1、立克次氏體和衣原體立克次氏體和衣原體第一節(jié) 立克次體 對人致病的立克次體有五個屬立克次體屬、柯克斯體屬、東方體屬、埃立克體屬和巴通體屬。 2立克次氏體和衣原體第一節(jié) 立克次體 對人致病的立克次體有五個屬立克次體屬、2立共同特點大多是人畜共患病原體，引起人類發(fā)熱和出疹性疾病；以節(jié)肢動物為傳播媒介或為儲存宿主；大小介于細菌與病毒之間，光鏡下呈多形態(tài)性，主要為微，桿狀或球桿狀，革蘭陰性；除了少數(shù)外全是專性活細胞內(nèi)寄生；菌體內(nèi)同時含有DNA和 RNA兩類核酸；以二分裂方式進行繁殖；對抗生素敏感。 3立克次氏體和衣原體共同特點大多是人畜共患病原體，引起人類發(fā)熱和出疹性疾?。?一、斑疹傷寒立克次體 (一)

2、臨床意義 1普氏立克次體是流行性斑疹傷寒(又稱虱傳 斑疹傷寒)的病原體。 病人是惟一的傳染源，體虱是主要傳播媒介， 而非儲存宿主。 傳播方式為虱-人-虱，體虱僅是傳染媒介。4立克次氏體和衣原體一、斑疹傷寒立克次體 (一)臨床意義4立克次氏體和衣原體莫氏立克次體地方性斑疹傷寒(又稱鼠型斑疹傷寒)的病原體。嚙齒類動物是主宿主，傳播媒介是鼠蚤或鼠虱。鼠蚤叮咬人體時，常排糞于皮膚上，斑疹傷寒立克次體從抓破的傷口進入人體。若有人虱寄生，可通過人虱為傳播媒介，繼發(fā)性地在人群中傳播。 5立克次氏體和衣原體莫氏立克次體地方性斑疹傷寒(又稱鼠型斑疹傷寒)的病原體。嚙齒致病物質(zhì)有兩種，其一是內(nèi)毒素，主要成分為脂多

3、糖(LPS)；其二為磷脂酶A,能損傷宿主細胞膜及溶解胞內(nèi)吞噬體膜，以利于病原體穿入宿主細胞并在其中生長。普氏和莫氏立克次體所致的斑疹傷寒癥狀相似，以高熱、頭痛、全身皮疹為主要特征。伴有神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等癥狀和實質(zhì)性器官損傷。 6立克次氏體和衣原體致病物質(zhì)有兩種，其一是內(nèi)毒素，主要成分為脂多糖(LPS)；其(二)微生物特性1. 比細菌小，呈多形態(tài)性，在感染細胞內(nèi)聚 集成團,分布在胞質(zhì)內(nèi), Gimenez法染色后 呈紅色，外表含有微莢膜結(jié)構。2. 必須在真核細胞內(nèi)才能生長繁殖，培養(yǎng)時 需要C02。通常采用5-9日齡雞胚作卵黃囊接種，于32-35孵育413d內(nèi)死亡，雞胚死亡時間與接種劑量大小呈直

4、接相關。普氏和莫氏立克次體能在多種單層細胞上生長繁殖。豚鼠可作立克次體的初代分離。7立克次氏體和衣原體(二)微生物特性1. 比細菌小，呈多形態(tài)性，在感染細胞內(nèi)聚 3.有群特異性和種特異性兩種抗原。大部分立克次體與普通變形桿菌X菌株的菌體耐熱多糖抗原有共同的抗原性，故可用這些菌株代替立克次體抗原進行凝集反應去檢測抗體，這種交叉凝集試驗被稱為外斐反應，可供輔助診斷。8立克次氏體和衣原體3.有群特異性和種特異性兩種抗原。大部分立克次體與普通變形桿 外斐反應 立克次體病 變形桿菌 OX19變形桿菌 OX2變形桿菌 OXk流行性斑疹傷寒+-地方性斑疹傷寒+-斑點熱+/+/+ +-恙蟲病-+腺熱-+9立克

5、次氏體和衣原體 外斐反應 立克次體病 變形桿菌 OX19變形桿菌 OX(三)微生物檢驗1.標本采集(1)病人血液標本：發(fā)熱期均有立克次體血癥， 在急性期較易檢出立克次體。爭取在用抗生 素前采血，立即床側(cè)接種。(2)活檢或尸檢材料：肺、肝、脾、淋巴結(jié)、心 瓣膜等標本。 10立克次氏體和衣原體(三)微生物檢驗1.標本采集10立克次氏體和衣原體2.標本直接檢查(1)免疫熒光檢測 用于臟器檢查。制備標本片薄而均勻，組織結(jié)構清晰，固定后用熒光抗體染色, 常見脾、肺及心瓣膜中有立克次體，也可在肝、腎及皮疹活檢組織中檢出。(2)核酸檢測 PCR敏感性高，所需樣品量只需ELISA實驗的15。以編碼17kD蛋白

6、的基因和編碼普氏和莫氏立克次體169kD蛋白的基因作為擴增靶區(qū)。11立克次氏體和衣原體2.標本直接檢查(1)免疫熒光檢測 用于臟器檢查。制備標引物R17-1、-2在65條件下能擴增普氏和莫氏立克次體DNA。在瓊脂凝膠上產(chǎn)生一條340bp的核酸帶；引物R169-1、-2僅能擴增普氏立克次體DNA，產(chǎn)生一條432bp的核酸帶。兩種引物同時使用，擴增后普氏可產(chǎn)生340bp和432bp兩條帶，而莫氏只產(chǎn)生340bp一條帶。該法敏感性可達005ngDNA水平，重復性好，操作方便，對兩型立克次體早期、鑒別診斷以及自然生態(tài)宿主調(diào)查研究具有較大價值。12立克次氏體和衣原體引物R17-1、-2在65條件下能擴增

