1、化 學(xué)藥 物 分 析 第三章 藥物的雜質(zhì)檢查 7、溶液顏色檢查法 溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質(zhì)量的方法。 中國藥典（2005年版）收載有三種方法： (1) 標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行比較的方法, 全波長范圍定性觀察 標(biāo)準(zhǔn)比色液 K2Cr2O7 黃綠、黃 CoCl2 橙黃、橙紅 CuSO4 棕紅 觀察方法 : 標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制: (2) 分光光度法 單一波長定量色差計法 全波長范圍定量(當(dāng)?shù)谝环N方法較難判斷共試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液之間的差異時使用） 本法是通過色差計直接測定溶液的透視三刺激值，對其顏色進(jìn)行定量表述和分析的方法。 測色儀器一般為光電積分型色差計 方法特點： 可定量測定溶液的顏色和 色差，結(jié)果準(zhǔn)

2、確、客觀， 且不隨時間、地點和人員 變化而發(fā)生變化 檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與濁 度標(biāo)準(zhǔn)液比濁的方法進(jìn)行檢查。濁 度標(biāo)準(zhǔn)液制備原理： (CH2)6N4 + 6H2O 6HCHO + 4NH3 HCHO + H2N-NH2 H2C=N-NH2 + H2O 甲醛腙白色混濁 9、溶液澄清度檢查法1.0硫酸肼溶液與10烏洛托品溶液等量混合配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液 稀 釋 濁度標(biāo)準(zhǔn)原液 稀 釋 濁度標(biāo)準(zhǔn)液（5個級號）不同級號濁度標(biāo)準(zhǔn)液 級 號 0.5 1 2 3 4濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml） 2.5 5.0 10.0 30.0 50.0水 （ml） 97.5 95.0 90.0 70.0 50.0判斷：

3、藥典中規(guī)定的“澄清”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液。（2） 操作方法 （3） 注意事項 1）供試品的取樣量應(yīng)根據(jù)熾灼殘渣限量和稱量誤差決定。 3）若殘渣需留作重金屬檢查，則500600熾灼至恒重。 2）含氟的藥物對瓷坩堝有腐蝕，應(yīng)采用鉑坩堝。 4）加硫酸處理是使雜質(zhì)轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的硫酸鹽，并幫助有機(jī)物炭化11 干燥失重檢查法 主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的物質(zhì)。常采用重量方法進(jìn)行檢查。常用的方法有四種：（1） 常壓恒溫干燥法（2） 減壓干燥法與恒溫減壓干燥法（3） 干燥劑干燥法 2）差示熱分析（differentialtherml analysis , DT

4、A) 是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之間的溫差與溫 度關(guān)系的一種技術(shù)。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過程中 不發(fā)生相變和化學(xué)變化。因此溫差(T)只與被測物質(zhì)的量質(zhì) 變化有關(guān)。T=0 被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng);T= - 為 吸熱峰;T = + 為放熱峰. 測藥的熔點 DTA在藥物分析中應(yīng)用 尖峰為物理變化 藥物定性分析 寬峰為化學(xué)變化 估測藥物的純度 本法可鑒別藥物或其多晶形，可檢查藥物的純度水分：結(jié)晶水和吸附水12 水分測定法 測定方法：兩種費休氏法（最常用的方法）原理: 費休氏試液的組成： 碘+ 無水吡啶+ 無水甲醇 + SO2作用：參與反應(yīng)，促進(jìn)反應(yīng)的發(fā)生； 反應(yīng)的溶劑(2)甲苯法（

5、本法適用于含揮發(fā)性成分的藥品） 置A瓶中,加甲苯約200ml，必要時加入玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細(xì)部分。將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱,待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時,將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗, 再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色，以便分離觀察）。檢讀水量，并計算供試品中的含水量（%）。 【附注】 用化學(xué)純甲苯

