第五章實驗動物質(zhì)量監(jiān)測

遺傳質(zhì)量監(jiān)測微生物學(xué)與寄生蟲學(xué)監(jiān)測飼料質(zhì)量監(jiān)控環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測10/16/20221實驗動物物質(zhì)量監(jiān)監(jiān)測的意意義生物學(xué)實實驗研究究的四個個基本條條件Animal，，Equipment，Information，Reagent，，簡稱稱AEIR四要素這4個要要素在整整個實驗驗研究中中具有同同等重要要的地位位，不能能忽略或或偏廢。。事實上上，實驗動物物質(zhì)量往往往成為為制約性性要素，影響整整個實驗驗的質(zhì)量量和水平平實驗動物物質(zhì)量監(jiān)監(jiān)測是實實驗動物物科學(xué)的的重要內(nèi)內(nèi)容，是是確保實實驗動物物質(zhì)量的的必要手手段。2/8//20202實驗工作作人員的的健康和和生命的的保證常見的人人畜共患患?。毫髁餍行猿龀鲅獰?、、狂犬病病、猴B病毒、、淋巴細(xì)細(xì)胞脈絡(luò)絡(luò)叢腦膜膜炎病毒毒、利什什曼原蟲蟲等2/8//20203動物生產(chǎn)產(chǎn)和繁殖殖的保證證動物一旦旦染上傳傳染病，，則種群群難以凈凈化，一一些烈性性傳染病病如鼠痘痘、兔病病毒性出出血癥等等可致動動物全軍軍覆沒，，造成巨巨大經(jīng)濟濟損失。。2/8//20204實驗結(jié)果果準(zhǔn)確性性、規(guī)律律性、重重復(fù)性的的保證2/8//20205實驗動物物質(zhì)量監(jiān)監(jiān)測主要要包括以以下幾個個方面：：遺傳質(zhì)質(zhì)量、微微生物與與寄生蟲蟲質(zhì)量、、飼料質(zhì)質(zhì)量、環(huán)環(huán)境質(zhì)量量監(jiān)測。。2/8//20206第一節(jié)遺遺傳傳質(zhì)量監(jiān)監(jiān)測實驗動物物的遺傳傳背景與與反應(yīng)特特性，是是影響實實驗結(jié)果果的重要要因素。。不同遺遺傳背景景與反應(yīng)應(yīng)特性的的實驗動動物，對對同一刺刺激有時時可引起起不同質(zhì)質(zhì)和量的的反應(yīng)。。為了保保存實驗驗動物品品種品系系特性。。使實驗驗動物使使用者在在動物實實驗中能能得到正正確的、、可重復(fù)復(fù)的科學(xué)學(xué)數(shù)據(jù)，，保證生生物醫(yī)學(xué)學(xué)研究的的良好效效果，實實驗動物物生產(chǎn)者者在嚴(yán)格格遵守品品系繁育育技術(shù)路路線的同同時，還還必須努努力做好好實驗動動物遺傳傳質(zhì)量的的嚴(yán)格監(jiān)監(jiān)測，以以防止實實驗動物物遺傳上上的污染染和變異異。2/8//20207如：BALB/c對對放射線線比其他他品系更更為敏感感。C57BL/6腫瘤發(fā)發(fā)生率低低，A系系高。BALB/c和和C3H小鼠對對鼠傷寒寒沙門氏氏菌的敏敏感性存存在顯著著差異SHR為為自發(fā)性性高血壓壓大鼠，，心血管管疾病發(fā)發(fā)生率高高

2/8//20208一、群體體管理管理上人人為的粗粗心最易易引起遺遺傳上的的混雜，，所以對對育種群群進(jìn)行恰恰當(dāng)?shù)墓芄芾硎潜１ＷC遺傳傳質(zhì)量的的最有效效方法。。每一個個實驗動動物育種種機構(gòu)都都應(yīng)當(dāng)認(rèn)認(rèn)真執(zhí)行行良好的的育種制制度，完完善地保保持育種種記錄，，基礎(chǔ)群群應(yīng)有系系譜記錄錄。而要要做到以以上要求求，最重重要的因因素就是是要有訓(xùn)訓(xùn)練有素素、經(jīng)驗驗豐富的的技術(shù)人人員，他他們應(yīng)懂懂得育種種體系和和方法、、記錄方方法、動動物遺傳傳學(xué)、實實驗動物物學(xué)等知知識。2/8//20209二、免疫疫學(xué)標(biāo)記記監(jiān)測（一）皮皮膚移植植法這是目前前最常用用和最靈靈敏的檢檢測亞系系內(nèi)或亞亞系間組組織相容容性基因因差異的的方法。。在小鼠鼠和大鼠鼠中普遍遍采用的的是尾部部或背部部皮膚移移植法。。皮膚移移植法靈靈敏度高高。易掌掌握，經(jīng)經(jīng)濟。不不需昂貴貴設(shè)備，，易對植植皮成活活情況進(jìn)進(jìn)行觀察察和判斷斷。由于于手術(shù)創(chuàng)創(chuàng)傷小，，動物對對移植創(chuàng)創(chuàng)傷的抵抵抗力強強。所以以不會影影響檢測測結(jié)果。?？蓹z測測出許多多H基因因。并能能有效地地測出新新發(fā)生的的、造成成亞系變變異的遺遺傳混雜雜和突變變。2/8//202010（二）混混合淋巴巴細(xì)胞反反應(yīng)混合淋巴巴細(xì)胞反反應(yīng)的原原理為：：異源動動物或遺遺傳上有有差異個個體的淋淋巴細(xì)胞胞混合或或培養(yǎng)相相當(dāng)時間間后，這這些細(xì)胞胞都開始始增大，，合成DNA、、RNA、蛋白白質(zhì)，甚甚至進(jìn)一一步裂解解。這是是植皮排排斥反應(yīng)應(yīng)辨別和和擴增階階段的體體內(nèi)對應(yīng)應(yīng)方法，，其結(jié)果果可預(yù)測測體內(nèi)植植皮一宿宿主反應(yīng)應(yīng)。此反反應(yīng)結(jié)果果可在7～9天獲獲得，定定期地從從群體中中抽取足足夠量的的動物進(jìn)進(jìn)行監(jiān)測測能夠維維護實驗驗動物的的品質(zhì)。。