醫(yī)學分子生物學技術(shù)36、如果我們國家的法律中只有某種神靈，而不是殫精竭慮將神靈揉進憲法，總體上來說，法律就會更好?！R克·吐溫37、綱紀廢棄之日，便是暴政興起之時?！ての锾?8、若是沒有公眾輿論的支持，法律是絲毫沒有力量的。——菲力普斯39、一個判例造出另一個判例，它們迅速累聚，進而變成法律?！炷岫蛩?0、人類法律，事物有規(guī)律，這是不容忽視的?！獝郢I生醫(yī)學分子生物學技術(shù)醫(yī)學分子生物學技術(shù)36、如果我們國家的法律中只有某種神靈，而不是殫精竭慮將神靈揉進憲法，總體上來說，法律就會更好。——馬克·吐溫37、綱紀廢棄之日，便是暴政興起之時?！ての锾?8、若是沒有公眾輿論的支持，法律是絲毫沒有力量的?！屏ζ账?9、一個判例造出另一個判例，它們迅速累聚，進而變成法律?！炷岫蛩?0、人類法律，事物有規(guī)律，這是不容忽視的?！獝郢I生醫(yī)學分子生物學實驗技術(shù)7/15/20212第一章蛋白質(zhì)的分離與純化第一節(jié)蛋白質(zhì)分離純化的一般原則一、蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)及其依據(jù)7/15/20213隨著高校的大規(guī)模擴招，學生人數(shù)逐年遞增，畢業(yè)生的大量輸出給社會帶來巨大的壓力，學生就業(yè)管理工作趨向于復(fù)雜化，如何能夠有效地提高畢業(yè)生就業(yè)率在高校中已經(jīng)成為一個急待解決的問題。然而我們通常做的都只是表面的去統(tǒng)計畢業(yè)生的就業(yè)數(shù)據(jù)，不進行深層次的數(shù)據(jù)分析，得到的往往也只是表面信息。合理利用現(xiàn)代化的信息手段整理過往畢業(yè)生的就業(yè)數(shù)據(jù)，從中尋找影響用人單位錄用畢業(yè)生的關(guān)鍵要素才是解決問題的關(guān)鍵所在。有效利用數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)對大學畢業(yè)生就業(yè)信息進行分析，將信息中內(nèi)在的聯(lián)系挖掘出來，這是傳統(tǒng)的、表層的評價方法無法做到的。本文將選取決策樹C4.5算法構(gòu)建就業(yè)決策分類樹抽取規(guī)則知識，原因是就業(yè)數(shù)據(jù)具有分類的預(yù)知性、離散性的特點。一、決策樹算法決策樹方法的原始啟蒙來源于概念學習系統(tǒng)，屬于數(shù)據(jù)挖掘核心技術(shù)算法之一，有一定的優(yōu)勢。它的特點是基于實例數(shù)據(jù)，將大量數(shù)據(jù)有目的地分類，把一個復(fù)雜的問題分成更簡單的問題并重復(fù)使用這一技巧，找出潛在的、對決策有利用價值的信息，決策樹算法多數(shù)情況下應(yīng)用在預(yù)測模型中。如果引用信息論中的說法，就是在選擇決策節(jié)點屬性時，用信息增益來進行判定。所謂決策樹，實際上是一種形象的叫法，它是由決策節(jié)點、分支、葉子和連接線組成，其形狀類似倒長的樹型結(jié)構(gòu)。決策樹的節(jié)點一般用矩形表示，代表一個非類別屬性，每個葉子用橢圓形表示，代表一個類別。矩形和橢圓形的連接線代表一條分支，每條分支代表著這個屬性可能出現(xiàn)的值。每一條從根節(jié)點到葉子節(jié)點的路徑則代表著一條分類規(guī)則。目前眾多決策樹算法中最為著名的是Quinlan在ID3算法的基礎(chǔ)上進行改進提出來的C4.5算法。C4.5算法的先進性體現(xiàn)在：C4.5算法比ID3算法先進的方面在于選擇屬性時采用的是信息增益率去替代信息增益，使得在屬性選擇時不會對取值多的屬性帶有更強的偏向性，所得出的計算結(jié)果更準確；分析連續(xù)型屬性是C4.5算法又一改進，并且當在樣本集中出現(xiàn)空缺的屬性值時，C4.5算法也能進行處理，從而提高結(jié)果的準確性；C4.5算法能夠直接將連續(xù)值屬性進行分割，分別計算信息增益率，并選取結(jié)果當中信息增益率最大的分割為屬性標準，從而轉(zhuǎn)換為離散的二值屬性，完成對連續(xù)型屬性的離散化處理；C4.5算法在構(gòu)造樹的過程中采用后修剪枝葉的方法，能有效的控制決策樹的高度，同時，相對其他的算法而言C4.5生成的決策樹分枝也有所減少。為了能使用最小的信息構(gòu)造最為簡單的決策樹，在對訓練樣本子集進行分類時，在選取當前節(jié)點的測試屬性時，就必須把具有最高信息增益的屬性找出來。具體方法如下：假設(shè)有訓練樣本數(shù)據(jù)集S，類別屬性C可以取k個不同的值，將訓練樣本數(shù)據(jù)集S分為k個不同的類Ci（i=1，2，……，k），Ri為數(shù)據(jù)集S中屬于Ci類的子集，用ri表示子集Ri中的樣本數(shù)量。用Pi表示任意樣本屬于類別Ci的概率：，|S|表示集合S中的樣本數(shù)量。樣本集合S的平均不確定性和純度的高低是通過信息熵反映的。如果熵值越小，平均不確定性越低，純度越高。每個屬性的信息增益率都可以由上述的公式計算出來，這樣集合S的決策樹的根節(jié)點就可以根據(jù)計算出來的信息增益率最高的屬性來確定，并以該屬性作為標記屬性，對屬性的每一個值創(chuàng)建分枝，并據(jù)此劃分樣本。