7、普氏和莫氏立克次體D3分離培養(yǎng)(1)動物接種 選用健康雄性豚鼠接種以便觀察陰囊腫脹現(xiàn)象。每日測體溫，至40發(fā)熱時采血或臟器懸液、接種雞胚卵黃囊或細胞培養(yǎng)以分離立克次體； 感染莫氏立克次體豚鼠在發(fā)熱12日內(nèi)出現(xiàn)陰囊紅腫，解剖可見腹股溝淋巴結(jié)腫大、充血、脾大2-3倍，有腹水；有陰囊反應者，睪丸有小出血點，鞘膜充血并有漿液性滲出物等。鞘膜涂片可查到立克次體。13立克次氏體和衣原體3分離培養(yǎng)(1)動物接種 13立克次氏體和衣原體(2)鑒定用免疫熒光法鑒定感染動物臟器、雞胚卵黃囊、細胞培養(yǎng)物中的特異性抗原以已知抗原測定動物恢復期血清中的相應抗體。必要時用補體結(jié)合試驗、微量凝集試驗等，作群和種的鑒定。14

8、立克次氏體和衣原體(2)鑒定用免疫熒光法鑒定感染動物臟器、雞胚卵黃囊、細胞培養(yǎng)(3)分離株繁殖及保存雞胚卵黃囊培養(yǎng) 收獲卵黃囊，經(jīng)涂片染色鏡檢, 含立克次體較多而又未發(fā)現(xiàn)細菌的卵黃囊膜，或?qū)⑵渥鞒蛇m當濃度的懸液置-70冰箱保存，或冰凍干燥保藏；細胞培養(yǎng)：選雞胚、成纖維、人羊膜、HeLa等細胞，接種培養(yǎng)、鑒定后將立克次體大量繁殖的感染細胞置-70儲存。 15立克次氏體和衣原體(3)分離株繁殖及保存雞胚卵黃囊培養(yǎng) 收獲卵黃囊，經(jīng)涂片4抗體檢測立克次體病常用的血清學診斷方法除外斐反應、間接免疫熒光(IFA )試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)外，還有補體結(jié)合(CF)試驗、微量凝集(MA)試驗、間接

9、血凝(IHA)試驗、膠乳凝集(LA)試驗等 。16立克次氏體和衣原體4抗體檢測立克次體病常用的血清學診斷方法除外斐16立克次氏(1)外斐反應除Q熱、立克次體痘及羅沙利馬體感染為陰性外，其他為陽性?；颊逴X凝集素上升較晚，在病程2周左右方出現(xiàn)陽性，病程中雙份血清試驗，若效價有4倍增長，方有診斷意義。17立克次氏體和衣原體(1)外斐反應除Q熱、立克次體痘及羅沙利馬體感染為陰性17立有些病例在病程中效價不見上升，約15的經(jīng)疫苗接種后感染斑疹傷寒的病例。有些輕癥斑疹傷寒或某些發(fā)病嚴重者，其他血清學試驗陽性，但外斐反應可為陰性。斑點熱病人外斐反應效價通常為OX19高于OX2，但也有OX2較高者。若僅出現(xiàn)

10、OX2陽性，則對診斷斑點熱有特殊意義。 18立克次氏體和衣原體有些病例在病程中效價不見上升，約15的經(jīng)疫苗接種后感染斑疹(2)IFA試驗為現(xiàn)在診斷立克次體病常用的方法。用已知立克次體抗原(感染雞胚卵黃囊或細胞培養(yǎng)懸液)制片，以低稀釋度的病人血清初篩，有呈典型立克次體形態(tài)的明亮熒光顆粒者，判為陽性。再將病程早期及晚期血清分別作雙倍或4倍稀釋以測效價，如呈48倍增長者可明確診斷。19立克次氏體和衣原體(2)IFA試驗為現(xiàn)在診斷立克次體病常用的方法。用已知19立(3)ELISA檢測IgM抗體對早期診斷有價值。立克次體抗原吸附于載體。泛影葡胺梯度離心純化抗原為優(yōu)，檢出血清的抗體效價高，紙上ELISA測

11、定抗體，方法簡便。將感染卵黃囊懸液加于玻片(經(jīng)氯仿甲醇洗凈)上，涼干、固定，加稀釋血清于抗原點上，每張玻片上包括陽性和陰性對照，加酶標兔抗人IgM/G于抗原血清點作用后，將浸透新鮮配制的底物無灰濾紙覆蓋在玻片上約4-6min，可見濾紙條上陽性對照點位置顯紫棕色，取下濾紙條(即終止反應)，觀察是否顯色，與對照比較判定結(jié)果。此法簡便，并可保存實驗記錄。20立克次氏體和衣原體(3)ELISA檢測IgM抗體對早期診斷有價值。20立克次氏(4)CF試驗 CF試驗原來是立克次體病血清學診斷的經(jīng)典試驗，雖然敏感性不如IFA和 ELISA，但非常特異。一般在立克次體病發(fā)病一周內(nèi)，血清中即有CF抗體出現(xiàn)，以后逐