2/8//202011（三）淋淋巴組織織移植用供體的的均質(zhì)淋淋巴器官官，如骨骨髓、脾脾、淋巴巴結(jié)、胸胸腺或胚胚胎肝臟臟制備出出單細(xì)胞胞懸液。。然后將將適量活活細(xì)胞通通過靜脈脈或腹腔腔注射到到受體動動物體內(nèi)內(nèi)，組織織相容性性由受體體中存活活者及脾脾增大者者來確定定，也可可以用放放射學(xué)方方法。根根據(jù)移植植細(xì)胞的的存活數(shù)數(shù)測定。。2/8//202012三、生化化標(biāo)記監(jiān)監(jiān)測通過多種種形式的的電泳和和電聚集集．可檢檢定生化化標(biāo)記即即同工酶酶或蛋白白質(zhì)，常常用的電電泳介質(zhì)質(zhì)有乙酸酸纖維素素膜、淀淀粉凝膠膠、聚丙丙烯酰胺胺凝膠。。每一種種標(biāo)記系系統(tǒng)都需需要將緩緩沖液、、溫度、、時間、、電壓和和電流調(diào)調(diào)整到最最佳值．．并做特特異性染染色，最最后將得得到的帶帶型與公公布的生生化遺傳傳圖式進(jìn)進(jìn)行比較較。如中中華人民民共和國國國家標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)GB；T14923-2001公布9種常用用近交系系大鼠生生化位點點標(biāo)記基基因(表表5-2)。2/8//202013表5-2常用近交交系大鼠鼠生化位位點標(biāo)記記基因StrainAkp1Cs2Es1Es3Es4Es6Es8Es9F344/NaaaababaLOU/CaaaabbbaSHRababaabaWKYbbadbaacLEW/MaaadbabcACIbababbba2/8//202014四、骨骼骼形態(tài)特特征監(jiān)測測常采用““下頜骨骨分析法法”來鑒鑒別和檢檢測大小小鼠的亞亞系變異異。將年齡、、性別、、體重相相當(dāng)?shù)拇蟠笫蠡蛐⌒∈筇幩浪篮?，小小心剪下下頭部，，煮沸2～3min以以上，加加入蛋白白水解酶酶，37℃恒溫溫保持過過夜，剔剔除殘余余肌肉，，除去切切齒，仔仔細(xì)分辨辨出右下下頜骨，，加以標(biāo)標(biāo)記，在在直角坐坐標(biāo)系上上測量出出多個形形態(tài)特征征參考點點距離。。將所有有測量的的平均數(shù)數(shù)作統(tǒng)計計分析，，利用判判別函數(shù)數(shù)確定下下頜骨形形狀。如如果測量量值集中中，則表表明被測測亞系間間無顯著著的遺傳傳變異。。2/8//202015五、染色色體帶型型監(jiān)測可以利用用染色體體分帶技技術(shù)，鑒鑒別C帶帶和Q帶帶作為染染色體標(biāo)標(biāo)記，用用來區(qū)分分大、小小鼠的近近交系，，在多數(shù)數(shù)大、小小鼠的近近交系中中，所有有中期染染色體都都存在C帶材料料，同源源染色體體的C帶帶區(qū)域大大小相同同；不同同的近交交系，C帶材料料大小不不同，是是品系特特異的，，是一種種很有價價值的檢檢測亞系系變異和和混雜來來源的方方法。2/8//202016六、現(xiàn)代代分子生生物學(xué)技技術(shù)在遺遺傳監(jiān)測測中的應(yīng)應(yīng)用傳統(tǒng)的遺遺傳監(jiān)測測方法來來源于過過去研究究者對哺哺乳動物物進(jìn)行遺遺傳分析析時采用用的研究究手段。。隨著分分子生物物學(xué)技術(shù)術(shù)的發(fā)展展，分子子生物學(xué)學(xué)技術(shù)有有可能取取代傳統(tǒng)統(tǒng)的遺傳傳監(jiān)測方方法，其其優(yōu)點是是多態(tài)性性高，位位點豐富富，實驗驗技術(shù)成成熟，直直接涉及及生物的的遺傳基基礎(chǔ)，DNA樣樣品容易易保存和和運輸?shù)鹊鹊取，F(xiàn)現(xiàn)將在遺遺傳監(jiān)測測中有著著廣泛應(yīng)應(yīng)用前景景的幾種種分子生生物學(xué)方方法介紹紹如下：：2/8//2020171．限制制性片斷斷長度多多態(tài)(RFLP)技術(shù)術(shù)當(dāng)動物基基因組DNA被被限制性性內(nèi)切酶酶消化時時，酶能能夠識別別雙鏈DNA鏈鏈上的特特定核苷苷酸序列列，并在在每條DNA鏈鏈上切割割產(chǎn)生一一個切口口，將雙雙鏈DNA分子子斷開而而形成3`-OH和5`-P末端，，使DNA裂解解為片斷斷。這些些片斷的的長度在在動物群群體中存存在變異異，造成成多態(tài)現(xiàn)現(xiàn)象。通通過DNA電泳泳和DNA探針針分子雜雜交技術(shù)術(shù)，即可可觀察到到不同帶帶型。2/8//202018例如：位位于小鼠鼠第2號號染色體體補體--5（complement-5））位點((He))的pC5探針針，當(dāng)用用HindⅢ消消化小鼠鼠DNA時，C3H品品系將產(chǎn)產(chǎn)生一條條2.7kb的的帶型，，而AKP品系系將產(chǎn)生生6.0kb和和4.6kb兩兩條帶型型。從而而可以在在He位位點上區(qū)區(qū)別這兩兩個品系系。目前前所報道道的RFLP位位點已多多達(dá)1098個個，給遺遺傳學(xué)研研究帶來來許多便便利條件件。2/8//2020192．簡單單序列長長度多態(tài)態(tài)(SSLP))技術(shù)簡單序列列長度多多態(tài)位點點是動物物基因內(nèi)內(nèi)廣泛存存在的由由l～4個核苷苷酸組成成的成串串的重復(fù)復(fù)序列，，又稱為為微衛(wèi)星星(microsatellite)。。估計這這樣的DNA結(jié)結(jié)構(gòu)在哺哺乳動物物基因組組內(nèi)的數(shù)數(shù)目多達(dá)達(dá)5萬～～10萬萬個。