二、數(shù)據(jù)預(yù)處理（一）數(shù)據(jù)準備在本研究中，選擇畢業(yè)生的就業(yè)信息作為研究數(shù)據(jù)，通過分析畢業(yè)生在校的學習情況、專業(yè)及專業(yè)類別等信息，挖掘出用人單位的行業(yè)性質(zhì)。在進行構(gòu)造決策樹時，必須對數(shù)據(jù)進行規(guī)格化處理，能保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和一致性。同時還要對用人單位行業(yè)性質(zhì)的文字描述進行量化和對學習情況等決策屬性進行離散化。（二）數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)換在所采集的數(shù)據(jù)中選取4項作為實驗樣本。選取學習成績、外語水平、實踐能力、就業(yè)方向構(gòu)成四維向量表。數(shù)據(jù)選擇如下：學習成績（CJ）采集學習成績的平均值分段劃分為三級，中等（CJ根據(jù)決策樹可以直接提取分類規(guī)則：IF實踐能力=優(yōu)秀+英語水平=四級+學習成績=優(yōu)秀THEN就業(yè)類別=X/V。IF實踐能力=優(yōu)秀+英語水平=B級+學習成績=優(yōu)秀或良好THEN就業(yè)類別=V。IF實踐能力=一般+學習成績=良好+英語水平=B級THEN就業(yè)類別=X/Y/Z。IF實踐能力=一般+學習成績=中等+英語水平=B級THEN就業(yè)類別=Y。IF實踐能力=一般+學習成績=優(yōu)秀+英語水平=B級THEN就業(yè)類別=X。IF實踐能力=差+英語水平=B級+學習成績=中等THEN就業(yè)類別=V/Y。IF實踐能力=差+英語水平=B級+學習成績=良好THEN就業(yè)類別=Y/Z。從上述分類規(guī)則中我們可以發(fā)現(xiàn)，不同的能力和水平對于提高學生就業(yè)層次具有非常微妙的影響，如果全面加強學生成績的培養(yǎng)，則提高畢業(yè)生進入國企就業(yè)的數(shù)量；如果重視加強實踐能力和外語水平的雙方面培養(yǎng)，則能提高進入外企就業(yè)的畢業(yè)生數(shù)量。當然我們還可以擴大訓練樣本集，添加更多的數(shù)據(jù)，這樣所構(gòu)建的決策樹能反映數(shù)據(jù)之間更多的內(nèi)在聯(lián)系。在當前復(fù)雜的就業(yè)形勢下，文章提出了對就業(yè)數(shù)據(jù)進行挖掘，并建立數(shù)據(jù)挖掘模型，利用C4.5決策樹算法，分析畢業(yè)生就業(yè)信息系統(tǒng)中的數(shù)據(jù)。并在通過算法建立的決策樹模型中，最終得到以就業(yè)類別為屬性的分類規(guī)則，進一步分析這些分類規(guī)則，能為學校的就業(yè)提供分析和決策。如能進一步完善基于就業(yè)分析模型決策樹的分類器，將決策樹技術(shù)引入高校學生就業(yè)信息中，尋求影響學生就業(yè)的主要因素，最終必將推動高校教育管理的改革與發(fā)展。【摘要初中語文閱讀是中學語文教育教學的重要環(huán)節(jié)，然而現(xiàn)今我國的初中語文閱讀教學還存在諸多問題，難以擺脫傳統(tǒng)模式下語文閱讀教學的“高能耗、低效率”的局面，教學質(zhì)量也不盡如人意，在現(xiàn)有條件下，初中語文教育教學模式與方法的創(chuàng)新是解決這一問題的關(guān)鍵，對初中語文閱讀教學意義重大。1初中語文閱讀教學的存在的問題雖然新課改中對初中語文教學的性質(zhì)、目標、模式等各個方面給出了指導(dǎo)性的規(guī)定。但是在傳統(tǒng)教學模式的影響下，在現(xiàn)階段教育制度及教學環(huán)境的制約下，還有每位初中語文教師對語文教學教學活動的不同理解下，造成了我國初中語文閱讀教學還存在著大量問題，嚴重偏離了新課改的要求及語文教學的性質(zhì)、目標。總體來看主要存在以兩個方面的問題：1.1“對話教學”形同虛設(shè)、表里不一《全日制義務(wù)教育語文課程標準》中明確指出“語文教學應(yīng)在師生平等對話的過程中進行。”①“閱讀教學是學生、教師、文本之間對話的過程。”②“對話理論”源自巴西的教育學家保羅·弗萊雷，他認為在傳統(tǒng)教學教學活動中學生就像一口缸一樣是一個“存儲裝置”，而老師擔任的角色就是“灌水者”，教師與學生之間的教學互動模式為“存儲—灌輸—存儲”，教師的教學先是自身存儲，之后“讓學生不斷地接受、記憶和重復(fù)儲存材料”③“對話理論”正是針對傳統(tǒng)教學活動中的“灌輸—存儲”模式提出的。這一理論要求教師與學生，即整個教學活動的參與者都是以一種自主、探索的形式來完成教與學的活動，每個人都可以在教學過程中重新獲得自我意識，開始批判性地看待、認識周圍的世界并積極尋求改造自身及周圍的環(huán)境。閱讀教學不僅僅是簡單的學習語言、生字生詞、理解課文的中心思想和學習寫作的技巧與方法，而更是在不同文化的背景與傳統(tǒng)關(guān)懷下，教師、學生與作者，過去、現(xiàn)在與未來的交流碰撞，是人們精神與思維的內(nèi)在契合與溝通，是一種自主性的發(fā)現(xiàn)與探索。然而在現(xiàn)實的語文閱讀教學過程中，原本內(nèi)涵豐富的“對話教學”變成了機械的“問答教學”。