6、直接測定，必要時甲苯可先加水少量，充分振搖后放置，將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后使用。13 殘留溶劑 測定法 殘留溶劑：指在合成原料藥、輔料或制劑生產(chǎn)的過程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑的分類： 一類：毒性大，且有致癌并對環(huán)境有害，應(yīng)盡量避免使用的有機(jī)溶劑二 類：有一定毒性，應(yīng)限量使用的的有機(jī)溶劑三類：對人的健康危險性較小，推薦使用的有機(jī)溶劑（1） 檢查方法 中國藥典采用氣相色譜法檢查殘留有機(jī)溶劑 色譜條件：固定相：直徑為0.250.18mm的乙二烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球載氣：氮氣檢測器：氫火焰離子化檢測器檢測柱溫：80170（2） 測定法第一法 毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法

7、應(yīng)用范圍：適用于被檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量不多，并且極性 差異較小的情況不適合采用頂空法測定的溶劑：甲酰胺、2-甲氧基乙醇、 2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基咯烷酮第二法 毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣程序升溫法 應(yīng)用范圍：適用于被檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量較多，并且極性 差異較大的情況第三法 溶液直接進(jìn)樣法 補(bǔ)充知識： 氣相色譜儀六大部分組成： 載氣系統(tǒng)：氣源、氣體凈化器、供氣控 制閥門和儀表。 進(jìn)樣系統(tǒng)：進(jìn)樣器、汽化室。 分離系統(tǒng)：色譜柱、控溫柱箱。 檢測系統(tǒng)：檢測器、檢測室。溫度控制系統(tǒng)：對氣化室、色譜柱、檢測器進(jìn)行控溫記錄系統(tǒng)：放大器、記錄儀、 色譜工作站。1、基本組成： 色譜過程 色譜圖2、檢測器（1）氣相色譜

8、檢測器的類型 氣相色譜檢測器根據(jù)響應(yīng)原理的不同可分為濃度型檢測器和質(zhì)量型檢測器兩類。 濃度型檢測器：測量的是載氣中某組分瞬間濃度的變化，即檢測器的響應(yīng)值和組分的瞬間濃度成正比。如熱導(dǎo)池檢測器（TCD）和電子捕獲檢測器（ECD） 質(zhì)量型檢測器：測量的是載氣中某組分質(zhì)量比率的變化，即檢測器的響應(yīng)值和單位時間進(jìn)入檢測器的組分質(zhì)量成正比。如氫火焰離子化檢測器（FID）和火焰光度檢測器（FPD） 通用檢測器有： 1）熱導(dǎo)池檢測器，TCD (Thermal conductivity detector) 測一般化合物和永久性氣體 2）氫火焰離子化檢測器,FID (Hydrogen flame ionizat

9、ion detector) 測一般有機(jī)化合物專用檢測器有： 3）電子俘獲檢測器，ECD (Electron capture detector) 測帶強(qiáng)電負(fù)性原子的有機(jī)化合物 4）火焰光度檢測器，F(xiàn)PD (Flame photometric detector) 測含硫、含磷的有機(jī)化合物特殊檢測器有：FTIR、MS、測化合物結(jié)構(gòu) （1）氫火焰離子化檢測器的特點：a. 典型的質(zhì)量型檢測器，b. 對有機(jī)化合物具有很高的靈敏度，c. 無機(jī)氣體、水、四氯化碳等含氫少或不含氫的物質(zhì)靈敏度低或不響應(yīng)。d. 氫焰檢測器結(jié)構(gòu)簡單、穩(wěn)定性好、靈敏度高、響應(yīng)迅速等特點。e. 比熱導(dǎo)檢測器的靈敏度高出近3個數(shù)量級，檢測

