1、輻照滅菌確認方案輻照滅菌確認方案輻照滅菌確認方案V:1.0精細整理，僅供參考 輻照滅菌確認方案日期：20 xx年X月#有限公司研發(fā)部#輻照滅菌確認方案驗證方案審批表驗證方案擬訂表方案起草人方案起草日期二、驗證方案審核審核人（簽名）日 期驗證方案批準批準人（簽名）： 批準日期： 年 月 日方案執(zhí)行日期： 年 月 日驗證執(zhí)行小組成員成 員簽 名組 長副組長小組成員目 錄 主要內容和適用范圍 輻照劑量測定原理選擇SAL和獲得產品樣品測定初始污染菌初始污染菌的計算初始污染菌的測定校正系數(shù)的測定產品釋出物的檢驗建立驗證劑量完成驗證劑量實驗建立滅菌劑量 輻照滅菌加工確認 驗證總結報告書#輻照滅菌確認方案1

2、主要內容和適用范圍本文對于#的滅菌確認過程做了詳細描述，確認的內容包括輻照劑量的設定及輻照加工確認。本方案制定的目的在于證實產品輻照符合ISO11137-2006的要求，滅菌后的產品能達到10-6的無菌保證水平。2輻照滅菌劑量設定原理驗證的原理是基于ISO11137方法，即先對輻照前產品的初始污染菌進行測定，然后選擇驗證劑量。再用驗證劑量對產品進行輻照，并測定存活微生物的樣品件數(shù)，以此來確定最低滅菌劑量（SAL=10-6）。選擇SAL和獲得產品樣品該產品的SAL選定為10-6，收集常規(guī)生產的標準包裝產品，于滅菌前對三個批號進行隨機抽樣，每批至少抽取10個樣品，其中取樣比例（SIP）為1。測定初

3、始污染菌初始污染菌的計算測定至少30個樣品單元的每件樣品的初始污染菌并計算，a)三批中的每一批的平均的單元產品初始污染菌（批平均），和b)所有的單元產品平均初始污染菌（總平均初始污染菌）。ISO11137-2006或GB/T18280-2007中，.2測定至少30個樣品單元的每件樣品的初始微污染菌并計算：批平均值和總平均值。當初始污染菌較低（如小于10）；允許集中檢測單獨一批中10個單元產品來確定批平均初始污染菌。將三批產品的每批平均初始污染菌與總平均初始污染菌比較，確定是否有一批平均值是總平均值的兩倍或兩倍以上。確定初始污染菌測定中是否提供了校正因子，建立測定校正因子的方法。初始污染菌測定測

4、定依據(jù)：ISO11737-1：1995試驗方法：（平板計數(shù)法）洗脫液：無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液：取磷酸二氫鉀，磷酸氫二鈉，氯化鈉，蛋白胨，加水1000ml，微溫溶解，分裝，過濾，滅菌。樣品處理：取樣品10cm2，剪碎，加無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml，浸泡，振搖，作為1:10的供試液。需氣菌培養(yǎng)：取供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入1520ml溫度不超過45的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。霉菌培養(yǎng)：取供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入1520ml溫度不超過45的溶化的玫瑰紅鈉培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。計數(shù)： 除另有規(guī)定外，細菌培養(yǎng)48小時，逐日點計菌

5、落數(shù)，一般以48小時的菌落數(shù)報告；霉菌、酵母菌培養(yǎng)72小時，逐日點計菌落數(shù)，一般以72小時的菌落數(shù)報告；必要時，可適當延長培養(yǎng)時間至57天進行菌落計數(shù)并報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。結果： 批 號樣品號需氣菌(cfu/件)霉菌(cfu/件)需氣菌(cfu/件)霉菌(cfu/件)需氣菌(cfu/件)霉菌(cfu/件)12345678910平均數(shù)批平均初始污染菌為 （cfu/件）總平均初始污染菌為 （cfu/件）校正系數(shù)的測定根據(jù)ISO11737-1中描述

6、的初始污染菌的確定方法進行試驗，測定校正因子，該因子取自對活菌計數(shù)的初始污染菌檢測技術的驗證。測定依據(jù)：ISO11737-1:1995試驗方法：標準菌株準備：取枯草桿菌黑色變種（ATCC9372），傳代培養(yǎng)，制成100cfu/ml備用。洗脫液準備：無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液：取磷酸二氫鉀，磷酸氫二鈉，氯化鈉，蛋白胨，加水1000ml，微溫溶解，分裝，過濾，滅菌。制備懸液稀釋液，使中含有100個芽孢。向隨機抽取的10個產品上接種該稀釋懸液，并在層流下進行干燥。用洗脫液對接種的產品進行洗脫，測定洗脫的芽孢數(shù)，并計算平均值。100除以平均芽孢數(shù)即為回收率的校正系數(shù)。樣品編號12345678910芽孢數(shù)