目目前在小小鼠已發(fā)發(fā)現(xiàn)有6000個之多多。在每每個特定定的位點點上，重重復(fù)序列列的長度度在不同同品系中中存在著著差異。。采用夾夾在這些些序列兩兩端的引引物，通通過聚合合酶鏈?zhǔn)绞椒磻?yīng)((PCR)和電電泳，就就能觀察察到這些些位點的的差異，，從而區(qū)區(qū)分不同同的品系系。2/8//202020例如：小小鼠第16條染染色體的的D16Mit4位點點，其PCR產(chǎn)產(chǎn)物的大大?。╞p）在在常用近近交系中中分別如如下：C57BL/6-132，DBA//2-123，，A/J-147，C3H-123，BALB/c--149，AKR-126，，CBA-132。SSLP測試技技術(shù)比RFLP技術(shù)簡簡便，多多態(tài)性高高，需要要的DNA樣品品較少，，引物容容易獲得得，推廣廣應(yīng)用前前景可觀觀。2/8//2020213．DNA指紋紋(fingerprinting)技技術(shù)上述兩種種DNA技術(shù)是是針對單單個DNA位點點進(jìn)行的的測試。。DNA指紋技技術(shù)一次次可同時時測試多多個位點點，所以以有一定定的優(yōu)勢勢。DNA指紋紋技術(shù)經(jīng)經(jīng)過電泳泳后可獲獲得十幾幾到幾十十條帶，，而這些些帶型在在個體之之間或品品系之間間有差異異，如同同人類的的指紋在在每個人人都不同同一樣，，因此而而得名。。通常有有兩種方方法獲得得DNA指紋圖圖。一是是用限制制性內(nèi)切切酶和小小衛(wèi)星探探針技術(shù)術(shù)獲得的的DNA指紋。。二是用用較短的的隨機擴擴增引物物或小衛(wèi)衛(wèi)星引物物，通過過PCR而獲得得的DNA指紋紋。2/8//202022DNA指指紋圖譜譜有時在在亞系或或亞群之之間有區(qū)區(qū)別，所所以對亞亞系的監(jiān)監(jiān)測十分分有用。。但是DNA指指紋的結(jié)結(jié)果因為為電泳帶帶太多而而不好辨辨認(rèn)和比比較。因因此，也也影響其其在遺傳傳監(jiān)測和和其他研研究中的的應(yīng)用。。目前所所做的DNA指指紋比上上述兩種種DNA技術(shù)少少，但隨隨著研究究的深入入和方法法的改進(jìn)進(jìn)，將來來一定會會有所突突破。2/8//2020234．隨機機擴增多多態(tài)（RAPD）技術(shù)術(shù)RAPD技術(shù)是是20世世紀(jì)90年代發(fā)發(fā)展起來來的一種種簡便、、快捷的的檢測基基因組DNA多多態(tài)性的的遺傳標(biāo)標(biāo)記技術(shù)術(shù)。該項項技術(shù)首首先將動動物目的的基因組組DNA提純、、酶切，，用含10個堿堿基的隨隨機引物物，對DNA進(jìn)進(jìn)行PCR擴增增，經(jīng)電電泳，便便可在多多個位點點上得到到擴增產(chǎn)產(chǎn)物。各各種DNA多態(tài)態(tài)分析方方法，2/8//202024如：DNA指紋紋、限制制性片段段長度多多態(tài)(RFLP)等，，雖然可可直接檢檢測基因因組的遺遺傳變異異，但都都不同程程度地存存在操作作復(fù)雜、、需要特特異性操操作、需需要事先先知道動動物基因因組DNA序列列等不足足。而RAPD技術(shù)，，由于引引物可任任意改變變，有可可能找到到任何一一個個體體特異的的RAPD標(biāo)記記，從而而為實驗驗動物的的遺傳檢檢測和分分析提供供一個十十分有效效的工具具。2/8//202025七、遺傳傳性狀監(jiān)監(jiān)測結(jié)果果的分析析當(dāng)被檢查查的遺傳傳性狀與與每個品品系的遺遺傳概貌貌圖一致致時，同同時遺傳傳管理資資料清晰晰、可信信，可以以認(rèn)為有有關(guān)品系系的繁育育生產(chǎn)正正在正確確地進(jìn)行行，該品品系的動動物遺傳傳質(zhì)量合合格；若若與遺傳傳概貌圖圖不一致致時，可可以考慮慮以下原原因：2/8//2020261．遺傳傳污染((geneticcontamination)這是最常常見的遺遺傳變異異，往往往是由于于遺傳學(xué)學(xué)管理不不善所致致。另外外，相同同毛色的的動物品品系在同同一個飼飼養(yǎng)單元元中繁育育、維持持，非常常容易產(chǎn)產(chǎn)生品系系間的錯錯誤交配配。這種種情況如如發(fā)現(xiàn)得得早，在在被檢查查的性狀狀中至少少可以觀觀察到一一個以上上基因標(biāo)標(biāo)記發(fā)生生改變，，出現(xiàn)雜雜合型，，或與遺遺傳概貌貌不符的的其他表表型；如如果發(fā)現(xiàn)現(xiàn)得較遲遲，一些些雜合基基因可隨隨機地固固定為單單一的純純合型，，但與原原品系的的遺傳概概貌不一一致。出出現(xiàn)上述述情況均均應(yīng)淘汰汰原品系系，更換換來源清清楚、質(zhì)質(zhì)量合格格的動物物作為新新種，重重新進(jìn)行行品系的的繁育。。2/8//2020272.遺遺傳漂漂變(geneticdrift)遺傳漂變變是指一一個品種種或品系系動物基基因型在在飼養(yǎng)的的過程中中可能發(fā)發(fā)生隨機機的改變變。這種種改變多多由于近近交系動動物部分分雜合基基因尚未未純合時時即進(jìn)行行了分系系，造成成了亞系系和支系系的形成成。監(jiān)測測時可以以看到一一個品系系所有的的動物在在1～2個基基因標(biāo)記記上與原原品系的的遺傳概概貌不符符，但表表型一致致又均為為純合型型。這種種情況在在經(jīng)同系系異體移移植試驗驗排除了了遺傳污污染后需需按照亞亞系和支支系重新新命名。。