12、漸上升，至第3周達最高峰，然后逐漸降至較低的效價，并可保持幾年不消失，但也有在病后幾周即轉(zhuǎn)陰性者。病人恢復期血清與斑疹傷寒群及斑點熱群立克次體可溶性抗原試驗的陽性結(jié)果，只能說明該群立克次體的感染 。21立克次氏體和衣原體(4)CF試驗 CF試驗原來是立克次體病血清學診三、恙蟲病立克次體 又名東方立克次體是恙蟲病的病原體，由恙螨叮咬侵入人體，對人體致病性很強，釋放的毒素樣物質(zhì)是主要致病因素，引起發(fā)熱皮疹全身中毒癥狀，以及全身淋巴結(jié)腫大及各組織器官的血管炎病變。蟲咬處潰瘍形成黑色焦痂，周圍有紅暈等為其特征。為自然疫源性疾病。22立克次氏體和衣原體三、恙蟲病立克次體 又名東方立克次體是恙蟲病的病原體

13、，由恙2(一)微生物特性1具有多形性，但以短桿狀為常見。G-,姬姆 薩染色呈紫紅色, Gimenez染色呈暗紅色， 背景為綠色。可以鑒別恙蟲病立克次體和 其他立克次體。分布在細胞質(zhì)內(nèi)，密集于 細胞核旁。細胞內(nèi)寄生。23立克次氏體和衣原體(一)微生物特性1具有多形性，但以短桿狀為常見。G-,姬姆2培養(yǎng)特性(1)動物接種：小鼠最敏感，刮取腹膜上的粘液涂片檢查，可見細胞質(zhì)內(nèi)有大量立克次體，尤以腹膜上皮細胞內(nèi)多見，常密集于細胞核旁。24立克次氏體和衣原體2培養(yǎng)特性(1)動物接種：小鼠最敏感，刮取腹膜上的粘液涂片(2)細胞培養(yǎng)：恙蟲病立克次體可以在多種細胞內(nèi)生長、繁殖，多采用Vero、L929細胞進行培

14、養(yǎng)。細胞感染需要適宜的溫度和吸附時間，通常以37吸附1h，培養(yǎng)32為宜，繁殖緩慢，用Vero細胞培養(yǎng)89d，在細胞質(zhì)內(nèi)生長繁殖，在細胞核旁高度密集，但不侵入細胞核。25立克次氏體和衣原體(2)細胞培養(yǎng)：恙蟲病立克次體可以在多種細胞內(nèi)生長、繁殖，多3抗原成分恙蟲病立克次體具有耐熱性多糖抗原和特異性抗原。恙蟲病立克次體和變形桿菌OXk株有共同的抗原成分，在Weil-Felex反應中，血清與OX，抗原發(fā)生凝集而不與OX19、OX2發(fā)生凝集。26立克次氏體和衣原體3抗原成分恙蟲病立克次體具有耐熱性多糖抗原和特異性抗原。2(二)微生物檢驗(1)抗原檢測：ELISA間接法是檢測標本的特異性抗原或抗體的最常

15、用方法。(2)PCR：可檢出20ng恙蟲病立克次體DNA；套式PCR法可檢出200pg，是目前最為快速、特異、敏感的實驗室診斷方法，可用于急性期患者的早期診斷。依據(jù)56KD蛋白抗原基因或58KD蛋白抗原基因序列選擇引物，進行目的 DNA 擴增，然后用15瓊脂糖電泳法檢出特異性DNA帶。27立克次氏體和衣原體(二)微生物檢驗(1)抗原檢測：ELISA間接法是檢測標本(3)分離培養(yǎng) 接種小鼠分離病原。將標本接種腹腔O5ml，一般多在718天死亡，感染小鼠有明顯癥狀，瀕死前解剖，可見皮下淋巴結(jié)腫大充血，脾腫大，有粘稠的腹腔滲出液，以Giemsa染色鏡檢，在靠近細胞核旁邊可見成堆排列的立克次體。也可接

16、種Vero細胞、L929細胞進行立克次體分離培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)1015天，取細胞涂片，Giemsa染色鏡檢。28立克次氏體和衣原體(3)分離培養(yǎng) 接種小鼠分離病原。將標本接種腹腔O5m(4)抗體檢測外斐試驗：臨床血清學診斷方法，血清抗體OXk效價達l：160以上有意義，病程中雙份或多份血清試驗，若效價有4倍增高，有診斷意義。由于外斐試驗特異性、敏感性低，容易造成誤診或漏診，不應作為恙蟲病的診斷方法。29立克次氏體和衣原體(4)抗體檢測外斐試驗：臨床血清學診斷方法，血清抗體OXk效免疫熒光試驗：快速敏感特異，可分別檢測患者血清中的抗恙蟲病立克次體lgG、IgM抗體，效價在1：80以上有診斷意義。雙份

17、血清有4倍或以上增長可以確診。30立克次氏體和衣原體免疫熒光試驗：快速敏感特異，可分別檢測患者血清中的抗恙蟲病立四、貝納柯克斯體又稱Q熱立克次體，是引起Q熱(疑問熱，指最初不明病因的發(fā)熱)的病原體。傳染源主要是受染的牛、羊等家畜，以蜱為傳播媒介，對人感染力特別強，通過接觸、呼吸道、消化道等途徑使人及動物發(fā)生感染。Q熱除有發(fā)熱、頭痛及肌肉痛外，以出現(xiàn)肺炎和肝炎為其臨床特征。慢性Q熱主要表現(xiàn)為心內(nèi)膜炎。 31立克次氏體和衣原體四、貝納柯克斯體又稱Q熱立克次體，是引起Q熱(疑問熱，指最（一）微生物特性1.形態(tài)與結(jié)構 個體較小，多為短桿狀，常排列成對，Gimenez法染色呈紅色，背景呈綠色，用Giem

