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布魯氏菌李天森內(nèi)容布魯氏菌概述1布魯氏菌研究方法2本室對布魯氏菌的防護(hù)3布魯氏菌缺失株構(gòu)建4布魯氏菌病是人畜共患的慢性傳染病，也是中華人民共和國傳染病防疫法規(guī)定的乙類傳染病。 布魯氏菌概述布病危害信號通路疫苗檢測布魯氏菌胞內(nèi)生存疫苗基因缺失疫苗致弱疫苗檢測試管凝集虎紅平板 試紙條PCR抑制劑WB信號通路本室防護(hù)構(gòu)建自殺載體1.確定基因例如：牛種布魯氏菌2308株omp10基因首先到ncbi（/）查找牛種布魯氏菌2308株全基因組序列和目的基因omp10的基因序列。Omp10基因384bpOmp10基因上臂Omp10基因下臂取1000bp左右取1000bp左右533553上臂上游上臂下游下臂上游下臂下游3518bp卡那抗性替換2.設(shè)計引物上臂上游與下臂下游加酶切位點。4.1卡那抗性替換 需要將融合片段連接到pUC19k載體。 得到pUC19k-omp10(同源臂)-kana載體4.2無痕缺失 將融合片段連接到pMD19-T載體，酶切之后連接到pGEM-7Zf+載體，同時將SacB基因連接到pGEM-7Zf+-omp10載體，作為負(fù)篩選標(biāo)記。 得到pGEM-7Zf+-omp10(同源臂)-SacB載體 5.電轉(zhuǎn)化 將構(gòu)建成功的載體電轉(zhuǎn)進(jìn)入布魯氏菌感受態(tài)中。 6.同源重組篩選pGEM載體上下臂融合片段SacB基因pUC19K載體上臂下臂Kana基因上臂下臂目的片段上臂下臂上

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