這種“問答教學”刻板地、教條地照搬了“對話理論”，嚴重背離了“對話理論”的實質(zhì)與內(nèi)涵，最終還是走上了傳統(tǒng)式“灌輸——存儲”的老路。首先，在自主開放的熱烈回答問題過程中，學生根本沒有自己的思考，大家都在迎合著老師的要求，在課本中尋找一些不需要思考的答案，回答著“明知故問”的問題。其次，學生后面的回答貌似是在與老師、與文本對話，提出自己的想法與觀點，“頗具”創(chuàng)新的意味，但是這種沒有引導(dǎo)的、嘩眾取寵式的回答其實已經(jīng)嚴重偏離的課程設(shè)置的初衷，沒有起到教育引導(dǎo)的效果，課文的真正內(nèi)涵沒有得到挖掘。最后，整個“對話”過程缺乏真實情感的體驗，更缺乏思想的碰撞與交融，文本實際上游離在學生思考的范圍之外。從理論參照到具體案例的解讀可見看出，“對話理論”的濫用及歪曲是現(xiàn)階段語文閱讀教學的一個重要弊病，“對話”的初衷并沒有顯現(xiàn)在教育教學活動之中，反而影響了教學的效果，降低了學生語文學習的質(zhì)量。1.2教學過程中文本閱讀缺失文本有廣義與狹義之分，在狄爾泰看來所有有待解釋的世界與客觀實在都屬于文本的范疇，因此廣義上的文本可以理解為所有有待解釋的事物。而狹義上的文本則是指任何由書本所記錄的東西。在語文教學活動中文本在狹義的范圍內(nèi)被使用，也就是我們所說的課文。在現(xiàn)階段的語文閱讀教學過程中文本閱讀的缺失也是一個重大問題。造成這種局面的原因集中在兩個方面：首先，在文本閱讀過程中我們經(jīng)常會見到對文本內(nèi)涵的肆意歪曲，也可以看見對文本內(nèi)涵的淺薄分析。上文中所列舉的案例集中體現(xiàn)的這個問題。創(chuàng)新、自主的教學要求并不是讓學生無限制地脫離文本的固有內(nèi)涵而隨意去挖掘理解。這就需要我們還原文本的原貌，尊重作者的初衷，在這個前提之下，再引導(dǎo)學生進行創(chuàng)新與思考。如王富仁先生所說：“語文教學中應(yīng)尊重文本作者的主體性，必須接受作者設(shè)定的特定的空間，必須避免那種純屬于自己的天馬行空般的自由發(fā)揮，必須避免那種脫離開對文本作者的基本理解而進行不著邊際的思想批判和藝術(shù)挑剔?！雹芷浯?，多媒體教學設(shè)備的運用，導(dǎo)致學生文本閱讀能力下降。多媒體作為教學活動的輔助設(shè)備，以其形象性、生動性、及時性、大容量等特點極大地豐富了我們的教育教學活動，也將各科的教育教學帶入了信息化、數(shù)字化的時代。然而事物總是有其兩面性，多媒體輔助教學將老師從辛苦的板書、長時間的手寫備課及查閱資料這些繁重的乏味的工作中解脫出來的同時，也使學生的文本閱讀能力大打折扣。學生在通過多媒體教學設(shè)備來學習時，往往失去了深刻的語言理解與情感體驗。學生與文本的“對話”正如過往煙云，頃刻間消失在人們的視野里，我們不得不清醒地認識到鼠標與鍵盤是永遠替代不了備課本與鋼筆的。如果說“對話”教學還僅僅是教學方法的問題，那么文本閱讀的缺失則傷到語文閱讀教學的要害。對文本的內(nèi)涵的曲解與不著邊際的創(chuàng)新，多媒體教學的濫用嚴重地損傷了學生自我感知、體驗、想象、創(chuàng)新的能力。如果這種狀態(tài)一直持續(xù)下去，其造成的影響不是教學方法上簡單的改進所能彌補的。2初中語文閱讀教學改進的策略針對初中語文閱讀教學中在教學模式與文本閱讀上存在的兩大問題，在改進的對策上我們也應(yīng)該從兩大方面入手，有的放矢。2.1從理論上重建語文教學評價體系，推動教學方式轉(zhuǎn)變新課標在“以生為本”的理念指導(dǎo)下，對語文教學的功能和目的做出了重新的界定，對學生語文能力的培養(yǎng)、語文素養(yǎng)的培養(yǎng)進行了重點強調(diào)，明確了語文教學的落腳點和歸宿，而要實現(xiàn)這些轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵環(huán)節(jié)還是在語文教學的評價方式上。首先，我們要訂立能力型評價指標，轉(zhuǎn)變評價的功能?！痘A(chǔ)教育課程改革綱要（施行）》指出，評價體系自身改革的目標是“改變課程評價過分強調(diào)甄別與選拔的功能，發(fā)揮評價促進學生發(fā)展、教師發(fā)展和改進教學實踐的功能”。⑤這里針對評價本身做了界定，弱化了評價對結(jié)果的認定功能，強化了評價在改進學生、教師實踐上的功能。這種能力性的評價既減輕了教師與學生的應(yīng)試負擔，又提高了教師與學生在教學過程中興趣與積極性。醫(yī)學分子生物學技術(shù)36、如果我們國家的法律中只有某種神靈，而醫(yī)學分子生物學實驗技術(shù)10/18/20222醫(yī)學分子生物學實驗技術(shù)10/15/20222醫(yī)學分子生物學技術(shù)93張課件醫(yī)學分子生物學技術(shù)93張課件醫(yī)學分子生物學技術(shù)93張課件醫(yī)學分子生物學技術(shù)93張課件10/18/2022710/15/20227塔板理論：K＝＝(溶質(zhì)在固定相中的濃度)Cs(溶質(zhì)在流動相中的濃度)Cm把色譜柱比作一個精餾塔，沿用精餾塔中塔板的概念來描述組分在兩相間的分配行為，同時引入理論塔板數(shù)作為衡量柱效率的指標，即色譜柱是由一系列連續(xù)的、相等的水平塔板組成。每一塊塔板的高度用H表示，稱為塔板高度，簡稱板高。