2/8//2020283．遺傳傳突變((mutation))遺傳突變變在哺乳乳類動物物中的頻頻率為10～5。在在分析監(jiān)監(jiān)測結(jié)果果時，如如果僅看看到一只只動物單單個基因因標(biāo)記出出現(xiàn)雜合合型，應(yīng)應(yīng)考慮有有否發(fā)生生遺傳突突變。為為了證實實此點，，往往需需要根據(jù)據(jù)動物編編號查詢詢該只動動物同窩窩兄妹或或雙親的的基因標(biāo)標(biāo)記表型型。如遺遺傳突變變發(fā)生在在親代，，則同窩窩兄妹均均應(yīng)為雜雜合型或或分離產(chǎn)產(chǎn)生不同同的表型型。2/8//202029如果在同同窩兄妹妹或雙親親中該基基因標(biāo)記記的表型型與遺傳傳概貌圖圖一致，，應(yīng)考慮慮被測個個體發(fā)生生了遺傳傳突變。。在檢查查時如同同時發(fā)現(xiàn)現(xiàn)其他基基因標(biāo)記記的表型型與遺傳傳概貌圖圖不符，，無論是是雜合型型還是純純合型均均應(yīng)考慮慮發(fā)生了了遺傳污污染，應(yīng)應(yīng)立即淘淘汰換種種。遺傳傳突變?nèi)缛鐭o特殊殊保留價價值，在在剔除突突變的個個體后，，整個品品系可以以繼續(xù)保保存；如如有保存存價值，，可將突突變個體體單獨培培育成同同源突變變近交系系。2/8//202030第二節(jié)微微生生物學(xué)與與寄生蟲蟲學(xué)監(jiān)測測如何控制制微生物物和寄生生蟲，是是實驗動動物標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化的主主要內(nèi)容容之一。。一般而而言，科科研中使使用的實實驗動物物，其微微生物和和寄生蟲蟲的控制制級別越越高，其其結(jié)果就就越精確確、越可可靠。2/8//202031一、監(jiān)測測意義1．在人工工飼養(yǎng)的的開放環(huán)環(huán)境中，，實驗動動物被集集中飼養(yǎng)養(yǎng)，由于于活動空空間相對對狹小，，實驗動動物繁殖殖快、數(shù)數(shù)量多，，同時受受到外界界各種病病原微生生物以及及寄生蟲蟲的干擾擾，極易易導(dǎo)致疾疾病的爆爆發(fā)與流流行。實實驗動物物疾病的的爆發(fā)，，除造成成動物死死亡外，，還會干干擾實驗驗的順利利進(jìn)行，，引起生生物制品品的污染染，對人人類健康康產(chǎn)生危危害。因因此對實實驗動物物進(jìn)行微微生物、、病毒與與寄生蟲蟲的監(jiān)控控，對保保證實驗驗研究的的順利進(jìn)進(jìn)行和工工作人員員的身體體健康具具有十分分重要的的意義。。2/8//202032定期對各各級實驗驗動物群群進(jìn)行微微生物學(xué)學(xué)、寄生生蟲學(xué)監(jiān)監(jiān)測，以以確定各各級實驗驗動物是是否符合合原定級級別，即即是否有有原級別別不應(yīng)有有的病原原體的入入侵，以以便及早早采取措措施，以以免疫情情擴大而而蒙受更更大的損損失。另另一方面面，要避避免科學(xué)學(xué)工作者者誤用下下合適的的動物，，避免人人獸共患患病病原原體感染染飼養(yǎng)人人員，保保障這些些人員的的健康。。2/8//2020332．對實實驗動物物飼養(yǎng)設(shè)設(shè)施的監(jiān)監(jiān)測，為為確保這這些設(shè)施施能否控控制微生生物污染染提供依依據(jù)。3．對引引進(jìn)的實實驗動物物進(jìn)行檢檢疫，避避免病原原體入侵侵原有的的動物群群。4．如動動物群發(fā)發(fā)生疾病病，為了了確證病病原，對對患病動動物進(jìn)行行病原學(xué)學(xué)診斷，，積累對對疾病的的認(rèn)識，，收集菌菌株和毒毒株，進(jìn)進(jìn)一步研研究病原原，為診診斷試劑劑和疫苗苗的制備備提供菌菌株和毒毒株。2/8//202034二、監(jiān)測測方法（一）實實驗動物物病毒學(xué)學(xué)檢測方方法1．血清清學(xué)檢測測適用于各各級各類類實驗動動物的經(jīng)經(jīng)常性檢檢測和疫疫情普查查。常用用方法有有：酶聯(lián)聯(lián)免疫吸吸附試驗驗(ELISA)、免免疫熒光光試驗((IFA)、免免疫酶染染色試驗驗(IEA)、、血凝試試驗(HA)、、血凝抑抑制試驗驗(HI)、病病毒中和和試驗、、補體結(jié)結(jié)合試驗驗、瓊脂脂擴散試試驗。2/8//2020352．病原原學(xué)檢測測適用于動動物群中中有疾病病流行，，需要檢檢出病毒毒或確認(rèn)認(rèn)病毒存存在的情情況。檢檢測方法法有：病病毒分離離與鑒定定，病毒毒顆粒、、抗原或或核酸的的檢出，，潛在病病毒的激激活，抗抗體產(chǎn)生生試驗等等。例如如：采用用免疫組組化的方方法在光光鏡下檢檢查病變變組織中中的特異異性抗原原。采用用HA或或HI方方法檢查查患病動動物排泄泄物或組組織懸液液中的血血凝素抗抗原；采采用電鏡鏡或免疫疫電鏡技技術(shù)檢查查組織或或排泄物物中的病病毒顆粒粒；采用用聚丙烯烯酰胺凝凝膠電泳泳(PAGE))檢查病病毒基因因組；采采用核酸酸分子雜雜交技術(shù)術(shù)或聚合合酶鏈反反應(yīng)(PCR))檢出組組織或排排泄物中中的病毒毒核酸。。2/8//202036（二）實實驗動物物細(xì)菌學(xué)學(xué)檢測方方法最常用的的方法是是病原菌菌的分離離與培養(yǎng)養(yǎng)或進(jìn)行行動物接接種。部部分病原原菌，如如：鼠傷傷寒沙門門菌、鼠鼠棒狀桿桿菌、布布氏桿菌菌、沙門門菌、氣氣管敗血血波氏桿桿菌等，，可采取取血清學(xué)學(xué)方法，，但仍需需結(jié)合分分離培養(yǎng)養(yǎng)結(jié)果最最后做出出診斷。。