1、精品文檔附件3：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則核酸檢測試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)泛指以擴(kuò)增DNA 或 RNA 為手段，從而篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（TMA）等。核酸檢測試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時組織修訂。一、基本要求的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。（二）核酸類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應(yīng)通過體外診斷試試劑的使用范圍作出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品管理部門批準(zhǔn)。.精品文檔（三）核酸類檢測試劑在研制時，應(yīng)當(dāng)遵循科學(xué)、規(guī)范的原則，和外標(biāo)，試劑須設(shè)置抗污染的特

2、定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。（五）生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。二、原材料與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。如果主供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。如果主要原材料（包請。核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無DNase和 RNase污染。1dNTPs脫氧三磷酸核苷，核酸的組成成分，包括：dATPdUTP、dCTP和 dTTP為 HPLC純、PCR級 DNase和 RNase污染。保存。2引物由一定數(shù)量的核苷酸構(gòu)成的特定序列，通常采

3、用 DNA 合成儀人.精品文檔工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。凍干粉，合成量不低于試劑盒總測試樣品所需量。序列正確。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（PAGE）或HPLC 級，不含雜帶。應(yīng)提供合成機構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC 分析圖譜。應(yīng)作 HPLC 分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計測定OD260nm/OD280nm 的比值在1.62.0 之間，可視為合格引物。保存。3探針是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸常采用 DNA 合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在 5-端標(biāo)記熒光素報告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在

4、3-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC 或其他適宜方法純化。凍干粉，90D 以上。純度應(yīng)達(dá)到 HPLC 純，不含雜帶。應(yīng)提供合成機構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC 分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實，并作HPLC 分析。應(yīng)以可見紫外分光光度計進(jìn)行800nm 掃描，在260nm 處應(yīng)有 FAM熒光素在TET 熒光素在TAMRA熒光素在 560nm 處有特異的吸收峰，雜交探針在 、685nm 處有特異的吸收峰，檢驗合格后入庫。避光、保存。4Taq DNA聚合酶.精品文檔具有 DNA 聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94保溫1小時后仍保持50%活性。保存。

5、5UNG（尿嘧啶糖基化酶）具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IUUNG 在 處理 3 分鐘后，10 拷貝以下含 U 模版應(yīng)完全降解，不3能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。保存。6RT-PCR酶（反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增酶）具逆轉(zhuǎn)錄酶活性和 DNA 聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94 1 小時后仍保持活性，保存。三、生產(chǎn)工藝檢驗、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對 pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。四、質(zhì)量控制（一）半成品質(zhì)量控制1按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。2以參考品對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國家.精品文檔品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能低于國家藥品監(jiān)督管理部門已經(jīng)批準(zhǔn)的同類試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3半成品檢驗內(nèi)容包括：參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。4半成品檢驗合格后，按試劑盒組成及時進(jìn)行分裝和包裝。（二）成品質(zhì)量控制1每一批核酸類檢測試劑報批批量至少為5000人份。2產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。3以參考品對