18、sa法染色呈紫紅色。有莢膜，在雞胚卵黃囊或細胞培養(yǎng)內(nèi)均可有芽胞形成。2.基因組與抗原成分 基因組分子量為大腸桿菌的13；編碼代謝酶、表面抗原與毒力因子有關基因。有兩相抗原，相為光滑型LPS，相為粗糙型短鏈LPS。32立克次氏體和衣原體（一）微生物特性1.形態(tài)與結(jié)構 個體較小，多為短桿狀，常3培養(yǎng)特點雞胚是培養(yǎng)的極好宿主。一般經(jīng)培養(yǎng)1012d，1g卵黃囊膜?？色@得約1000g純凈的立克次體能在多種人和動物的原代或傳代細胞內(nèi)繁殖。一般不引起明顯的細胞病變。33立克次氏體和衣原體3培養(yǎng)特點雞胚是培養(yǎng)的極好宿主。一般經(jīng)培養(yǎng)1033立克次4抵抗力貝納柯克斯體抵抗力強，70 -90加熱3060min尚難殺

19、死。1%福爾馬林作用24小時也不能完全滅活。對氯霉素和四環(huán)素類抗生素敏感。34立克次氏體和衣原體4抵抗力貝納柯克斯體抵抗力強，70 -90加熱306(二)微生物檢驗 (1)標本直接抗原檢測：免疫熒光法進行檢測。(2)標本直接核酸檢查：按16SrRNA非保守區(qū)序列合成寡核苷酸探針，能檢出5pgrRNA，如將非保守區(qū)特異性擴增，其敏感性可達檢出110個貝納柯克斯體的水平。 用貝納柯克斯休質(zhì)粒DNA片段制備的探針，不僅能快速檢出病原體，且能鑒別含QpHI或QpRS質(zhì)粒分離株，與呼吸道感染病原體DNA無交叉反應。試驗僅需812h即可得到結(jié)果。35立克次氏體和衣原體(二)微生物檢驗 (1)標本直接抗原檢

20、測：免疫熒光法進行檢測3分離培養(yǎng)病原體分離只是在該地區(qū)尚未證明有Q熱存在，病情特別嚴重有必要。將標本接種于豚鼠或培養(yǎng)細胞，觀察其發(fā)病與否或生長情況，經(jīng)形態(tài)學、血清免疫學等鑒定后作出結(jié)論 。36立克次氏體和衣原體3分離培養(yǎng)病原體分離只是在該地區(qū)尚未證明有Q熱存在，病情特4抗體檢測 用間接免疫熒光試驗、ELISA和CF試驗。 CF試驗中抗原相的選擇對結(jié)果影響極大，對現(xiàn)癥診斷主要看相抗體逐漸上升，若相抗體保持較高水平，則往往說明慢性感染或隱性感染。 37立克次氏體和衣原體4抗體檢測 用間接免疫熒光試驗、ELISA和CF試驗五、埃立克體(一)臨床意義為埃立克體病病原體。1.人腺熱埃立克體病 可能由蜱傳

21、播，也 可能由于攝食生魚引起。臨床表現(xiàn)為發(fā) 熱頭痛、淋巴細胞數(shù)增加，并出現(xiàn)非典 型淋巴細胞。2.人單核細胞埃立克體(HME)病，主要侵 染人的單核細胞和巨噬細胞。傳播媒介 為蜱。 38立克次氏體和衣原體五、埃立克體(一)臨床意義為埃立克體病病原體。38立克次氏體3人粒細胞埃立克體(HGE)病 主要侵犯人 粒細胞。硬蜱是傳播媒介。也是萊姆病 病原體的攜帶和傳播者，故與萊姆病的 相重疊。 39立克次氏體和衣原體3人粒細胞埃立克體(HGE)病 主要侵犯人39立克次氏體（二）微生物特性1為G-小球菌，呈多形性，Romanows染 色呈蘭色和紫色。吞噬細胞以內(nèi)吞的方 式將埃立克體攝入胞內(nèi)，在胞質(zhì)內(nèi)以二

22、分裂的方式繁殖，形成包涵體。稱為桑 椹體。40立克次氏體和衣原體（二）微生物特性1為G-小球菌，呈多形性，Romanows2基因組 埃立克體的16SrRNA基因極保守， 但5端的50100堿基為高變區(qū)，適合設計 PCR引物或核酸雜交探針。人粒細胞埃立 克體的外膜蛋白44kDa蛋白被克隆，可用 作探針。3抗原成分 在埃立克體屬內(nèi)的各種埃立克 體均可有血清學交叉反應。 41立克次氏體和衣原體2基因組 埃立克體的16SrRNA基因極保守， 41立克(三)微生物檢驗 1.標本直接顯微鏡檢查 采集病人的外周血制備血片，經(jīng)Giemsa或Wright染色，在光鏡下發(fā)現(xiàn)粒細胞及單核細胞質(zhì)或血小板內(nèi)有圓形、深紫

23、色的桑椹體，可作為急性期埃立克體病的一種簡便和有效的輔助診斷方法。42立克次氏體和衣原體(三)微生物檢驗 1.標本直接顯微鏡檢查42立克次氏體和衣原2.核酸檢測 PCR是最有效的埃立克體病的病原學診斷方法，可用于埃立克體病的早期診斷。大約80-87HME和43-75的HGE患者的血標本被PCR檢測為陽性。 特異性幾乎為100，主要依賴引物的特異性。可用16SrRNA基因設計引物或做基因探針。有極高的敏感性，感染后數(shù)天就可檢出陽性結(jié)果。 43立克次氏體和衣原體2.核酸檢測 PCR是最有效的埃立克體病的病原學診斷方法3.細胞培養(yǎng)查菲埃立克體可用犬巨噬細胞系(DH82)，腺熱埃立克體用小鼠的巨噬細胞