10、下限可達(dá) 10-12gg-1。3 氫火焰離子化檢測器 原理：利用有機(jī)化合物在氫火焰中燃燒時能產(chǎn)生帶電離子碎 片，收集其荷電量進(jìn)行測定。(2) 氫焰檢測器的結(jié)構(gòu) a. 在發(fā)射極和收集極之間加有一定的直流電壓（100300V）構(gòu)成一個外加電場。 b. 氫焰檢測器需要用到三種氣體： N2 ：載氣攜帶試樣組分； H2 ：為燃?xì)猓?空氣：助燃?xì)狻?使用時需要調(diào)整三者的比例關(guān)系，檢測器靈敏度達(dá)到最佳。(3) 氫焰檢測器的原理a. 當(dāng)含有機(jī)物 CnHm的載氣由噴嘴噴出進(jìn)入火焰時，在C層發(fā)生裂解反應(yīng)產(chǎn)生自由基 ： CnHm CHb. 產(chǎn)生的自由基在D層火焰中與外面擴(kuò)散進(jìn)來的激發(fā)態(tài)原子氧或分子氧發(fā)生如下反應(yīng)：

11、CH + O CHO+ + ec. 生成的正離子CHO+ 與火焰中大量水分子碰撞而發(fā)生分子離子反應(yīng)： CHO+ + H2O H3O+ + COA區(qū)：預(yù)熱區(qū)B層：點燃火焰C層：熱裂解區(qū)：溫度最高D層：反應(yīng)區(qū)氫焰檢測器的原理d. 化學(xué)電離產(chǎn)生的正離子和電子在外加恒定直流電場的作用下分別向兩極定向運(yùn)動而產(chǎn)生微電流（約10-610-14A）；e. 在一定范圍內(nèi)，微電流的大小與進(jìn)入離子室的被測組分質(zhì)量成正比，所以氫焰檢測器是質(zhì)量型檢測器；f. 組分在氫焰中的電離效率很低，大約五十萬分之一的碳原子被電離；g. 離子電流信號輸出到記錄儀，得到峰面積與組分質(zhì)量成正比的色譜流出曲線。A區(qū)：預(yù)熱區(qū)B層：點燃火焰C

12、層：熱裂解區(qū)：溫度最高D層：反應(yīng)區(qū)第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法不同的藥物，由于其合成工藝，原料和結(jié)構(gòu)性能等不同，在生產(chǎn)和貯藏過程中可能引入特有的雜質(zhì)，即特殊雜質(zhì)。藥物中特殊雜質(zhì)的檢查，主要是根據(jù)藥物和雜質(zhì)在物理和化學(xué)性質(zhì)上的差異來進(jìn)行的，方法的專屬性十分關(guān)鍵。 1 色譜分析法（利用吸附或分配性的差異 )(1) 薄層色譜法(TLC) 1)雜質(zhì)對照品法 應(yīng)用范圍：適用于已知雜質(zhì)并能制備得到雜質(zhì)對照品的情況2)供試品溶液自身稀釋對照法應(yīng)用范圍：適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不明確或無雜質(zhì)對照品情況 要求：雜質(zhì)斑點的顏色與主成分斑點顏色相同或相近應(yīng)用范圍：藥物中存在多個雜質(zhì)時，其中已知雜質(zhì)有對照品，采用雜質(zhì)對照品法檢查

13、；共存的未知雜質(zhì)或沒有對照品的雜質(zhì)，可采用供試品溶液自身稀釋對照法檢查3)雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法并用4)對照藥物法應(yīng)用范圍：當(dāng)無適合的雜質(zhì)對照品 ，或者是供試品顯示的雜質(zhì)斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，該對照品中所含待測雜質(zhì)需符合限量要求，且穩(wěn)定性好 (2)高效液相色譜法(HPLC) 1）峰面積歸一化法：L% = Ai /(Ai + A主）100% 2）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定法 對照品+內(nèi)標(biāo) 進(jìn)樣求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR) 供試品+內(nèi)標(biāo) 進(jìn)樣求AX.AS,則雜質(zhì)濃度CX = f AX/(AS/CS)應(yīng)用范圍：

