1、流式細胞儀流式細胞儀1.流式細胞術概述 2.流式細胞儀概述3.流式細胞儀系統(tǒng)結構4.流式細胞儀軟件介紹目 錄5.流式細胞儀其它1.流式細胞術概述 2.流式細胞儀概述3.流式細胞儀系統(tǒng)結構1.流式細胞術概述1.流式細胞術概述流式細胞術定義流式細胞術發(fā)展史流式細胞術特點1.流式細胞術概述1.流式細胞術概述流式細胞術定義1.流式細胞術概述1.流式細胞術定義：流式細胞術(Flow Cytometry，F(xiàn)CM或 FACS)：是利用流式細胞儀對處在快速、直線、流動狀態(tài)中的單細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速定量分析，同時對特定群體加以分選的現(xiàn)代細胞分析技術。流式細胞術是一項新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學分析技術,

2、它是集激光技術、光電測量技術、計算機技術、流體力學以及細胞免疫熒光化學技術、單克隆抗體技術為一體的新型高科技細胞分析技術。1.流式細胞術概述1.流式細胞術定義：1.流式細胞術概述2.流式細胞術發(fā)展史：1930年Caspersson和Thorell開始致力于細胞計數(shù)的研究；1934年Moldaven最早設想細胞檢測自動化，用光電儀記錄流過一根毛細管的細胞；1940年Coons提出結合熒光素的抗體去標記細胞內的特定蛋白；1949年Wallace Coulter申請了在懸液中計數(shù)粒子的方法的專利；1950年Caspersson用顯微UV-VIS檢測細胞1953年Croslannd-Taylor應用分

3、層鞘流原理，成功設計紅細胞光學自動計數(shù)器1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM發(fā)明第一臺熒光檢測細胞計1972年Herzenberg研制出細胞分選器1975年Kohler等提出單克隆抗體技術，為細胞研究提供大量的特異免疫試劑大量廠家不斷生產流式細胞儀1.流式細胞術概述2.流式細胞術發(fā)展史：1.流式細胞術概述3.流式細胞術特點：分析對象：單細胞懸液或生物顆粒分析速度：快速，最高達上萬個細胞/秒檢測參數(shù)：多參數(shù)（兩個散射光參數(shù)、多個熒光參數(shù)）可同時測定多種可溶性細胞成分：流式微球芯片技術（Cytometric Beads Array,CBA）檢測結果：精度高、準確性好先

4、進的細胞定量技術1.流式細胞術概述3.流式細胞術特點：2.流式細胞儀概述2.流式細胞儀概述流式細胞儀定義流式細胞儀的發(fā)展史與商品化流式細胞儀的生產廠家流式細胞儀的分類BD公司、Beckman公司的分析儀及分選儀外觀2.流式細胞儀概述2.流式細胞儀概述流式細胞儀定義2.流式細胞儀概述貝克曼庫爾特Gallios流式細胞儀2.流式細胞儀概述貝克曼庫爾特Gallios流式細胞儀2.流式細胞儀概述1.流式細胞儀定義：流式細胞儀(Flow Cytometor, FCM)是以流式細胞術為核心技術，對高速直線流動的細胞或生物微粒進行快速定量測定和分析的儀器,主要包括樣品的液流技術、細胞的計數(shù)和分選技術,計算機

5、對數(shù)據(jù)的采集和分析技術等。2.流式細胞儀概述1.流式細胞儀定義：2.流式細胞儀概述2.流式細胞儀的發(fā)展史與商品化：1953年：Parker 和 Hutcheon 描述一種全血細胞計數(shù)器裝置，成為流 式細胞儀的雛型；1969年：Van Dilla Fulwyler 發(fā)明第一臺熒光檢測細胞計；1970年：Phywe研制脈沖細胞光度計，備有熒光鏡的FCM，DNA定量；同年Kamensky發(fā)明白細胞分類流式細胞儀，激光光源，吖啶橙染色，測定淋巴、單核、中性粒C；1972年： Len Herzenberg等在斯坦福大學研制熒光激活細胞分選儀（FACS），氬離子激光，標志著流式細胞儀商品化時代到來；197