24、系(P388D1)，人粒細胞埃立克體則用人的粒細胞白血病細胞系(HL-60)作它們的體外培養(yǎng)的宿主細胞。將3ml抗凝血的白細胞層，接種細胞單層，置 37的5C02孵育箱中培養(yǎng)，每隔3-4天換一次細胞維持液，并刮少許細胞涂片，用Giemsa染色，在光鏡下檢查埃立克體包涵體。44立克次氏體和衣原體3.細胞培養(yǎng)查菲埃立克體可用犬巨噬細胞系(DH82)，腺熱埃4.小鼠接種 從蜱體內(nèi)分離埃立克體讓蜱叮咬小鼠和吸血?；?qū)⒉∪嘶騽游锏目鼓陌准毎⑷胄∈蟾骨?。觀察小鼠發(fā)病。 定時采小鼠血作涂片染色、IFA、PCR等證明小鼠被埃立克體感染，用腹腔液涂片染色鏡檢包涵體。 45立克次氏體和衣原體4.小鼠接種 從

25、蜱體內(nèi)分離埃立克體讓蜱叮咬小鼠和吸血。5.抗體檢測(1)間接免疫熒光(1FA)： 將感染血清作倍比稀釋，加入抗原孔內(nèi)， 置濕盒37孵育lh；玻片沖洗后，用 Evans藍作背景染色，然后每孔加一滴固 定液，加蓋玻片，在熒光顯微鏡下檢查感 染細胞內(nèi)的帶熒光的包涵體，通常血清中 抗體滴度 1：20為陽性。若獲雙份血清效 價增高4倍以上即可明確診斷。46立克次氏體和衣原體5.抗體檢測(1)間接免疫熒光(1FA)：46立克次氏體和(2)免疫印跡 采用免疫印跡檢測埃立克體病患者血清 中抗埃立克體主要抗原組分的抗體，可 以改善血清學檢測的特異性。經(jīng)免疫印 跡分析發(fā)現(xiàn)HME患者血清中含有抗查菲 埃立克體的44

26、kDa抗原組分的IgG抗體。 但不能用于埃立克體病的早期診斷。 47立克次氏體和衣原體(2)免疫印跡47立克次氏體和衣原體六、漢賽巴通體 引起桿菌性血管瘤桿菌性紫癜(BAP)和貓抓病(CSD)的病原體。常在免疫缺陷病毒(HIV)感染者發(fā)生，也感染有免疫潛能的人群，與接觸貓有關。為G-營養(yǎng)要求苛刻的需氧桿菌，為兼性胞內(nèi)寄生菌。48立克次氏體和衣原體六、漢賽巴通體 引起桿菌性血管瘤桿菌性紫癜(BAP)和貓抓貓抓病有與貓接觸史，抓咬部位形成丘疹膿皰，繼而出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大，約10病例有肉芽腫性結(jié)膜炎、骨質(zhì)溶解、肺炎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害等。49立克次氏體和衣原體49立克次氏體和衣原體桿菌性血管瘤-桿菌性紫癜

27、常在免疫低下者發(fā)生。與貓抓傷咬傷有關，主要表現(xiàn)為皮膚損害和內(nèi)臟發(fā)生紫癜。在病變處能發(fā)現(xiàn)桿菌狀小體。開始皮膚出現(xiàn)紅丘疹，偶有潰瘍。皮下出現(xiàn)肉色結(jié)節(jié)。桿菌性血管瘤可發(fā)生在任何實質(zhì)性器官，很難與分枝桿菌和真菌感染或惡性腫瘤鑒別。50立克次氏體和衣原體桿菌性血管瘤-桿菌性紫癜常在免疫低下者發(fā)生。與貓抓傷咬傷有關(一)微生物特性1為G-彎曲的桿狀小體，常呈多形性；初 分離有菌毛，發(fā)現(xiàn)有噬菌體。2培養(yǎng)特性 營養(yǎng)要求苛刻的需氧桿菌，用 含新鮮血的瓊脂或腦心浸液于355 C02環(huán)境下培養(yǎng)25周才長出灰色凸起 并嵌入瓊脂內(nèi)的菌落。51立克次氏體和衣原體(一)微生物特性1為G-彎曲的桿狀小體，常呈多形性；初513

28、基因組 約為2005kb。已經(jīng)測序的基因 有16SrRNA和 glt A基因序列包括1293 核苷酸，始于ATG起始密碼子，終于 兩TAA終止密碼子。52立克次氏體和衣原體3基因組 約為2005kb。已經(jīng)測序的基因52立克次氏體(二)微生物檢驗1. 標本染色直接檢查 活檢病理標本和淋巴結(jié)活檢用Warthin- Starry染色能查見多形性菌體。2. 核酸檢測 依16S rRNA或gltA基因設計引物，對臨床標 本作 PCR，其擴增產(chǎn)物經(jīng)序列測定或用特異 性DNA探針鑒定，可直接作出病原診斷。 53立克次氏體和衣原體(二)微生物檢驗1. 標本染色直接檢查53立克次氏體和衣原3.分離培養(yǎng)可將血液標