10/18/20228塔板理論：K＝塔板理論假設(shè)：1.在柱內(nèi)一小段長度H內(nèi)，組分可以在兩相間迅速達到平衡。這一小段柱長稱為理論塔板高度H。2.以氣相色譜為例，載氣進入色譜柱不是連續(xù)進行的，而是脈動式，每次進氣為一個塔板體積（ΔVm）。3.所有組分開始時存在于第0號塔板上，而且試樣沿軸（縱）向擴散可忽略。4.分配系數(shù)在所有塔板上是常數(shù)，與組分在某一塔板上的量無關(guān)。10/18/20229塔板理論假設(shè)：10/15/20229

簡單地認為：在每一塊塔板上，溶質(zhì)在兩相間很快達到分配平衡，然后隨著流動相按一個一個塔板的方式向前移動。對于一根長為L的色譜柱，溶質(zhì)平衡的次數(shù)應(yīng)為：n=L/H

n稱為理論塔板數(shù)。與精餾塔一樣，色譜柱的柱效隨理論塔板數(shù)n的增加而增加，隨板高H的增大而減小。10/18/202210簡單地認為：在每一塊塔板上，溶質(zhì)在兩相間很快達到分配平衡，10/18/20221110/15/20221110/18/20221210/15/20221210/18/20221310/15/202213洗脫法也稱沖洗法。工作時，首先將樣品加到色譜柱頭上，然后用吸附或溶解能力比試樣組分弱得多的氣體或液體作沖洗劑。由于各組分在固定相上的吸附或溶解能力不同，被沖洗劑帶出的先后次序也不同，從而使組分彼此分離。流出曲線下圖。層析的展開方式10/18/202214洗脫法也稱沖洗法。工作時，首先將樣品加到色譜柱頭上，然后用吸頂替法是將樣品加到色譜柱頭后，在惰性流動相中加入對固定相的吸附或溶解能力比所有試樣組分強的物質(zhì)為頂替劑（或直接用頂替劑作流動相），通過色譜柱，將各組分按吸附或溶解能力的強弱順序，依次頂替出固定相。很明顯，吸附或溶解能力最弱的組分最先流出，最強的最后流出。頂替法的流出曲線如下圖。10/18/202215頂替法是將樣品加到色譜柱頭后，在惰性流動相中加入對固定相的吸10/18/20221610/15/202216迎頭法是將試樣混合物連續(xù)通過色譜柱，吸附或溶解能力最弱的組分首先一純物質(zhì)的狀態(tài)流出，其次則以第一組分和吸附或溶解能力較弱的第二組分混合物，以此類推。流出曲線如下圖。A+BA10/18/202217迎頭法是將試樣混合物連續(xù)通過色譜柱，吸附或溶解能力最弱的組分層析流出曲線及相關(guān)術(shù)語色譜流出曲線和色譜峰由檢測器輸出的電信號強度對時間作圖，所得曲線稱為色譜流出曲線。曲線上突起部分就是色譜峰。如果進樣量很小，濃度很低，在吸附等溫線（氣固吸附色譜）或分配等溫線（氣液分配色譜）的線性范圍內(nèi)，則色譜峰是對稱的。10/18/202218層析流出曲線及相關(guān)術(shù)語色譜流出曲線和色譜峰10/15/202基線在實驗操作條件下，色譜柱后沒有樣品組分流出時的流出曲線稱為基線，穩(wěn)定的基線應(yīng)該是一條水平直線。峰高色譜峰頂點與基線之間的垂直距離，以（h）表示。10/18/202219基線峰高10/15/202219色譜流出曲線色譜流出曲線和色譜峰基線（a）峰高（h）信號進樣空氣峰色譜峰ha10/18/202220信號進樣空氣峰色譜峰ha10/15/202220保留值

