1、生物堿類成分的薄層色譜分析 生物堿（alkaloid）是一類含氮的堿性天然有機(jī)物，大多具有復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，氮原子多在環(huán)內(nèi)，具光學(xué)活性，有顯著的生理作用，是中藥中重要的有效成分。 50多科，120屬以上植物中有生物堿存在。 分布廣泛，以雙子葉植物最多，其次是單子葉植物、裸子植物。 以罌粟科、豆科、防己科、毛茛科、夾竹桃科、茄科、石蒜科等科的植物中分布較多。含生物堿的中藥很多，如三尖杉、麻黃、黃連、烏頭、延胡索、粉防己、顛茄、洋金花、蘿芙木、貝母、檳榔、百部、苦參、馬錢子等。生物堿的種類很多，按其結(jié)構(gòu)大致可分為十二類，但具有重要生理活性的大多集中在異喹啉、吲哚、莨菪烷等衍生物類 生物堿類型序號(hào) 類

2、型 植物藥舉例1 吡咯啶衍生物類 古豆、狗舌草2 吡啶衍生物類 毒芹、一葉萩、煙草3 喹啉衍生物類 金雞納4 異喹啉衍生物類 黃連、罌粟、吐根、 錫生藤、 延胡索、防已、石蒜 5 吲哚衍生物類 番木鱉、毒扁豆、 麥角、蘿芙木6 咪唑衍生物類 毛果蕓香 7 喹唑酮衍生物類 常山8 嘌呤衍生物類 茶葉9 甾體生物堿類 澳洲茄10 莨菪烷衍生物類 古柯、顛茄、洋金花、 11 無環(huán)生物堿類 麻黃12 其它 烏頭、秋水仙生物堿的理化性質(zhì)：1. 物理性質(zhì)2. 旋光性3. 酸堿性4. 溶解度5. 沉淀反應(yīng)4溶解度 游離生物堿極性較小，不溶或難溶于水，能溶于乙醇、氯仿、丙酮、乙醚等有機(jī)溶劑中。 生物堿的鹽類極

3、性較大，大多易溶于水及醇，不溶或難溶于苯、氯仿、乙醚等。 生物堿和其鹽類的性質(zhì)在這一點(diǎn)是相反的。這種性質(zhì)可以用于生物堿的提取、分離與精制。 但要注意的是，季胺堿、酰胺型堿和一些含極性基因較多的游離生物堿則能溶于水。 5沉淀反應(yīng) 生物堿在酸性水溶液或酸性稀醇（50%）中能與生物堿沉淀試劑生成難溶性沉淀 沉淀反應(yīng)的陽性結(jié)果，往往并不可靠，但陰性反應(yīng)，卻可以證實(shí)其不含生物堿。檢查時(shí)常需用3種以上靈敏的沉淀試劑對(duì)照觀察。 生物堿沉淀一般都是試劑分子的陰離子，與生物堿陽離子形成難溶絡(luò)鹽而產(chǎn)生沉淀。常用的生物堿試劑有：碘-碘化鉀（Wagner試劑）、碘化鉍鉀（Dragendorff試劑）、碘化汞鉀（May

4、er試劑）、硅鎢酸（Bertrand試劑）等（一）樣品的預(yù)處理及供試液的制備中藥成分復(fù)雜，供試液中雜質(zhì)多。為了得到較清晰的色譜，樣品提取物需經(jīng)預(yù)處理，使供試液得以凈化，往往是薄層定性分析一個(gè)重要的有時(shí)甚至是關(guān)鍵的步驟。制備樣品供試液所用的溶劑一般要求溶解度不宜太大，粘度不宜太高，沸點(diǎn)適中，而對(duì)中藥材的相關(guān)成分盡可能多的提出。常用乙醇、甲醇提取，雜質(zhì)帶出多，需凈化。樣品供試液的精制方法： 1單一溶劑萃取法 2分段萃取法 3液液萃取法 4固液萃取法（二）薄層色譜的上樣技術(shù)不良的上樣是最主要的誤差來源之一 1原點(diǎn)位置對(duì)樣品容積的負(fù)荷量是極為有限的 2上樣環(huán)行色譜效應(yīng) 3供試液的溶劑在原點(diǎn)的殘留 4上

5、樣裝置對(duì)薄層表面的機(jī)械損傷對(duì)色譜質(zhì)量的影響 控制相對(duì)濕度表_ 相對(duì)濕度(%) 所需硫酸濃度 硫酸（ml） + 水（ml）_ 32 68 100 42 57 100 58 39.5 100 65 34 100 72 27.5 100 88 10.8 100_ （四）溶劑蒸氣在薄層色譜中的作用： “飽和問題” 薄層色譜與柱色譜的區(qū)別之一就是溶劑的蒸氣相在展開缸中也參與色譜的展開而形成三維的層析過程。展開缸的空間氣體在薄層層析過程中起著重要的作用。 在常規(guī)薄層色譜分析中，層析過程是很復(fù)雜的，特別是使用多元又能形成兩相的展開劑時(shí)，即有吸附行為也有分配行為。這時(shí)，對(duì)薄層色譜的層析過程和結(jié)果有很大的影響。