29、本先經(jīng)溶血和離心處理，待長出菌落后作生化反應，分析其細胞脂肪酸和16SrRNA序列等加以鑒定。于培養(yǎng)1周仍不見生長，應繼續(xù)培養(yǎng)至4周。 54立克次氏體和衣原體3.分離培養(yǎng)可將血液標本先經(jīng)溶血和離心處理，待長出54立克次4.抗體檢測(1)IFA：雙份血清滴度呈4倍增長為陽性；單份 血清滴度至少達1：64方可考慮診斷。(2)ELISA：用 17KD重組體抗原作 ELISA檢測 人血清抗體IgG，有助于診斷。(3)免疫印跡試驗：可顯示 485kDa 蛋白質(zhì)組 分，而非巴通體感染病人血清則不能與此蛋 白組分反應，以此作為確證試驗。55立克次氏體和衣原體4.抗體檢測(1)IFA：雙份血清滴度呈4倍增長為

30、陽性；單份第二節(jié) 衣 原 體 是一類專性細胞內(nèi)寄生、有獨特發(fā)育周期、能通過細菌濾器的原核細胞型微生物。歸屬于廣義的細菌范疇。衣原體科包括沙眼衣原體、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體等四種。56立克次氏體和衣原體第二節(jié) 衣 原 體 是一類專性細胞內(nèi)寄生、有獨特發(fā)育周一、沙眼衣原體不僅可致眼部感染，而且可引起生殖泌尿系統(tǒng)感染、性病淋巴肉芽腫以及其他器官疾病。近年沙眼衣原體的感染率和危害性已超過淋球菌而居性傳播疾病之首，因而日益受到醫(yī)學界的重視。沙眼衣原體有沙眼生物變種、性病淋巴肉芽腫生物變種（LGV）和鼠生物變種等3個生物變種。57立克次氏體和衣原體一、沙眼衣原體不僅可致眼部感染，而且可引起生

31、殖泌尿系統(tǒng)感染、1沙眼亞種(1)沙眼： 通過眼-手-眼途徑直接或間接密切接觸傳 播。由A、B、Ba和C血清型引起。結(jié)膜引 起局部炎癥。有濾泡增生。后期出現(xiàn)瘢痕 及角膜血管翳，影響視力。58立克次氏體和衣原體1沙眼亞種(1)沙眼：58立克次氏體和衣原體(2)包涵體結(jié)膜炎： 由B、Ba、D、Da等血清型引起。嬰兒通過 產(chǎn)道感染，引起濾泡性結(jié)膜炎，不出現(xiàn)角 膜血管翳。(3)泌尿生殖道感染： 由D-K血清型引起。在性接觸傳播引起的 非淋菌性泌尿生殖道感染（5060）。 易發(fā)展為持續(xù)感染或無癥狀攜帶者。 59立克次氏體和衣原體(2)包涵體結(jié)膜炎：59立克次氏體和衣原體2.性病淋巴肉芽腫亞種，由L血清型引

32、起性病淋巴肉芽腫。侵犯腹股溝淋巴結(jié)，引起化膿性淋巴結(jié)炎和慢性淋巴肉芽腫。3.鼠生物變種為鼠間傳播，不侵犯人，與鼠肺炎有關。 60立克次氏體和衣原體2.性病淋巴肉芽腫亞種，由L血清型引起性病淋巴肉芽腫。侵犯腹微生物特性1發(fā)育周期與形態(tài)染色 衣原體具有特殊的發(fā)育周期。原體是細胞外存在形式，卵圓形，有胞壁和擬核, 是發(fā)育成熟的衣原體，具有高度感染性，能吸附于易感細胞特異受體，增大形成網(wǎng)狀體；網(wǎng)狀體或稱始體，圓形，二分裂增殖為繁殖型，無感染性。于感染24h后濃縮形成原體，最后細胞破裂釋放原體，再感染其他細胞，每個發(fā)育周期約需4872h。 61立克次氏體和衣原體微生物特性1發(fā)育周期與形態(tài)染色 衣原體具有

33、特殊的發(fā)育周期抗原結(jié)構復雜，有屬、種、型等特異性抗原。 (1)屬特異性抗原：為胞壁LPS，屬特異性補 體結(jié)合抗原，應用于血清學診斷。 (2)種特異性抗原：位于主要外膜蛋白 （MOMP）上，可用補體結(jié)合試驗和中和 試驗檢測。 (3)型特異性抗原：也位于MOMP上，用單 克隆抗體作微量免疫熒光試驗能識別沙眼 體的18個型別。 62立克次氏體和衣原體抗原結(jié)構復雜，有屬、種、型等特異性抗原。62立克次氏體和衣原培養(yǎng)特性沙眼衣原體專性活細胞內(nèi)寄生，用68d齡雞胚卵黃囊及各種傳代細肋培養(yǎng)。一般培養(yǎng)4872h后可在細胞內(nèi)查到包涵體及原體和始體顆粒。近年多采用細胞培養(yǎng)衣原體，常用的細胞株為Hela-299和M

34、cCoy。63立克次氏體和衣原體培養(yǎng)特性沙眼衣原體專性活細胞內(nèi)寄生，用68d齡雞胚卵黃囊及抵抗力沙眼衣原體感染材料在37條件下，經(jīng)48h左右即失去活力，566 min滅活。-70可保存數(shù)年，冷凍干燥可保存30年以上仍有活性。O.1甲醛或O.5石炭酸溶液24h殺死沙眼衣原體，2來蘇僅需5min。紅霉素、四環(huán)素、強力霉素或青霉素對衣原體有抑制作用。64立克次氏體和衣原體抵抗力沙眼衣原體感染材料在37條件下，經(jīng)48h左右即失去活 沙眼和包涵體結(jié)膜炎病人，用拭子在結(jié)膜上穹窿涂擦或取結(jié)膜刮片。性病淋巴肉芽腫：采淋巴結(jié)膿汁，也可取直腸拭子或活檢材料送檢。 用光學顯微鏡觀察包涵體有診斷意義，特別在眼結(jié)膜、尿