死時間t0

不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)進入色譜柱時，從進樣到出現(xiàn)峰極大值所需的時間稱為死時間，它正比于色譜柱的空隙體積，如下圖。信號進樣t0因為這種物質(zhì)不被固定相吸附或溶解，故其流動速度將與流動相流動速度相近。測定流動相平均線速ū時，可用柱長L與t0的比值計算，即ū=L/t010/18/202221保留值信號進樣t0因為這種物質(zhì)不被固定相吸附或溶解，故信號進樣tr2.保留時間tr試樣從進樣到柱后出現(xiàn)峰極大點時所經(jīng)過的時間，稱為保留時間，如下圖。10/18/202222信號進樣tr2.保留時間tr10/15/2022223.調(diào)整保留時間tr′某組分的保留時間扣除死時間后，稱為該組分的調(diào)整保留時間，即

tr′=tr

t0由于組分在色譜柱中的保留時間tr包含了組分隨流動相通過柱子所須的時間和組分在固定相中滯留所須的時間，所以tr實際上是組分在固定相中保留的總時間。保留時間是色譜法定性的基本依據(jù)，但同一組分的保留時間常受到流動相流速的影響，因此色譜工作者有時用保留體積來表示保留值。10/18/2022233.調(diào)整保留時間tr′10/15/2022234.死體積V0

指色譜柱在填充后，柱管內(nèi)固定相顆粒間所剩留的空間、色譜儀中管路和連接頭間的空間以及檢測器的空間的總和。當后兩相很小可忽略不計時，死體積可由死時間與色譜柱出口的載氣流速Fco（cm3·min-1）計算。

V0=t0Fco式中Fco為扣除飽和水蒸氣壓并經(jīng)溫度校正的流速。僅適用于氣相色譜，不適用于液相色譜。10/18/2022244.死體積V010/15/2022245.保留體積Vr指從進樣開始到被測組分在柱后出現(xiàn)濃度極大點時所通過的流動相的體積。保留時間與保留體積關(guān)系：

Vr=trFco6.調(diào)整保留體積Vr

某組分的保留體積扣除死體積后，稱為該組分的調(diào)整保留體積。

Vr=Vr

V0=trFco

10/18/2022255.保留體積Vr10/15/2022257.相對保留值r2,1某組分2的調(diào)整保留值與組分1的調(diào)整保留值之比，稱為相對保留值。

r2,1=tr2/tr1′=Vr2/Vr1

由于相對保留值只與柱溫及固定相性質(zhì)有關(guān)，而與柱徑、柱長、填充情況及流動相流速無關(guān)，因此，它在色譜法中，特別是在氣相色譜法中，廣泛用作定性的依據(jù)。10/18/2022267.相對保留值r2,110/15/202226在定性分析中，通常固定一個色譜峰作為標準（s），然后再求其它峰（i）對這個峰的相對保留值，此時可用符號表示，即

=tr(i)/tr(s)式中tr(i)為后出峰的調(diào)整保留時間，所以總是大于1的。相對保留值往往可作為衡量固定相選擇性的指標，又稱選擇因子。區(qū)域?qū)挾壬V峰的區(qū)域?qū)挾仁巧V流出曲線的重要參數(shù)之一，用于衡量柱效率及反映色譜操作條件的動力學因素。表示色譜峰區(qū)域?qū)挾韧ǔＳ腥N方法。10/18/202227在定性分析中，通常固定一個色譜峰1.標準偏差

