1、臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室AB0血型鑒定頁(yè)碼：第1頁(yè)，共5頁(yè)測(cè)定原理根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú) A抗原或/和B抗原，將血型分為 A型、B型、AB型及0型4種。 可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗一A和抗一B分型血清來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的A抗原或/和B抗原；所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗一A或/和抗一B。試劑和儀器.批批檢的抗一 A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（0型血）分型血清。.批批檢的5 % A、B及0型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法見(jiàn)本節(jié)附注；.離心機(jī)，顯微鏡。標(biāo)本收集與處理1，受檢者血清；，枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血

2、液制成5 %紅細(xì)胞鹽水懸液使用，制備方法見(jiàn)本節(jié)附注。3,標(biāo)本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標(biāo)本，不能用于檢測(cè)。操作步驟 1試管法取潔凈小試管（內(nèi)徑10mrn 60mm）3支，分別標(biāo)明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分別加抗一A、抗一B和抗一A十B分型血清各I滴（約50 ul ）于試管底部，再以 滴管分別加入受檢者 5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混和。（2）另取潔凈小試管（內(nèi)徑10mn 60mm）3支，分別標(biāo)明A B和0細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清I滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和0型5%試劑紅細(xì)胞懸液I滴，混和。（3）立即以 1000r / min 離心 3 min。（4）將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于

3、管底的紅細(xì)胞浮起，先以?xún)?nèi)眼觀察有無(wú)凝集（或溶血）現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見(jiàn)凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。（5）觀察結(jié)果時(shí)既要看有無(wú)凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B亞型、類(lèi)B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。ABO血型鑒定頁(yè)碼：第2頁(yè)，共5頁(yè)(6)凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4十紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3十紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2十紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見(jiàn)到游離紅細(xì)胞。1十肉眼可見(jiàn)大顆粒，周?chē)休^多游離紅細(xì)胞。土鏡下可見(jiàn)數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周?chē)泻芏嘤坞x紅細(xì)胞。MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見(jiàn)少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。一 表示陰性，鏡下未見(jiàn)凝集

4、，紅細(xì)胞均勻分布。2 玻片法取清潔玻片1張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗 -A、抗-B和抗-A十B, 分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清I滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受 檢者2%紅細(xì)胞懸液1滴，混和。另取潔凈玻片一張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B 細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加 A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 15 min，先以 肉眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)反應(yīng)；再在低倍鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判定ABO血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者血型受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-

5、A抗-B抗-A十BA細(xì)胞B細(xì)胞0細(xì)胞十十A十十十B十-一-O十十十十十AB 注：十為凝集；一為不凝集。版序：2017-6ABO血型鑒定頁(yè)碼：第3頁(yè)，共5ABO血型鑒定質(zhì)量控制與附注分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開(kāi)封后必 須貼上開(kāi)封日期、開(kāi)封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開(kāi)封后 有效期為一周。2，試劑紅細(xì)胞以3個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌1次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原?；蚴褂煤细竦纳唐吩\斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自 制的為15天，商品的為試劑有效期。試劑開(kāi)封后必須貼上開(kāi)封日期、開(kāi)封人標(biāo)簽， 用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以

6、免細(xì)菌污染。試劑開(kāi)封后有效期為一周。3，生理鹽水啟用后，有效期為二周。4，所有試劑在開(kāi)封或使用時(shí)，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進(jìn)行 檢測(cè)工作。，試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。，操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。，按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4 C為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫（20 24C ）內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37C可使反應(yīng)減弱。，離心時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，速度不宜過(guò)快或過(guò)慢，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。，觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢(qián)狀排列的區(qū)別。，判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、

7、記錄，避免筆誤。 對(duì)于可能存在不完全抗原的時(shí)候，應(yīng)在各反應(yīng)方加入凝聚胺試劑，以檢驗(yàn)不完全抗原的存在。對(duì)于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測(cè)。 5血細(xì)胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制。懸液濃度（%壓積紅細(xì)胞（滴）鹽水（滴）212ml(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)版序：2017-6ABO血型鑒定頁(yè)碼：第4頁(yè)，共5頁(yè)正反定型結(jié)果不一致的原因（一） 原因：有技術(shù)性問(wèn)題或紅細(xì)胞和血清本身的問(wèn)題，常見(jiàn)者有以下幾種：，分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗一A血清效價(jià)不高，可將 A亞型誤定為0型，AB型誤定為B型。，紅細(xì)胞懸液過(guò)

8、濃或過(guò)淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。，受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少 （如亞型）或抗原性減弱（見(jiàn)于白血病或惡性腫瘤：以及類(lèi)B或cisAB等。，受檢者血清中蛋白紊亂 （高球蛋白血癥），或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過(guò)高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢(qián)狀排列。，受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗 -A及或抗一B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。，各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體，由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。，血清中有意外抗體，如自身抗一 I，常引起干擾。9,老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結(jié)果不

9、一致，先要重復(fù)作試驗(yàn)1次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問(wèn)題，對(duì)一些疑難問(wèn)題月必須進(jìn)一步 研究。（二）檢查步驟：，另從受檢者采取I份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。，將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成 5%鹽水細(xì)胞懸液，用抗一A、抗一B、抗一AI，抗一A十B及抗H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。，對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽(yáng)性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。，用A1、A2、B 0紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗一I ,用0型（或ABO相合的）臍血紅細(xì)胞檢查。，如果試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和4C放置

10、30min,用顯微鏡檢查核實(shí)。，如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗一A或抗一B血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作 A B、H血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì)80% HAB分泌型的人有 用。ABO血型鑒定頁(yè)碼：第5頁(yè)，共5頁(yè)7，如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈絹錢(qián)狀排列，加等滲鹽水1滴，混和，往往可使絹錢(qián)現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水1滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作 試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。8 ，如受檢者為A型血而疑為有類(lèi)B抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別(1)觀察細(xì)胞與抗一A及抗一B的凝集強(qiáng)度，與抗一A的反應(yīng)要比與抗一B 的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。(2)用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗一 B不凝集自身紅 細(xì)胞上的類(lèi)B抗原。檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出 A物質(zhì)而無(wú)B 物質(zhì)。核對(duì)患者的診斷，類(lèi)B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