35、道及子宮頸上皮細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)典型包涵體更有沙眼衣原體感染的參考。65立克次氏體和衣原體 沙眼和包涵體結(jié)膜炎病人，用拭子在結(jié)膜上穹窿涂擦或免疫學方法1)免疫熒光檢查：用熒光抗體檢測上皮細胞內(nèi)衣原體抗原。標記抗衣原體LPS抗體，可與所有衣原體反應；而抗MOMP抗體有種、型特異性?？稍?h內(nèi)即作出診斷并可分型。2)酶免疫檢測：能在數(shù)小時內(nèi)檢測出衣原體可溶性抗原，并適用于同時檢測大量標本。 66立克次氏體和衣原體免疫學方法1)免疫熒光檢查：用熒光抗體檢測上皮細胞內(nèi)衣原體抗核酸檢測1)核酸雜交：用125I標記的衣原體rDNA探針檢測宮頸標本的敏感性和特異性，與培養(yǎng)相比分別為82.8和99.4。2)PCR：具

36、有高度敏感性和特異性。一般按沙眼衣原體75kb質(zhì)粒、MOMP序列及16SrRNA基因序列設計引物。 67立克次氏體和衣原體核酸檢測1)核酸雜交：用125I標記的衣原體rDNA探針檢測分離培養(yǎng)將標本拭子，用含抗生素的稀釋液制成10-20懸液。分離的細胞有McCoy、HeLa-229細胞等。置5CO2下培養(yǎng)。初代分離培養(yǎng)72-96h后傳代或盲傳。有癥狀病人90標本第1代即可見包涵體，而無癥狀病人需傳代后才得到陽性。敏感性為80-90，特異性100，是目前確診最可靠的方法，而且是評價實驗室診斷法的標準。68立克次氏體和衣原體分離培養(yǎng)將標本拭子，用含抗生素的稀釋液制成10-20懸液雞胚培養(yǎng)有細菌污染的

37、臨床標本加適當?shù)目股?如鏈霉素、慶大霉素和制霉菌素等)肉湯，在室溫中作用lh后，接種3-4只孵育7天的雞胚卵黃囊，35孵育，觀察至13天，收獲卵黃囊涂片，作Gimenez染色，鏡檢原體。 69立克次氏體和衣原體雞胚培養(yǎng)有細菌污染的臨床標本加適當?shù)目股?如鏈霉素、慶大霉鑒定1.將細胞培養(yǎng)蓋片用Giemsa或碘染色鏡檢胞質(zhì)內(nèi)包涵體。Giemsa染色比碘染色敏感，可作為鑒別沙眼衣原體的參考。2.可用型特異性熒光血清鑒定其型別。對于卵黃囊和小鼠分離的材料可用免疫熒光法鑒定原體或補體結(jié)合抗原 。 70立克次氏體和衣原體鑒定1.將細胞培養(yǎng)蓋片用Giemsa或碘染色鏡檢胞質(zhì)內(nèi)包涵體抗體檢測目前檢測抗體的

38、血清學方法在常規(guī)臨床診斷中價值很小。原因是不易獲得雙份血清，而且性傳播疾病的高危人群多有慢性重復感染，原有的抗體水平較高，因而限制了血清學方法的診斷價值。方法有補體結(jié)合試驗(CF)、微量免疫熒光試驗(MIF)、酶免疫法等。其中CF敏感性和特異性較差，而MIF敏感性和特異性較高。 71立克次氏體和衣原體抗體檢測目前檢測抗體的血清學方法在常規(guī)臨床診斷中價值很小。7三、鸚鵡熱衣原體鸚鵡熱衣原體是鸚鵡熱的病原體，主要引起禽畜感染，也可由動物傳染到人，引起肺炎和毒血癥，亦有引起心內(nèi)膜炎的報道。也有衣原體獨特的生活周期，包涵體較致密，形態(tài)不一，碘染色陰性，是與沙眼衣原體鑒別要點 (沙眼衣原體含糖原，碘染色

39、陽性)。72立克次氏體和衣原體三、鸚鵡熱衣原體鸚鵡熱衣原體是鸚鵡熱的病原體，主要引起禽畜感抗原檢測1)免疫熒光檢查：以衣原體屬、種或型的單克隆抗體與熒光素結(jié)合后中衣原體抗原的存在，用微量免疫熒光法還可用于衣原體的分型。2)酶免疫法(EIA)檢測：將衣原體單克隆抗體與酶結(jié)合，用于組織或細胞的染色，槍測衣原體抗原。E1A法比免疫熒光法準確性略高，且可避免主觀因素的影響。73立克次氏體和衣原體抗原檢測1)免疫熒光檢查：以衣原體屬、種或型的單克隆抗體與熒核酸檢測1)核酸探針檢測法：將衣原體MOMP基因、特異LPS表位基因，及其他決定鸚鵡熱衣原體抗原的基因片段做成探針，對衣原體DNA進行斑點雜交或Sou