即0.607倍峰高處色譜峰寬的一半。2.半峰寬W1/2

即峰高一半處對應(yīng)的峰寬。它與標準偏差的關(guān)系為W1/2=2.3543.峰底寬度W

即色譜峰兩側(cè)拐點上的切線在基線上截距間的距離。它與標準偏差的關(guān)系是W=410/18/20222810/15/20222810/18/20222910/15/202229從色譜流出曲線中，可得許多重要信息：(i)根據(jù)色譜峰的個數(shù)，可以判斷樣品中所含組分的最少個數(shù)；(ii)根據(jù)色譜峰的保留值，可以進行定性分析；(iii)根據(jù)色譜峰的面積或峰高，可以進行定量分析；(iv)色譜峰的保留值及其區(qū)域?qū)挾龋窃u價色譜柱分離效能的依據(jù)；(v)色譜峰兩峰間的距離，是評價固定相（或流動相）選擇是否合適的依據(jù)。10/18/202230從色譜流出曲線中，可得許多重要信息：10/15/202230三、離子交換層析離子交換層析(ionexchangechromatography)利用物質(zhì)的電荷與層析載體(離子交換劑)電荷之間的相互作用達到分離純化的目的的層析方法稱離子交換層析。離子交換劑：離子交換層析所用的固相基質(zhì)，由不溶于水的、具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子聚合物組成。10/18/202231三、離子交換層析離子交換層析(ionexchangech10/18/20223210/15/202232離子交換層析的操作1、樣品的準備：固體樣品必須溶于適當離子強度和pH的緩沖液中。組織液或細胞裂解液用緩沖液稀釋后可直接上柱。鹽析樣品必須除鹽后才能進行分離。2、離子交換劑的處理：根據(jù)被分離樣品的性質(zhì)選擇合適的離子交換劑，離子交換劑在使用前須先進行處理。10/18/202233離子交換層析的操作1、樣品的準備：固體樣品必須溶于適當離子強3、層析柱的準備：離子交換層析柱一般選擇粗短柱為宜，使得樣品在分離的同時進行濃縮。離子交換劑的用量根據(jù)樣品量和交換劑的交換容量確定。4、樣品分離：上樣量的多少與目的蛋白的性質(zhì)、濃度及交換劑的親和力有關(guān)。在分離過程中，應(yīng)注意10/18/2022343、層析柱的準備：離子交換層析柱一般選擇粗短柱為宜，使得樣品1）樣品的濃度不宜過大2）溶解蛋白質(zhì)樣品的緩沖液的離子強度要低于起始緩沖液3）上樣速度不要過快4）上樣緩沖液的pH應(yīng)合適5、洗脫10/18/2022351）樣品的濃度不宜過大5、洗脫10/15/2022356、洗脫液的鑒定和回收7、離子交換劑的再生與儲存10/18/2022366、洗脫液的鑒定和回收7、離子交換劑的再生與儲存10/15/10/18/20223710/15/202237兔γ－球蛋白的木瓜蛋白酶水解物在CM纖維素柱上的層析分離10/18/202238兔γ－球蛋白的木瓜蛋白酶水解物在CM纖維素柱上的層析分離10天花粉各成分用特種離子交換劑層析分離10/18/202239天花粉各成分用特種離子交換劑層析分離10/15/20223910/18/20224010/15/20224010/18/20224110/15/202241二、分子篩原理10/18/202242二、分子篩原理10/15/20224210/18/20224310/15/20224310/18/20224410/15/202244凝膠過濾的分配系數(shù)K=(Ve-V0)(Vi)10/18/202245凝膠過濾的分配系數(shù)K=(Ve-V0)(V主要凝膠過濾介質(zhì)的牌號及骨架結(jié)構(gòu)10/18/202246主要凝膠過濾介質(zhì)的牌號及骨架結(jié)構(gòu)10/15/202246葡聚糖凝膠(G)型號分離范圍(分子量)吸水量(克／克干凝膠)膨脹體積(毫升／克干凝膠)浸泡時間蛋白質(zhì)多糖20～25℃90~100℃10<700<7001.02-33115<1500<15001.52.5-3.531251000-5000100-50002.54-631501500-30000500-100005.09-1131753000-700001000-500007.512-152431004000-1500001000-1000001015-207251505000-4000001000-1500001520-307252005000-8000001000-2000002030-4072510/18/202247葡聚糖凝膠(G)型分離范圍(分子量)吸水量(克／克干凝膠)膨親和層析：利用生物分子間特殊的親和關(guān)系進行的分離方法。是蛋白質(zhì)分離純化的最有效的方法之一，有時甚至可以僅用一步純化即可達到純化目的。只要被分離蛋白、配基和載體之間能形成以下的關(guān)系，即可進行親和層析10/18/202248親和層析：利用生物分子間特殊的親和關(guān)系進行的分離方法。是蛋白10/18/20224910/15/202249基本原理：親和層析法利用了生命現(xiàn)象中生物分子之間非常特異的相互作用而進行分離純化的方法。生物體內(nèi)能發(fā)生特異的相互作用的成分有：酶與酶的底物酶與酶的抑制劑酶與酶的變構(gòu)效應(yīng)劑酶與酶的輔酶激素與細胞膜上的受體維生素與結(jié)合蛋白核酸抗原與抗體外源凝集素與紅細胞表面的抗原10/18/202250基本原理：親和層析法利用了生命現(xiàn)象中生物分子之間非常特異的相特異性強分辨率高回收率高層析柱的再生方便親和層析特點特別適用于微量生物活性物質(zhì)的分離10/18/202251特異性強分辨率高回收率高層析柱的再生方便親和層析特點特別適用電泳