對于泰泰澤菌，，由于不不能在人人工培養(yǎng)養(yǎng)基上生生長，因因此宜采采用組織織壓片、、鏡檢的的方法進(jìn)進(jìn)行檢查查，并結(jié)結(jié)合病理理檢查結(jié)結(jié)果最后后做出診診斷。2/8//202037（三）實實驗動物物真菌學(xué)學(xué)檢測方方法目前主要要采用沙沙氏培養(yǎng)養(yǎng)基分離離培養(yǎng)。。皮膚真真菌一般般在25℃培養(yǎng)養(yǎng)，深部部真菌在在37℃℃培養(yǎng)。。不同的的真菌具具有一定定的菌落落特點，，鏡下染染色檢查查可進(jìn)行行種屬鑒鑒定，有有時，還還需借助助于生物物化學(xué)反反應(yīng)結(jié)果果和免疫疫學(xué)方法法進(jìn)行最最后診斷斷。2/8//202038（四）實實驗動物物寄生蟲蟲學(xué)檢測測方法1．體外外寄生蟲蟲肉眼觀察察法、透透明膠紙紙粘取法法、拔毛毛取樣法法、皮屑屑刮取法法、黑背背景檢查查法、解解剖鏡下下通體檢檢查法等等，主要要檢查蚤蚤、虱、、螨等節(jié)節(jié)肢動物物。2．體內(nèi)內(nèi)寄生蟲蟲主要檢查查蠕蟲和和原蟲，，可用直直接涂片片法(糞糞便、血血液、臟臟器、腸腸內(nèi)容物物)、飽飽和鹽水水漂浮法法或沉淀淀法、透透明膠紙紙肛門周周圍粘取取法、組組織或器器官剖面面壓印法法、病變變組織切切片或壓壓片法、、尿液的的離心法法(如查查鼠膀胱胱線蟲))等。2/8//202039實驗動物物的微生生物、寄寄生蟲檢檢測具體體操作方方法詳見見《國家家標(biāo)準(zhǔn)實實驗動物物微生物物學(xué)和寄寄生蟲學(xué)學(xué)的檢測測方法（（嚙齒類類和兔類類）》（（GB//T14926.1--14926..41--2001））。檢測方法法歸納起起來有病病原學(xué)檢檢測和血血清學(xué)檢檢測。細(xì)細(xì)菌、真真菌和寄寄生蟲以以病原學(xué)學(xué)檢測為為主，血血清學(xué)檢檢測為輔輔。隨著著血清學(xué)學(xué)方法技技術(shù)的提提高，有有些病原原感染的的檢測也也逐漸使使用血清清學(xué)方法法，如支支原體、、泰澤菌菌、弓形形蟲等。。病毒的的常規(guī)定定期檢測測以血清清學(xué)為主主，疾病病診斷以以病原學(xué)學(xué)檢測為為主。2/8//202040三、監(jiān)測測要求1．選定定監(jiān)測項項目任何一種種實驗動動物都有有許多致致病性微微生物、、寄生蟲蟲，結(jié)合合具體情情況選擇擇合適的的檢測項項目，既既達(dá)到保保證動物物質(zhì)量的的目的，，又可節(jié)節(jié)省人力力物力。。各國、、各地和和單位都都有一定定的檢測測項目，，雖不盡盡相同，，但主要要方法類類同。我我國經(jīng)過過十多年年來對各各地實驗驗動物感感染病原原微生物物、寄生生蟲情況況的調(diào)查查，結(jié)合合其他國國家的規(guī)規(guī)定和經(jīng)經(jīng)驗，制制定了我我國嚙齒齒類和兔兔類微生生物學(xué)、、寄生蟲蟲學(xué)等級級標(biāo)準(zhǔn)，，貓、犬犬、猴等等中型實實驗動物物，衛(wèi)生生部醫(yī)學(xué)學(xué)實驗動動物管理理委員會會亦有初初步規(guī)定定。2/8//2020412．采樣樣數(shù)量和和頻度檢測結(jié)果果的準(zhǔn)確確性，要要采取合合適的動動物數(shù)量量。采樣樣動物數(shù)數(shù)可根據(jù)據(jù)動物群群體的污污染程度度而有所所不同。。例如：：某種病病原體感感染率為為1％的的動物群群體，如如要確實實查出來來，最少少也得查查100只動物物，但實實際上，，如果病病原體具具有中等等程度的的傳染力力，若能能檢查10只左左右，大大概就可可以達(dá)到到目的。。按照國國家標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)規(guī)定，，動物數(shù)數(shù)量超過過100只的生生產(chǎn)繁殖殖單元取取樣如下下：普通通級動物物不能少少于10只；清清潔級動動物檢測測5～10只只；飼養(yǎng)養(yǎng)于小隔隔離罩內(nèi)內(nèi)的無菌菌動物和和無特定定病原體體動物隨隨機抽檢檢2只；；飼養(yǎng)于于生產(chǎn)繁繁殖單元元的抽檢檢5～10只。。2/8//202042除了采樣樣的數(shù)量量，還必必須考慮慮到檢測測的間隔隔時間。。一般來來說，一一旦病原原體侵入入動物群群體引起起感染，，初期分分離病原原體較容容易，抗抗體的檢檢出率上上升。2～3個個月后可可因某些些個體抗抗體水平平的降低低以及新新出生的的非感染染個體的的增加等等原因，，抗體檢檢出率下下降，據(jù)據(jù)此，檢檢測間隔隔時間以以3個月月一次為為宜。至至少每年年檢查2次，選選在春、、秋季疾疾病多發(fā)發(fā)季節(jié)為為宜。2/8//202043采樣時，，宜在動動物群中中不同方方位隨機機采取育育成動物物，選擇擇至少4個不同同的位置置采集樣樣品或采采用前哨哨動物放放人群內(nèi)內(nèi)，不時時調(diào)換位位置，飼飼養(yǎng)一定定時間后后解剖檢檢查抗體體或病原原。運輸途中中保證動動物的安安全和避避免污染染。引種種的動物物則需有有檢疫隔隔離期，，小鼠、、大鼠和和豚鼠l～7天天，兔21天，，犬、貓貓21～～28天天，猴l～9周周。2/8//202044一般來說說，無論論病原學(xué)學(xué)或血清清學(xué)檢測測，檢測測結(jié)果陽陽性者表表示該群群動物有有該病原原體感染染的存在在。