6、（2）在一個(gè)寬極性范圍內(nèi)的多組分混合物的分離 可采用梯度展開技術(shù)，或用高效TLC或其它先進(jìn)技術(shù)等。 但就目前藥典收載品種而言，所采用的展開技術(shù)還是局限于常規(guī)的薄層展開技術(shù)，在其它方面沒有太多選擇的前提下，溶劑系統(tǒng)，即展開劑的優(yōu)選就成了主要需要解決的問題。2展開劑的選擇和優(yōu)化主要考慮兩個(gè)方面：（1）溶劑的極性：要求使欲分離的主要物質(zhì)能在Rf值0.3 0.7之間（2）溶劑的選擇性：要求達(dá)到最佳分離度 關(guān)于溶劑的優(yōu)化，有單純優(yōu)選法、溶劑強(qiáng)度法、三角形法、均勻設(shè)計(jì)法等等；但由于中藥成分復(fù)雜，展開時(shí)影響因素多，各種優(yōu)選方法難以將這些復(fù)雜因素都考慮在內(nèi)，所以，展開劑在選擇項(xiàng)的優(yōu)選方面幾乎還是依靠實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。

7、（六）溫度對(duì)薄層色譜的影響 溫度也是影響層析行為的因素之一。 最直觀的影響是被分離物質(zhì)的Rf值和物質(zhì)的相互分離度以及斑點(diǎn)的擴(kuò)散等，在溫差較大的不同地點(diǎn)或時(shí)間，其它條件相同展開同樣的樣品，所得色譜可能會(huì)有差異。（七）影響薄層色譜的其它因素二生物堿樣品液制備（一）與天然藥物化學(xué)提取、分離、定性的不同點(diǎn) （1）所用中藥材的量不同，中藥質(zhì)量分析所用的樣品量較少，一般小于1g。 （2）提取的原則不同，中藥分析是保證待測組分的最大回收，因此不適用于樣品的放大提取和工廠規(guī)模提取。 （3）分離的目的不同，中藥分析分離的目的是凈化待測組分，排除干擾測定的物質(zhì)以保障含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 （4）定性的目的也不同，

8、中藥分析是利用物理化學(xué)方法和被測物質(zhì)（中藥材、中藥制劑有效成分等）的性質(zhì)進(jìn)行定性鑒別。（二）生物堿提取1提取溶劑（1）非極性溶劑（2）極性溶劑（3）混合溶劑三生物堿薄層色譜的定性分析 1展開劑 2吸附劑 3顯色劑4. 對(duì)照品定性分析 （化學(xué)對(duì)照品、對(duì)照藥材、陰性對(duì)照）5以Rf值為基準(zhǔn)定性分析 （邊緣效應(yīng)及其它影響因素）6薄層掃描定性分析 （薄層指紋圖譜）分析實(shí)例 防己中粉防己堿含量測定 取防己粉末約1g，于80干燥4h，精密稱定，置索氏提取器中，加濃氨試液6滴，放置1h，加氯仿適量，加熱回流約6h，提取液回收氯仿后，放冷，殘?jiān)脽o水乙醇分次溶解并全部移至2ml量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，靜

9、置，作為供試品溶液。另取粉防已堿對(duì)照品適量，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 吸取供試品溶液100l，點(diǎn)于硅膠薄層板上使成條狀，另取對(duì)照品溶液10l，點(diǎn)于供試品條斑一側(cè)，作為對(duì)照，以氯仿- 丙酮- 甲醇- 濃氨試液（20：3：2：0.1）為展開劑，展開，取出，待溶劑揮盡，立即置紫外光燈（365nm）下照射約數(shù)十分鐘后，刮取與對(duì)照品斑點(diǎn)相應(yīng)位置上的供試品條斑，同時(shí)刮取同一薄層板上與對(duì)照品條斑等面積的硅膠作空白，照柱色譜法，置兩個(gè)相同的色譜柱（0.7cm10cm） 中，用甲醇30ml分次洗脫，洗脫液收集于蒸發(fā)皿中，蒸干，冷卻，精密加0.1mol/L鹽酸溶液10ml使殘?jiān)耆芙?，照分光光度法，?80nm 波長處測定吸收度。按粉防已堿（C38H42N2O6）的吸收系數(shù)（E1%1cm）為113計(jì)算，即得。 本品于80干燥4 h，含粉防已堿（C38H42N2O6）不得少于0.70。 (二) 薄層掃描法1. 相關(guān)方法學(xué)考察（1）工作曲線（2）精密