是指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)象

正極負極帶負電粒子帶正電粒子蛋白質(zhì)的電泳分離10/18/202252電泳是指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)++++++++--------++++++++--------蛋白質(zhì)膠體顆粒的沉淀

帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)酸酸堿堿脫水脫水脫水不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒（沉淀）帶正電荷的蛋白質(zhì)（疏水膠體）帶負電荷的蛋白質(zhì)（疏水膠體）堿酸（親水膠體）（親水膠體）（親水膠體）10/18/202253++++++++++++++++帶電顆粒在電場中所受到的電場力F=EQ根據(jù)Stoke定律，球形分子在液體中泳動所受到的阻力F’=6πrηv電泳原理：10/18/202254帶電顆粒在電場中所受到的電場力F=F’即：EQ=6πrηv時，V=EQ6πrη當物質(zhì)在電場中移動時，受到電場力和液體阻力兩方面的力的影響，當電場力和阻力平衡時，帶電顆粒作勻速運動，10/18/202255

兩個帶電顆粒能否分開，由兩個顆粒在電泳過程中的遷移率所決定，即U=dlVt或d=UVtldU==VEtVl=dlVt或d1-d2=(U1-U2)VtlΔd=10/18/202256兩個帶電顆粒能否分開，由兩個顆粒在電泳過程中遷移率（或泳動度）是指帶電顆粒在單位電場強度下泳動的速度，可用下列公式計算：

Ｕ=υ/E=(d/t)/(V/l)=dl/Vt

Ｕ為遷移率（cm2·V-1·min-1）；υ為顆粒泳動速度（cm·s-1）；E為電場強度（V·cm-1）；d為顆粒泳動的距離（cm）；l為濾紙有效長度（cm）；V為實際電壓（V）；t為通電時間（s或min）。通過測量d,l,V,t,即可計算出被分離物質(zhì)的遷移率。

