，可溶性的IL-2受體顯著升高。IL-2被稱(chēng)作“T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，是T淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)有絲分裂或抗原性刺激后產(chǎn)生的一種糖基化蛋白，它可以進(jìn)步細(xì)胞分泌和細(xì)胞分化，IL-2的降低說(shuō)明病人存在細(xì)胞免疫的降低。D4+T細(xì)胞對(duì)機(jī)體的細(xì)胞免疫及體液免疫功能都有輔助性作用，根據(jù)D4+Th細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子不同，將其分為T(mén)h0，Th1和Th2三種亞型。Th1細(xì)胞偏向于分泌IL-2，-干擾素IFN-，它與TDHT細(xì)胞和T細(xì)胞的增殖、分化與成熟有關(guān)，因此Th1細(xì)胞可促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，所以，我們推測(cè)，輔助性T淋巴細(xì)胞D4+T細(xì)胞的降低勢(shì)必引起Th1細(xì)胞的降低，而Th1細(xì)胞所分泌的IL-2及IFN-也應(yīng)相應(yīng)降低，而許多文獻(xiàn)報(bào)道精神分裂癥病人外周血中IL-2也是降低的，我們認(rèn)為，精神分裂癥體內(nèi)可能存在細(xì)胞免疫的抑制現(xiàn)象，這種抑制現(xiàn)象主要是由輔助性T淋巴細(xì)胞D4+T細(xì)胞降低引起的。一般來(lái)說(shuō)，機(jī)體免疫應(yīng)答過(guò)程首先由抗原遞呈細(xì)胞如巨噬細(xì)胞，將加工處理的抗原分子遞呈給D4細(xì)胞，使其在一系列細(xì)胞因子作用下活化，產(chǎn)生對(duì)B細(xì)胞的輔助效應(yīng)，促進(jìn)體液免疫。本研究的結(jié)果顯示在精神分裂模型鼠的外周血中，代表全體T淋巴細(xì)胞的D3+T細(xì)胞、輔助T淋巴細(xì)胞D4+T細(xì)胞及D4+/