1、基因工程 考試大綱 一、課程考核的有關(guān)說(shuō)明和實(shí)施要求 基因工程是湖南師范大學(xué)生命科學(xué)院基地班和生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)本科生的必修專(zhuān)業(yè)課程?？己私滩氖悄壳霸谑褂玫挠稍闹拗骶帯⒈本┗瘜W(xué)工業(yè)出版社2010年出版的基因工程。學(xué)生可參考使用基因工程課程網(wǎng)站有關(guān)課件和錄像以及課堂講授的內(nèi)容進(jìn)行考試復(fù)習(xí)。 本課程主要考核學(xué)生對(duì)基因工程的基本概念、基本原理、基本技能等的了解與掌握程度。理論課考試要求掌握基因工程相關(guān)的基本概念，基因工程操作的基本流程，常規(guī)基因工程技術(shù)的基本原理、基本流程與主要應(yīng)用，基因功能研究的基本技術(shù)，轉(zhuǎn)基因植物與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本制作方法，基因治療與蛋白質(zhì)工程的基本原理等。理論課考核由兩部分組成，期

2、末考試占成績(jī)權(quán)重的80%，課堂平時(shí)表現(xiàn)與平時(shí)作業(yè)占成績(jī)權(quán)重的20%。期末考試的基本題型包括名詞解釋、單項(xiàng)選擇題、多項(xiàng)選擇題、簡(jiǎn)答題（含辨析題）、論述題（含案例分析），各題型所占分?jǐn)?shù)比例分別為20、10、10、20和40。 本課程期末考試時(shí)間為120分鐘。 二、基因工程理論課考核內(nèi)容與考核目標(biāo)基因工程概述 基因工程的基本概念，基因工程的基本流程，基因工程誕生的條件與標(biāo)志，基因工程的發(fā)展簡(jiǎn)史以及基因工程有哪些主要應(yīng)用。基因工程的工具酶和載體 基因工程工具酶包括哪些類(lèi)型？限制性內(nèi)切核酸酶的特點(diǎn)與使用注意事項(xiàng)，DNA聚合酶和Klenow大片段的作用，DNA連接酶的作用及連接過(guò)程，堿性磷酸酶的作用及用途

3、，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的用途和作用等?；蚬こ梯d體必須滿足的基本條件，質(zhì)粒載體的主要特征和主要類(lèi)型，噬菌體載體的類(lèi)型和特點(diǎn)，不同載體的攜帶能力，人工微小染色體的概念、類(lèi)型和獲得途徑。表達(dá)載體的概念以及典型的常見(jiàn)的高效表達(dá)系統(tǒng)如T7噬菌體啟動(dòng)子系統(tǒng)、融合蛋白表達(dá)系統(tǒng)、分泌表達(dá)系統(tǒng)以及甲醇酵母系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)的載體組成、高效表達(dá)的實(shí)現(xiàn)條件與優(yōu)點(diǎn)等。各種載體的結(jié)構(gòu)特征與各結(jié)構(gòu)的作用等。目的基因的制備與鑒定 基因組文庫(kù)的概念和構(gòu)建方法， cDNA文庫(kù)的概念和構(gòu)建流程，構(gòu)建cDNA文庫(kù)需要用到哪些工具酶，合成cDNA第二條鏈有哪些方法等等；PCR技術(shù)的基本原理；PCR反應(yīng)體系的主要成分與主要程序；提高

4、PCR反應(yīng)特異性的因素和措施；逆轉(zhuǎn)錄PCR、巢式、反向PCR、多重PCR及熒光定量PCR的概念和應(yīng)用；基因組數(shù)據(jù)庫(kù)的概念，蛋白質(zhì)工程的原理與概念，PCR介導(dǎo)定點(diǎn)突變的原理。目的基因的常用鑒定方法，酶切電泳圖譜的識(shí)別，核酸分子雜交的概念，探針的類(lèi)型與標(biāo)記方法；掌握Southern雜交、Northern雜交、Western雜交及菌落（嗜菌斑）原位雜交的基本原理、流程與主要目的； Sanger雙脫氧鏈終止法DNA測(cè)序和Maxam-Gilbert化學(xué)修飾法測(cè)序的基本原理，DNA自動(dòng)測(cè)序的基本原理等等。基因工程在基因功能研究中的應(yīng)用 胚胎原位雜交、胚胎抗體染色的概念，基因芯片的概念與類(lèi)型，基因芯片的流程

5、與應(yīng)用；轉(zhuǎn)座子誘變的原理與優(yōu)點(diǎn)；基因敲除的概念與流程，條件基因敲除的原理與優(yōu)點(diǎn)，RNA干擾的概念與分子機(jī)制，RNA干擾的優(yōu)點(diǎn)與應(yīng)用，MO干擾的概念。基因過(guò)表達(dá)系統(tǒng)的組成，UAS-GAL4系統(tǒng)的組成與優(yōu)點(diǎn)。凝膠遷移阻滯實(shí)驗(yàn)的原理與應(yīng)用，酵母雙雜交系統(tǒng)的原理與組成、酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用，免疫共沉淀的原理等。轉(zhuǎn)基因植物 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線；植物轉(zhuǎn)基因的受體系統(tǒng)的類(lèi)型；外源基因?qū)胫参锏姆椒ǎ?Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、 Ti質(zhì)粒介導(dǎo)植物基因轉(zhuǎn)移的過(guò)程。植物轉(zhuǎn)基因載體的報(bào)告基因， 提高外源基因在植物體內(nèi)表達(dá)水平的策略?？瓜x(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的概念，抗病毒轉(zhuǎn)基因作物，抗細(xì)菌和真菌的轉(zhuǎn)基因作物、抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物

6、、抗非生物脅迫的轉(zhuǎn)基因作物的概念等。植物生物反應(yīng)器的概念。轉(zhuǎn)基因生物的安全性和主要影響因素等。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的概念，顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的主要過(guò)程。逆轉(zhuǎn)錄病毒法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的主要過(guò)程。胚胎干細(xì)胞的概念。胚胎干細(xì)胞制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的流程。精子載體法及其制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的主要優(yōu)點(diǎn)。體細(xì)胞核移植法和主要流程。動(dòng)物器官生物反應(yīng)器的概念。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在醫(yī)藥科學(xué)研究中的應(yīng)用。轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定方法。顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物需要的設(shè)備與裝置。逆轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)與基因組特點(diǎn)。 基因治療 基因治療的概念，基因治療的基本策略，基因治療的載體類(lèi)型。 逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒與腺伴隨病毒載體怎么構(gòu)建、各有什么優(yōu)缺點(diǎn)等。體外基因治療與體內(nèi)基因治療的比較。單基因遺傳病的基因治療策略，腫瘤基