10/18/202257遷移率（或泳動度）是指帶電顆粒在單位電場強度下泳動的速度，可影響電泳的因素1、帶電粒子的性質(zhì)與電泳行為2、電場強度對帶電粒子遷移的影響：電場強度也稱電位梯度，是指單位長度（每一厘米）支持物體上的電位降，它對泳動速度起著十分重要的作用。一般，電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。10/18/202258影響電泳的因素1、帶電粒子的性質(zhì)與電泳行為2、電場強度對帶電3、溶液的pH對帶電粒子遷移的影響：溶液的pH值決定了帶電顆粒解離的程度，也決定了物質(zhì)所帶凈電荷的多少。4、電滲對電泳的影響：電滲是在電場中液體對固體的相對移動。10/18/2022593、溶液的pH對帶電粒子遷移的影響：溶液的pH值決定了帶電顆電滲作用10/18/202260電滲作用10/15/202265、離子強度對電泳的影響：電泳液中的離子增加會使電泳遷移率降低，原因是帶電的離子會吸引相反符號的離子聚集在其周圍，形成一個與運動粒子符號相反的離子氛，它使該離子向相反的方向運動，從而降低了該粒子的遷移率。10/18/2022615、離子強度對電泳的影響：電泳液中的離子增加會使電泳遷移率降6、溫度對的電泳的影響：電泳過程中由于通電產(chǎn)生焦耳熱，熱對電泳有很大的影響。溫度每升高1℃，遷移率約增加2.4%。為降低熱效應(yīng)對電泳的影響，可控制電壓或電流，或在電泳系統(tǒng)中安裝冷卻散熱裝置。10/18/2022626、溫度對的電泳的影響：10/15/202262電泳的分類和特點電泳的分類自由移動界面電泳區(qū)帶電泳穩(wěn)態(tài)電泳10/18/202263電泳的分類和特點電泳的分類自由移動界面電泳區(qū)自由移動界面電泳（movingboundaryelectrophoresis），沒有支持物，在一個U形管中進行電泳，目前已被區(qū)帶電泳所取代。區(qū)帶電泳（zoneelectrophoresis）在一定的支持物上進行的電泳，電泳結(jié)果形成一條條的區(qū)帶而得名。穩(wěn)態(tài)電泳（steadystateelectrophoresis）帶電顆粒電泳一定時間后達到穩(wěn)態(tài)而停止移動。10/18/202264自由移動界面電泳（movingbounda10/18/20226510/15/202265聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺Acr和交聯(lián)劑N,N’-甲叉雙丙烯酰胺Bis聚合而成10/18/202266聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegele10/18/20226710/15/202267聚合過程需要有催化劑參加，有兩種聚合方式，化學聚合和光聚合。催化劑包括引發(fā)劑和加速劑兩部分組成?；瘜W聚合反應(yīng)的引發(fā)劑常為過硫酸銨，過硫酸銨首先形成自由基，通過自由基傳遞，使丙烯酰胺成為自由基，發(fā)動聚合反應(yīng)。加速劑四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine，TEMED）可加快引發(fā)劑釋放自由基的速度；光學聚合反應(yīng)的引發(fā)劑為核黃素。10/18/202268聚合過程需要有催化劑參加，有兩種聚合方式，化聚丙烯凝膠的特點①在一定濃度時，凝膠透明，有彈性，機械性能好；②化學性能穩(wěn)定，與被分離物不發(fā)生化學反應(yīng)；③對pH和溫度變化較穩(wěn)定；④幾乎無電滲作用，只要Acr純度高，操作條件一致，則樣品分離重復(fù)性極好。⑤樣品不易擴散，且用量少，其靈敏度可達10-6g。⑥凝膠孔徑可通過選擇單體及交聯(lián)劑的濃度調(diào)節(jié)。⑦分辯率高，尤其在不邊疆凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)為一體。10/18/202269聚丙烯凝膠的特點①在一定濃度時，凝膠透明，有彈性，機械性能好凝膠孔徑及其有關(guān)性質(zhì)①凝膠性能與總濃度及交聯(lián)度的關(guān)系凝膠的孔徑、機械性能、彈性、透明度、黏度和聚合程度取決于凝膠總濃度和Acr與Bis之比。T（Acr和Bis總濃度）%=×100%a+bmc（交聯(lián)劑百分比）%=×100%ba+b10/18/202270凝膠孔徑及其有關(guān)性質(zhì)①凝膠性能與總濃度及交聯(lián)度的關(guān)系凝膠a/b與凝膠的機械性能密切相關(guān)。當（a/b）<10時，凝膠脆而易碎，堅硬呈乳白色；（a/b）>100時，即使5%的凝膠也呈糊狀，易于斷裂。欲制備完全透明而又有彈性的凝膠，應(yīng)控制（a/b）=30左右。T一般為5%~10%。②凝膠濃度與孔徑的關(guān)系T與c不僅與凝膠的機械性能有關(guān)，還與凝膠的孔徑關(guān)系極為密切。一般講，T越大，孔徑越小。此外，孔徑還同Bis與Acr的比例有關(guān)，Bis占Acr總濃度5%時，孔徑最小。③凝膠濃度與被分離物相對分子質(zhì)量有關(guān)。10/18/202271a/b與凝膠的機械性能密切相關(guān)。當（a/b10/18/20227210/15/202272聚丙烯酰胺凝膠電泳垂直平板電泳水平板電泳圓盤電泳連續(xù)電泳不連續(xù)電泳Disc電泳10/18/202273聚丙烯酰胺凝膠電泳垂直平板電泳水平板電泳圓盤電泳連續(xù)電泳不連丙烯酰胺凝膠電泳的應(yīng)用

聚丙烯酰胺凝膠電泳根據(jù)其有無濃縮效應(yīng)，可分為連續(xù)的和不連續(xù)的兩類

。前者指整個電泳系統(tǒng)中所用緩沖液，pH值和凝膠網(wǎng)孔都是相同的；后者是指在電泳系統(tǒng)中采用了兩種或兩種以上的緩沖液、pH值和孔徑，不連續(xù)電泳能使稀的樣品在電泳過程中濃縮成層，從而提高分辨能力。

10/18/202274丙烯酰胺凝膠電泳的應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳根據(jù)其有無濃縮效應(yīng)在不連續(xù)PAGE系統(tǒng)里，存在三種物理效應(yīng),，即電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)和濃縮效應(yīng)。１、電荷效應(yīng)：各種蛋白質(zhì)按其所帶電荷的種類及數(shù)量，在電場向一定電極，以一定速度泳動。２、分子篩效應(yīng)：區(qū)別不同大小分子種類的能力是凝膠所具有的一種篩分大小的能力即分子篩效應(yīng)。這種效應(yīng)與凝膠過濾過程中的情況不同。

10/18/202275在不連續(xù)PAGE系統(tǒng)里，存在三種物理效應(yīng),，即電荷效應(yīng)、分子濃縮效應(yīng)10/18/202276濃縮效應(yīng)10/15/20227610/18/20227710/15/20227710/18/20227810/15/