6、3年： Becton Dikinson (BD)公司投入市場，第一臺FACS-問世，其后20多年來不斷改進完善產品，先后推出FACSAnalyzer、FACScan、FACSCalibur、FACSLSR-、FACSVantage、FACSDiva、FACSAria等；1975年： Kochler 和 Milstein 提出單克隆抗體技術，為細胞研究中大量的特異性免疫試劑的應用奠定基礎；鑒于商業(yè)儀器的發(fā)展;2.流式細胞儀概述2.流式細胞儀的發(fā)展史與商品化：2.流式細胞儀概述1983年：Shapiro 認為多參數(shù)分析流式細胞儀可以實現(xiàn)。此后，流式細胞儀進入一個快速發(fā)展的時期；1994年：美國Cy

7、tomation公司推出高性能、高速分選裝置MoFlo，該機以出色的性能和創(chuàng)新設計理念，一經(jīng)推出即受到廣泛關注；2008年：美國BD公司推出Influx，在MoFlo基礎上實現(xiàn)了原位、立體分選。2.流式細胞儀概述1983年：Shapiro 認為多參數(shù)分析2.流式細胞儀概述4.流式細胞儀生產廠家：目流式細胞儀生產廠家主要有 BD、Beckman Coulter、Partec、Guava、Union Biometrica、ABI、Amnis 等等。美國 BD、Beckman Coulter 和德國的 Partec 占領著流式細胞儀市場的統(tǒng)治地位。BD、Beckman Coulter 產品型號種類齊

8、全，占市場份額較大，如： 經(jīng)濟普及型流式細胞儀 ：FACSCount、Cytomics FC500 ； 大型科研型流式細胞儀： BD FACSAria、EPICS ； 特點：產品價格昂貴，我國使用的單位基本上是科研機構。Partec 產品結構緊湊，造價低，便于攜帶，適合邊遠地區(qū)和發(fā)展中國家，在植物學的研究中占有較大份額。Partec 公司的 CyFlow 于2004 年 1 月進入太空站用于研究工作，成為世界上首臺升上太空的流式細胞儀，證明其結構緊湊，性能優(yōu)越的特點。2.流式細胞儀概述4.流式細胞儀生產廠家：2.流式細胞儀概述5.流式細胞儀分類：臨床型：光路調節(jié)系統(tǒng)固定，自動化程度高，操作簡便

9、，易掌握，適用于臨床常規(guī)測試；科研型：分辨率高，選配多種波長和類型激光器，可將感興趣細胞分選到特定培養(yǎng)孔或板上，適用于科研。2.流式細胞儀概述5.流式細胞儀分類：2.流式細胞儀概述BD公司的流式細胞分析儀2.流式細胞儀概述BD公司的流式細胞分析儀2.流式細胞儀概述BD公司的流式細胞分選儀2.流式細胞儀概述BD公司的流式細胞分選儀2.流式細胞儀概述Beckman公司的流式細胞分析儀2.流式細胞儀概述Beckman公司的流式細胞分析儀2.流式細胞儀概述Beckman公司的流式細胞分選儀：2.流式細胞儀概述Beckman公司的流式細胞分選儀：3.流式細胞儀系統(tǒng)結構3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流動室與液流系

10、統(tǒng)激光光源與光學系統(tǒng)信號檢測與分析系統(tǒng)分選系統(tǒng)3.流式細胞儀系統(tǒng)結構3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流動室與液流系統(tǒng)3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流 式 細 胞 儀 結 構 圖3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流 式 細 胞 儀 結 構 圖3.流式細胞儀系統(tǒng)結構1.流動室和液流系統(tǒng)流動室：儀器核心部件，被測樣品在此與激光相交液流驅動系統(tǒng)（壓力泵）：空氣泵+壓力傳感器3.流式細胞儀系統(tǒng)結構1.流動室和液流系統(tǒng)3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流動室：流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成，常用光學玻璃、石英等透明、穩(wěn)定的材料制作樣品管貯放樣品，單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出;鞘液由鞘液管從四周流向噴孔，包圍在樣品外周后從噴嘴射出;流動室上裝有壓電晶體，受到振蕩信號可發(fā)生振動。3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流動室：3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流體的動力學聚焦3.流式細胞儀系統(tǒng)結構流體的動力學聚焦3.流式細胞儀系統(tǒng)結構液流系統(tǒng)：由樣本和鞘液組成待測細胞 單個細胞的懸液 熒