40、thern印跡雜交試驗，可準確靈敏測出鸚鵡熱衣原體，也可用于種內(nèi)株系的鑒別。2)PCR： 檢測3種衣原體的MOMP基因序列是簡便、微量、快速、敏感的檢測力法。 74立克次氏體和衣原體核酸檢測1)核酸探針檢測法：將衣原體MOMP基因、特異LP分離培養(yǎng)(1)雞胚培養(yǎng)：鸚鵡熱衣原體的分離常用雞胚卵 黃囊接種與傳代，可取得滿意效果。(2)小鼠分離：選擇腹腔接種、顱內(nèi)接種和滴鼻 接種進行試驗。最具特征性的發(fā)現(xiàn)小鼠嗜眠 和麻痹，脹氣的十二指腸上覆蓋一層薄的粘 性滲出物，全肺葉有實變。75立克次氏體和衣原體分離培養(yǎng)(1)雞胚培養(yǎng)：鸚鵡熱衣原體的分離常用雞胚卵75立(3)細胞培養(yǎng)：細胞培養(yǎng)常用PL細胞、BHK

41、細 胞、Vero細胞等，鸚鵡熱衣原體均能生長。 但直接用于臨床標本的分離培養(yǎng)效果不好， 最好先接種雞胚卵黃囊，經(jīng)繁殖后再細胞培 養(yǎng)容易成功。 76立克次氏體和衣原體(3)細胞培養(yǎng)：細胞培養(yǎng)常用PL細胞、BHK細76立克次氏體抗體檢測方法有補體結(jié)合試驗(CF)、間接血凝試驗(IHA)和酶聯(lián)免疫吸附試 (ELISA)等。補體結(jié)合試驗：主要用于鸚鵡熱和性病淋巴肉芽腫以及肺炎的試驗。CF抗體效價呈4倍增長者可作診斷。一次CF抗體結(jié)果，需效價高于1：64才可能作臨床診斷。 77立克次氏體和衣原體抗體檢測方法有補體結(jié)合試驗(CF)、間接血凝試驗77立克次氏四、肺炎衣原體 肺炎衣原體是衣原體屬中的一個新種，

42、只有一個血清型，是一種重要的呼吸道病原體。主要引起青少年急性呼吸道感染，可引起肺炎、支氣管炎、咽炎和鼻竇炎等。還可引起心包炎、心肌炎和心內(nèi)膜炎。肺炎衣原體性感染與急性心肌梗死和慢性冠心病的關系，越來越引起人們的注意。 78立克次氏體和衣原體四、肺炎衣原體 肺炎衣原體是衣原體屬中的一個新種，只有一個血微生物特性1有衣原體獨特的生活周期，原體在電鏡下呈 型的梨形，并有清晰的周漿間隙。2全基因組測序已完成，與鸚鵡熱衣原體、沙 眼衣原體的DNA同源性10，而不同來 擗TWAR株都具有94以上的DNA同源性， 其限制性內(nèi)切酶的圖譜相同。其單克隆抗體 與沙眼衣原體及鸚鵡熱衣原體無交叉反應。3用HEp-2和

43、HL細胞系較易分離和傳代。 79立克次氏體和衣原體微生物特性1有衣原體獨特的生活周期，原體在電鏡下呈79立抗體檢測以微量免疫熒光試驗(MIF)最為敏感，該試驗陽性者5070可分離出 TWAR，用此法檢測特異性的IgM和IgG抗體，有利于區(qū)別近期感染和既往感染，也有利于區(qū)別原發(fā)感染和再感染，TWAR的再感染相當常見，特別是老年人，再感染時一般不出現(xiàn)lgM和補體結(jié)合抗體。80立克次氏體和衣原體抗體檢測以微量免疫熒光試驗(MIF)最為敏感，該試驗80立克概念衣原體是一類嚴格細胞內(nèi)寄生，有獨特發(fā)育周期，能通過細菌濾器的原核細胞型微生物 .81立克次氏體和衣原體概念衣原體是一類嚴格細胞內(nèi)寄生，有獨特發(fā)育

44、周期，能通過細菌濾共同特征 革蘭陰性，圓形或橢圓形體；具有細胞壁，其組成與革蘭陰性菌相似；有獨特的發(fā)育周期，行二分裂方式繁殖；衣原體營專性細胞內(nèi)寄生 ；有核糖體和較復雜的酶類，能進行多種代謝。但缺乏供代謝所需的能量來源對多種抗生素敏感 82立克次氏體和衣原體共同特征 革蘭陰性，圓形或橢圓形體；82立克次氏體和衣原體四種衣原體的性狀比較83立克次氏體和衣原體四種衣原體的性狀比較83立克次氏體和衣原體第一節(jié) 概述生物學性狀發(fā)育周期 原體（elementary body，EB） 始體（initial body） 網(wǎng)狀體（reticulate body，RB）84立克次氏體和衣原體第一節(jié) 概述生物學性

45、狀84立克次氏體和衣原體原體（elementary body, EB）始體（initial body）網(wǎng)狀體（reticulate body, RB）小而致密，直徑0.20.4m，大而疏松，直徑0.51m，球形、橢圓形或梨形，圓形或橢圓形有致密的類核結(jié)構，有胞壁，發(fā)育成熟體大電子致密度較低，無胞壁Giemsa 紫色，Macchiavello 紅色Macchiavello 藍色高度感染性（有毒性）無感染性（無毒性）無繁殖能力代謝活潑，以二分裂方式繁殖胞外穩(wěn)定性強胞外穩(wěn)定性弱85立克次氏體和衣原體原體（elementary body, EB）始體（init 86立克次氏體和衣原體 86立克次氏體和衣原體包涵體包涵體系指在易感細