但作作為疾病病病原體體的確定定，還需需要進(jìn)一一步分析析。如果果檢測結(jié)結(jié)果陰性性，一般般來說可可作為無無此病原原體存在在的依據(jù)據(jù)。但檢檢測結(jié)果果亦受多多種因素素的影響響。如：：取材數(shù)數(shù)量、感感染率的的高低、、取材頻頻率、取取材對象象(動物物年齡、、疾病的的早晚期期等)、、方法學(xué)學(xué)的選擇擇(病原原學(xué)或血血清學(xué)檢檢測)、、方法學(xué)學(xué)的敏感感性等，，均與檢檢測結(jié)果果有密切切相關(guān)。。2/8//202045第三節(jié)飼飼料料質(zhì)量監(jiān)監(jiān)控實驗動物物作為生生物體離離不開營營養(yǎng)，飼飼料是實實驗動物物攝人營營養(yǎng)素的的主要來來源。只只有良好好的營養(yǎng)養(yǎng)才能使使實驗動動物保持持良好的的健康狀狀態(tài)，而而健康的的實驗動動物才能能確保實實驗結(jié)果果的可靠靠。因此此，加強強飼料質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化管理理，是實實現(xiàn)實驗驗動物標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)化的的重要環(huán)環(huán)節(jié)。2/8//202046一、實驗驗動物飼飼料生產(chǎn)產(chǎn)加工、、儲存與與管理實驗動物物飼料是是以實驗驗動物飼飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)為依據(jù)據(jù)，經(jīng)過過嚴(yán)密設(shè)設(shè)計、科科學(xué)配方方、精心心加工、、生產(chǎn)制制造而形形成的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)產(chǎn)品。因因此，進(jìn)進(jìn)行實驗驗動物飼飼料生產(chǎn)產(chǎn)必須了了解有關(guān)關(guān)實驗動動物飼養(yǎng)養(yǎng)管理法法規(guī)條例例，全面面掌握飼飼料的生生產(chǎn)過程程。2/8//2020471．實驗驗動物配配合飼料料的生產(chǎn)產(chǎn)加工應(yīng)根據(jù)各各種實驗驗動物的的特性和和不同的的實驗?zāi)磕康?，采采用不同同的飼料料加工方方法。常常用實驗驗動物如如大鼠、、小鼠、、豚鼠及及兔等實實驗動物物的飼料料?yīng)制成成具有一一定硬度度的顆粒粒飼料較較為適合合其攝食食習(xí)性；；狗、貓貓則以膨膨化飼料料為好；；而有的的實驗動動物根據(jù)據(jù)實驗?zāi)磕康牟煌?，常要要求制作作糊狀、、粉狀或或液體飼飼料以滿滿足研究究需要。。但是無無論其形形狀如何何，在實實驗動物物飼料加加工生產(chǎn)產(chǎn)過程中中都應(yīng)注注意生產(chǎn)產(chǎn)規(guī)格及及其產(chǎn)品品標(biāo)準(zhǔn)。。2/8//2020482．實驗驗動物飼飼料的儲儲存包括原料料儲存和和成品儲儲存兩部部分內(nèi)容容。原料料儲存：：應(yīng)按原原料種類類、生產(chǎn)產(chǎn)廠家、、進(jìn)貨日日期等分分開保管管。保管管中要注注意溫度度、濕度度變化，，防止鳥鳥類、鼠鼠類和昆昆蟲的污污染。盡盡量做到到先進(jìn)先先出。成成品儲存存：要定定期清掃掃存儲罐罐，產(chǎn)品品變更時時徹底清清掃存儲儲罐，成成品庫內(nèi)內(nèi)嚴(yán)格執(zhí)執(zhí)行先進(jìn)進(jìn)先出原原則。注注意存儲儲罐的溫溫、濕度度，防止止成品飼飼料霉變變，防止止野鼠、、昆蟲及及有毒物物質(zhì)自引引污染。。分類堆堆放，標(biāo)標(biāo)志清楚楚，嚴(yán)防防與原料料混貯，，保證標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)貨物物出庫登登記。2/8//2020493．實驗驗動物的的飼料管管理實驗動物物飼料管管理是指指從飼料料原料選選擇、生生產(chǎn)加工工到成品品以及生生產(chǎn)過程程中的蟲蟲害、安安全及衛(wèi)衛(wèi)生管理理的全過過程。2/8//202050二、實驗驗動物飼飼料的消消毒實驗動物物的飼料料在收獲獲、加工工、儲存存及運輸輸過程中中都有污污染病菌菌的可能能，為確確保實驗驗動物質(zhì)質(zhì)量和動動物實驗驗的準(zhǔn)確確性，我我們要通通過適當(dāng)當(dāng)?shù)南径痉椒ㄊ故蛊溥_(dá)到到滅菌的的目的。。常用飼飼料消毒毒方法有有干熱、、濕熱、、輻照及及藥物熏熏蒸等多多種，應(yīng)應(yīng)按飼養(yǎng)養(yǎng)動物的的不同要要求和飼飼料種類類以及所所具備的的條件來來選擇。。2/8//2020511．干熱熱滅菌法法將飼料在在80～100℃的條條件下烘烘烤。此此法設(shè)備備比較簡簡單，但但溫度不不好掌握握，滅菌菌不夠徹徹底，而而且營養(yǎng)養(yǎng)損失較較大。2/8//2020522．高溫溫高壓滅滅菌法高溫高壓壓滅菌法法是指將將飼料在在121℃，1.0kg/cm3的高溫高高壓蒸鍋鍋內(nèi)加熱熱15min以以上，將將細(xì)菌全全部殺死死。用高高壓滅菌菌必須使使蒸氣滲滲透飼料料內(nèi)部，，操作時時預(yù)先將將鍋內(nèi)減減壓至--60mmHg以下，，然后導(dǎo)導(dǎo)人高壓壓蒸氣，，一般115℃℃30min、、12l℃20min、125℃15min。