14、適用于粗略測定供試品中雜質(zhì)的含量 一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查應(yīng)用范圍：適于有對照品的雜質(zhì)，能夠測定雜質(zhì)校正因子的情況 3 ）加校正因子主成分自身對照法 （該法省去了雜質(zhì)對照品，同時又考慮到了雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子可能不同所引起的測定誤差） 4）不加校正因子主成自身分對照法 對照品液為供試品的稀釋液進(jìn)樣測得A主 供試品液進(jìn)樣測得Ai 其Ai A主即為合格. 應(yīng)用范圍：適于沒有雜質(zhì)對照品的情況 要求：雜質(zhì)結(jié)構(gòu)與主藥結(jié)構(gòu)相似5）外標(biāo)法測定法應(yīng)用范圍：適于有雜質(zhì)對照品的情況 要求：進(jìn)樣量能精確控制(3)氣相色譜法(GC) 主要用于藥物中揮發(fā)性的雜質(zhì)檢查，其檢查方 法與HPLC法相同。 2 光分析法（利

15、用光吸收性質(zhì)的差異）（1） 紫外分光光度法： 如：苯丙醇中苯丙酮的檢查：可利用供試液的吸收度比來控制雜質(zhì);純品苯丙醇A247nm/A258nm= 0.59; 99.5% 時A247nm/A258nm= 0.79;因此規(guī)定供試品A247nm/A258nm 0.79 即所含苯丙酮0.5%.（2） 原子吸收分光光度法 通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的 含量。 限量檢查時：對照品液 = 供試品 + 限量- a 供試品液 = - b 符合規(guī)定時 b (a-b); b (a-b)不合格。應(yīng)用范圍：主要用于藥物中金屬雜質(zhì)的檢查 A 晶型 C 晶型

16、 在640cm-1 有強(qiáng)吸收 吸收很弱 在662cm-1 吸收很弱 有強(qiáng)吸收 662cm-1 640cm-1 662cm-1 640cm-1 10%A晶型對照品 D2 D1 供試品 D2 D1 10% R = D1/D2 R = D1/D2（3）紅外分光光度法 主要用于藥物中無效或低效晶型檢查，如甲苯咪唑中A晶型檢查3、化學(xué)分析法（利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性上的差異）（1）酸堿性的差異 1）規(guī)定消耗滴定液體積 例如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢查：(NaOH 0.02mol/L) 取本品0.20g + 中性乙醇 + 溴麝香草酚藍(lán) 微藍(lán)色0.50ml 2）pH法 例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二

17、酸檢查：0.01g/ml pH3.04.5. 3）指示劑法 例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查：其水溶液不得使甲基橙顯紅 色。（2 ）氧化還原性的差異 例如：NaCl中I-和Br- 檢查EOCl/2Cl- =+1.3595V EOBr/2Br- =+1.065V EOI/2I- =+0.5345V , 因此+NaNO2+H2SO4+淀粉顯藍(lán)色 例如：鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡的檢查： 后者可被碘氧化生成水溶性綠色化 合物。 因此ChP規(guī)定：本品50mg +4mlH2O+1dI2 +5ml乙醚 乙醚層不得顯紅色；水層不得顯綠色。（3 ）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀 例：間苯二酚中鄰苯二酚檢查：后者+Pb(Ac

18、)2 白色 ChP規(guī)定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸+0.5ml Pb(Ac)2 不得發(fā)生混濁，即為合格。 例：硝酸毛果蕓香堿中其他生物的檢查：后者+氨水+K2Cr2O7 ChP規(guī)定：本品0.2g+20mlH2O兩份；I份+數(shù)滴氨試液；另 1份+數(shù)滴K2Cr2O7試液 ，均不得發(fā)生混濁。（4）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色 例： 鹽酸普萘洛爾中游離-萘酚檢查：利用后者可與重氮鹽 發(fā)生重氮化-偶合反應(yīng)，生成偶氮染料。 ChP規(guī)定：供試品20mg+乙醇與10%NaOH液各2ml+重氮苯 磺酸試液1ml,放置3min；如顯色，與0.3ml -萘 酚對照液（20g/ml)比較不得更深。 例：碘他拉酸中氨基化合物的檢查：利用重氮化-偶合反應(yīng) ChP規(guī)定：供試品2.5mg/ml經(jīng)重氮化-偶合反應(yīng)后，在波長 485nm測得A 0.25（5 ）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體 ChP附錄中收載氰化物的兩種檢查方法：第一法：改進(jìn)普魯士藍(lán)法 原理：CN-