7、平均芽孢數(shù)： 校正系數(shù)： 產品釋出物的檢驗測定依據(jù)：ISO11737-1：1995試驗方法：1)標準菌株準備：取枯草桿菌黑色變種（ATCC9372）,白色念珠菌（ATCC10231），傳代培養(yǎng)，制成100cfu/ml備用。2)產品處理：取滅菌產品以無菌操作轉移到100mlSCDB培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)24h。3)接種：以無菌操作接種標準菌于上述產品SCDB培養(yǎng)基中，2832培養(yǎng)出現(xiàn)陽性結果或是至少培養(yǎng)7天。用標準平板計數(shù)法進行微生物計數(shù)（CFU）。結果：微生物ATCC接種量（cfu）產品SCDB標準菌對照SCDB+標準菌枯草桿菌黑色變種9372白色念珠菌10231結論： 。 建立驗證劑量根據(jù)初

8、始污染菌的結果和ISO11137：2006方法1中的表5，建立合適的驗證劑量。具體方法為：如果一批或更多批次平均初始污染菌等于或大于總平均初始污染菌的兩倍，則使用最高批次值；如果批次平均初始污染菌的每一個小于總平均初始污染菌的兩倍，則使用總平均初始污染菌。根據(jù)初始污染菌的測定試驗結果，得到該產品三批的批平均初始污染菌和總平均初始污染菌分別為 （cfu/件）和 （cfu/件），最高批次值為 （cfu/件），因此選擇 （cfu/件）作為初始污染菌。根據(jù)11737-1附錄校正過的初始污染菌可通過初始污染菌乘以校正系數(shù)求得，故產品的生物負載估計值為： （cfu/件）。按照ISO11137 方法1中的表

9、5查得該校正過的初始污染菌對應的驗證劑量為 kGy (SAL=10-2)，指定這個劑量作為滅菌劑量。如果平均初始菌在表5中沒有給出，則用比實際計算的初始污染菌大些的，最接近表中數(shù)值的平均初始污染菌。 完成驗證劑量試驗概述從批次 產品中選擇100件產品進行驗證劑量試驗，在浙江佳翔輻照技術有限公司進行輻照。采用確定的滅菌劑量進行輻射處理，所照劑量用該公司放置的劑量計測定劑量，保證所測劑量落在規(guī)定劑量的10%之內。最高劑量不能超過滅菌驗證劑量的10%，如果計算的輻照樣品的平均劑量少于驗證劑量的90%，則驗證劑量實驗要重做。如果樣品吸收劑量比驗證劑量的90%少，并且實施無菌實驗時，觀察到的結果是可接受

10、的（100個無菌試驗的陽性個數(shù)不超過2個，則驗證可以接受），則驗證實驗不需重做。輻照處理試驗劑量計布放應說明劑量計布放示意圖，每一劑量計的測定數(shù)據(jù)，并通過數(shù)據(jù)判定所測計量是否在規(guī)定劑量的范圍內。由于本公司輻照滅菌屬委托加工，該部分實驗報告可由委托加工公司出具。無菌檢驗劑量計測定結果判定合格后，對經(jīng)輻照處理的樣品進行無菌檢驗。試驗依據(jù)：ISO11732:1998試驗方法：1)樣品測試接種均應按無菌操作法（在100級凈化工作臺內）進行。2)無菌打開包裝，用滅菌剪刀、鑷子，將產品轉移至SCDB培養(yǎng)基中。3)將樣品培養(yǎng)基放2832溫箱中培養(yǎng)14天。4)觀察有無細菌生長。結果：無菌試驗檢驗結果試驗樣品試驗數(shù)量培養(yǎng)基溫度（）培養(yǎng)天數(shù)陽性數(shù)150ml SCDB28-32結論：經(jīng)測試，試驗產品陽性菌數(shù)為 ，經(jīng)驗證劑量輻照后的無菌檢查結果為 。建立滅菌劑量 如果實驗使用整個產品，并且驗證劑量是可以接受的，從表5中得到最接近平均初始污染菌的單元產品的滅菌劑量，該初始污染菌與單元產品的平均初始污染菌相等或者跟大，讀出達到10-6SAL所需的輻照劑量，該劑量定為生物型無菌護創(chuàng)膜產品常規(guī)輻照滅菌的最低劑量，最高劑量通常按照最低劑量的兩倍來制定。3 輻射滅菌加工確認該部分用于確認在建立的滅菌劑量下，#產品輻照滅菌過程的有效性，確定輻射滅菌