絕絕大多數(shù)數(shù)維生素素。尤其其是維生生素C、、維生素素B1、維生素素B6和維生素素A等，，過熱會會受到破破壞，而而純化學(xué)學(xué)性飼料料比天然然飼料更更不穩(wěn)定定。2/8//2020533．藥物物熏蒸滅滅菌法熏蒸是利利用化學(xué)學(xué)藥品的的氣霧劑劑對飼料料進(jìn)行消消毒。如如用環(huán)氧氧乙烷進(jìn)進(jìn)行滅菌菌，熏蒸蒸后必須須在不低低于20℃的自自然空氣氣中將殘殘余氣體體揮發(fā)。。實驗證證明，即即使這樣樣處理，，在飼料料中仍然然殘存一一些對動動物代謝謝有損害害的化合合物。2/8//2020544.放放射線照照射滅菌菌法通常在對對谷物類類飼料消消毒時，，采用5Mrad劑量量的60Co照射射對營養(yǎng)養(yǎng)成分損損失甚小小。γ射射線對維維生素B1和維維生素B6僅有有微小破破壞，通通常采用用的劑量量為3～～5Mrad。。此法在在滅菌效效果和對對營養(yǎng)素素的破壞壞程度方方面都優(yōu)優(yōu)于其他他方法。。但受條條件所限限，不便便推廣。。2/8//202055三、實驗驗動物飼飼料的檢檢測飼料檢測測是實驗驗動物飼飼料質(zhì)量量管理必必不可少少的重要要手段。。飼料質(zhì)質(zhì)量變化化不僅直直接影響響著實驗驗動物質(zhì)質(zhì)量，而而且也間間接影響響實驗結(jié)結(jié)果的可可靠性。。我國實實驗動物物飼料質(zhì)質(zhì)量應(yīng)符符合國家家標(biāo)準(zhǔn)GBl4924-2001，，根據(jù)實實驗動物物的不同同種類、、性別、、年齡、、體重和和生理階階段，結(jié)結(jié)合能量量與其他他各種營營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)代謝實實驗和飼飼養(yǎng)實驗驗結(jié)果，，科學(xué)地地規(guī)定每每只動物物每天應(yīng)應(yīng)給予的的能量及及各種營營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)的數(shù)量量。這種種規(guī)定被被稱為飼飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)。2/8//2020561．感觀觀性狀的的檢驗根根據(jù)據(jù)飼料產(chǎn)產(chǎn)品的種種類，用用手、眼眼、鼻等等器官直直接通過過色澤、、氣味、、手感、、雜質(zhì)情情況等項項指標(biāo)對對飼料的的新鮮程程度、均均勻度、、含水量量等進(jìn)行行直觀判判斷。2．營養(yǎng)養(yǎng)成分的的測定按按照照國家實實驗動物物飼料營營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)所規(guī)定定的養(yǎng)分分含量及及分析方方法，對對產(chǎn)品的的營養(yǎng)成成分和混混合均勻勻度等進(jìn)進(jìn)行檢測測。飼料料含水量量應(yīng)經(jīng)常常檢測，，其他營營養(yǎng)成分分應(yīng)定期期抽檢，，對魚粉粉、酵母母粉等貴貴重原料料的養(yǎng)分分含量((如蛋白白質(zhì)等))，應(yīng)在在每批進(jìn)進(jìn)貨時抽抽樣檢測測。具體體可參照照表5--3～表表5-6。2/8//202057第四節(jié)環(huán)環(huán)境境質(zhì)量監(jiān)監(jiān)測嚴(yán)格監(jiān)控控實驗動動物生產(chǎn)產(chǎn)環(huán)境和和動物實實驗環(huán)境境，可保保證實驗驗動物健健康和質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化，可可保障實實驗研究究獲得正正確的結(jié)結(jié)果。合合乎標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)的環(huán)境境，不僅僅為實驗驗動物及及動物實實驗工作作者提供供適宜的的條件，，維持實實驗動物物等級標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)，而而且是保保障工作作人員身身體健康康，使他他們不受受危害因因素傷害害的需要要。實驗動物物設(shè)施在在啟用前前和使用用的過程程中，都都必須對對環(huán)境的的相關(guān)指指標(biāo)進(jìn)行行監(jiān)測。。對內(nèi)環(huán)環(huán)境的監(jiān)監(jiān)測如下下：2/8//202058一、噪聲聲測定1．儀器器普通噪聲聲計、積積分型噪噪聲計。。2．測定定方法分靜態(tài)和和動態(tài)：：靜態(tài)為為在動物物飼養(yǎng)前前，所有有系統(tǒng)正正常運轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)時檢測測；動態(tài)態(tài)為飼養(yǎng)養(yǎng)動物后后，在正正常飼養(yǎng)養(yǎng)條件下下檢測。。通常在潔潔凈室無無人、無無動物，，空調(diào)凈凈化系統(tǒng)統(tǒng)正常運運行的情情況下測測定潔凈凈室的噪噪聲，測測定點選選擇在被被測環(huán)境境的中央央，如房房間大于于15m2，可選擇擇兩個或或兩個以以上的測測定點，，距地面面1m。。2/8//202059二、照度度測定1．儀器器便攜式照照度計。。2．測定定方法測定者需需穿著黑黑色衣服服，避免免反射光光影響測測定結(jié)果果。測定定前開啟啟所有的的照明設(shè)設(shè)備，測測定時以以距墻壁壁1m以以上、離離地面85cm處的平平面照明明度為準(zhǔn)準(zhǔn)。每隔隔1.0～2..0m選選擇一個個測量點點，每點點測3次次，取平平均值，，單位為為lx。。2/8//202060三、空氣氣落下細(xì)細(xì)菌測定定空氣落下下菌數(shù)測測定應(yīng)在在實驗動動物設(shè)施施經(jīng)消毒毒滅菌，，空調(diào)凈凈化系統(tǒng)統(tǒng)正常運運行48h后進(jìn)進(jìn)行。1．試劑劑直直徑9cm的血血液瓊脂脂培養(yǎng)基基。2．測定定方法在在無無動物的的狀態(tài)下下，每5～10m2放置一個個直徑9cm的的血液瓊瓊脂培養(yǎng)養(yǎng)基，敞敞開皿蓋蓋暴露30min，蓋蓋上皿蓋蓋，置于于37℃℃培養(yǎng)48～72h后后，計算算培養(yǎng)皿皿內(nèi)菌落落數(shù)。2/8//202061四、空氣氣潔凈度度測定應(yīng)在動物物飼養(yǎng)前前，空調(diào)調(diào)凈化系系統(tǒng)運行行48h后進(jìn)行行，檢測測儀器為為塵埃粒粒子計數(shù)數(shù)器。亂亂流潔凈凈室面積積不大于于50m2的布置5個測點點，每增增加20～50m2應(yīng)增加3～5個個測點。。測定方方法按使使用說明明書，每每個測定定點連續(xù)續(xù)測定3次，測測定過程程中不得得調(diào)整測測定次數(shù)數(shù)。測定定時100級凈凈化室的的采樣量量每分鐘鐘不少于于1L，，1000級以以上的凈凈化室的的采樣量量每分鐘鐘不小于于0.3L。結(jié)結(jié)果評定定：層流流潔凈室室取各測測定點最最大值；；亂流潔潔凈室取取潔凈室室各測點點的平均均值作為為實測結(jié)結(jié)果。2/8//202062五、相鄰鄰潔凈區(qū)區(qū)靜壓差差測定1．儀器器微壓計，，最小刻刻度為1.0Pa。2．測定定方法測定順序序一般由由低壓到到高壓，，測定前前將需要要測定壓壓差的兩兩個區(qū)域域封閉，，關(guān)閉所所有的門門。測定定時將測測定用的的膠管穿穿過墻上上或門上上預(yù)留的的孔洞進(jìn)進(jìn)入室內(nèi)內(nèi)(穿膠膠管的孔孔洞必須須密封，，設(shè)置在在離墻面面不遠(yuǎn)處處垂直氣氣流的方方向，且且周圍無無阻擋物物、氣流流干擾小小的區(qū)域域)。2/8//202063六、氣流流方向和和速度測測定1．儀器器發(fā)煙管、、熱球式式電風(fēng)速速儀或數(shù)數(shù)字顯示示式風(fēng)速速儀。2．測定定方法測定氣流流方向一一般用煙煙霧法，，也可用用紙條測測定法。。測定氣氣流速度度，將風(fēng)風(fēng)速儀放放置在有有代表性性的飼養(yǎng)養(yǎng)實驗動動物籠具具的位置置進(jìn)行測測定。測測量點設(shè)設(shè)置可參參照溫度度測試點點設(shè)置。。測量時時風(fēng)速計計傳感器器與風(fēng)向向垂直，，指針做做周期性性運動，，要取其其平均值值。2/8//202064七、換氣氣次數(shù)測測定1．儀器器熱球式電電風(fēng)速儀儀或數(shù)字字顯示式式風(fēng)速儀儀。2．測定定方法測量換氣氣次數(shù)，，首先必必須計算算出換氣氣量。換換氣量由由送風(fēng)管管道風(fēng)速速求得。。在一個個以上進(jìn)進(jìn)氣口的的房間，，要將各各進(jìn)氣口口合并計計算。2/8//202065例如，以以送風(fēng)口口計算換換氣次數(shù)數(shù)，公式式為：換氣量Q(m3/h)＝＝3600SV其中：S為有效效截面積積(m2)，V為為平均風(fēng)風(fēng)速(m/s))。換氣次數(shù)數(shù)R(次次/h))＝Q//L其中：R為換氣氣次數(shù)((次/h)，Q為換氣氣量(m3/h)，，L為室室內(nèi)容積積(m3)。2/8//202066八、溫度度、濕度度測定溫、濕度度是日常常管理中中最基本本也是最最重要的的環(huán)境檢檢測指標(biāo)標(biāo)之一，，溫、濕濕度的檢檢測除了了可觀察察連接到到空調(diào)設(shè)設(shè)備上的的自動溫溫、濕度度控制儀儀，還應(yīng)應(yīng)在每個個房間設(shè)設(shè)置溫度度、濕度度計。常常用的溫溫度計有有棒狀溫溫度計、、最高最最低溫度度計、熱熱敏電阻阻溫度計計、數(shù)字字型溫度度計等。。常用濕濕度計有有干濕球球溫度計計、通風(fēng)風(fēng)干濕機機溫度計計、氯化化鋰露點點計及自自動記錄錄溫、濕濕度計等等。2/8//2020671．儀器器棒狀溫度度計、熱熱敏溫度度計、簡簡易于濕濕球溫度度計和自自動記錄錄溫度計計等。2．測定定方法實驗動物物設(shè)施建建成使用用之前，，應(yīng)對動動物室內(nèi)內(nèi)環(huán)境進(jìn)進(jìn)行檢測測。在測測定溫度度、濕度度時，空空調(diào)通風(fēng)風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)應(yīng)連續(xù)運運轉(zhuǎn)，并并做多點點檢測，，如在外外界空氣氣最冷和和最熱時時檢測最最佳。測測量點應(yīng)應(yīng)具有代代表性，，在距地地面10，50，150，200cm高度度水平設(shè)設(shè)定間隔隔0.5，1m的很多多格狀測測點，依依次測量量，并將將結(jié)果制制成不同同等高的的溫度度度數(shù)分布