分子生物學(xué)問(wèn)答題分子生物學(xué)問(wèn)答題分子生物學(xué)問(wèn)答題V:1.0精細(xì)整理，僅供參考分子生物學(xué)問(wèn)答題日期：20xx年X月什么是轉(zhuǎn)座轉(zhuǎn)座因子在一個(gè)DNA分子內(nèi)部或者兩個(gè)DNA之間不同位置間的移動(dòng)。病毒基因組有哪些特點(diǎn)答：不同病毒基因組大小相差較大；不同病毒基因組可以是不同結(jié)構(gòu)的核酸；除逆轉(zhuǎn)錄病毒外，為單倍體基因組；病毒基因組有的是連續(xù)的，有的分節(jié)段；有的基因有內(nèi)含子；病毒基因組大部分為編碼序列；功能相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄為多順?lè)醋觤RNAt基因重疊現(xiàn)象。原核生物基因組有哪些特點(diǎn)答：基因組由一條環(huán)狀雙鏈DNAfi成；只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)；大多數(shù)結(jié)構(gòu)基因組成操縱子結(jié)構(gòu)；結(jié)構(gòu)基因無(wú)重疊現(xiàn)象；無(wú)內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后不需要剪接；基因組中編碼區(qū)大于非編碼區(qū)；重復(fù)基因少，結(jié)構(gòu)基因一般為單拷貝；有編碼同工酶的等基因；基因組中存在可移動(dòng)的DNA序列；非編碼區(qū)主要是調(diào)控序列。真核生物基因組有哪些特點(diǎn)答：每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目；遠(yuǎn)大于原核基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大；真核生物基因轉(zhuǎn)錄為單順?lè)醋樱挥写罅恐貜?fù)序列；真核基因?yàn)閿嗔鸦?；非編碼序列多于編碼序列；功能相關(guān)基因構(gòu)成各種基因家族?；蛑丿B有什么意義答：利用有限的核酸儲(chǔ)存更多的遺傳信息，提高自身在進(jìn)化過(guò)程中的適應(yīng)能力。質(zhì)粒有哪些特性答：在宿主細(xì)胞內(nèi)可自主復(fù)制；細(xì)胞分裂時(shí)恒定地傳給子代；所攜帶的遺傳信息能賦予宿主特定的遺傳性狀；質(zhì)?？梢赞D(zhuǎn)移。什么是順式作用元件答：基因中能影響基因表達(dá)，但不編碼RNA和蛋白質(zhì)的DNA序列。順式作用元件主要包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、負(fù)調(diào)控元件等。簡(jiǎn)述原核基因表達(dá)的特點(diǎn) 。答:⑴只有一種RNA聚合酶。⑵原核生物的基因表達(dá)以操縱子為基本單位。(3)轉(zhuǎn)錄和翻譯是偶聯(lián)進(jìn)行的。(4)mRNA翻譯起始部位有特殊的堿基序列-SD序列。(5)原核生物基因表達(dá)的調(diào)控主要在轉(zhuǎn)錄水平，即對(duì)RNA合成的調(diào)控。簡(jiǎn)述c因子在原核基因表達(dá)調(diào)控中的意義。 答：(1)6因子含有識(shí)別啟動(dòng)區(qū)的結(jié)構(gòu)域調(diào)控RNA聚合酶與.DNA吉合，確保RNA聚合酶與特異啟動(dòng)區(qū)而不是其他位點(diǎn)的穩(wěn)定結(jié)合(2)6因子使得RNA聚合酶選擇一套特定啟動(dòng)區(qū)起始轉(zhuǎn)錄。一旦一種6因子被另一種代替，即引起原來(lái)一套基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)閉和新的一套基因轉(zhuǎn)錄的開(kāi)屆。在有乳糖而無(wú)葡萄糖的條件下，乳糖操縱子是如何調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始的答：無(wú)葡萄糖時(shí)，cAMP處于高水平，與CAP形成cAMP-CAP復(fù)合物并結(jié)合到啟動(dòng)子上游的CAP位點(diǎn)，乳糖存在阻遏蛋白不與操縱基因結(jié)合，cAMP-CAPS合物與lac操縱子的調(diào)控元件結(jié)合后，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。簡(jiǎn)述乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)。 答：編碼B-半乳糖苷酶、半乳糖苷通透酶和硫代半乳糖苷轉(zhuǎn)乙?；傅幕騔、Y、A稱(chēng)為結(jié)構(gòu)基因，結(jié)構(gòu)基因加上調(diào)控元件：?jiǎn)?dòng)子P和操縱基因0及CAP吉合位點(diǎn)，lac阻遏蛋白基因I，即構(gòu)成乳糖操縱子。原核生物可以通過(guò)哪幾個(gè)層次的表達(dá)調(diào)控以適應(yīng)環(huán)境的改變答：(1)轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控：①6因子調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始；②轉(zhuǎn)錄起始的負(fù)調(diào)控；③轉(zhuǎn)錄起始的正調(diào)控；④轉(zhuǎn)錄起始的復(fù)合調(diào)控。(2)轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控：①依賴(lài)p因子的終止調(diào)控，通過(guò)p因子的作用使轉(zhuǎn)錄終止；②不依賴(lài)p因子的終止調(diào)控；③核糖體調(diào)控轉(zhuǎn)錄終止。(3)翻譯水平的調(diào)控：①反義RNA勺調(diào)控作用；②RNA勺穩(wěn)定性；③蛋白質(zhì)合成中的自身調(diào)控。簡(jiǎn)述真核基因表達(dá)的特點(diǎn) 答:(1)細(xì)胞的全能性：所謂全能性是指同一種生物的所有細(xì)胞都含有相同的基因組DNA(2)基因表達(dá)的時(shí)間性和空間性：高等生物的各種不同細(xì)胞具有相同的基因組，但在個(gè)體發(fā)育的不同階段，基因表達(dá)的種類(lèi)和數(shù)量是不同的，在不同組 織和器官中，基因表達(dá)的種類(lèi)和數(shù)量不同。(3)轉(zhuǎn)錄和翻譯分開(kāi)進(jìn)行：在核中轉(zhuǎn)錄生成mRNA?過(guò)核膜至胞質(zhì)指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成。(4)初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物要經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄后加工修飾。(5)不存在超基因式操縱子結(jié)構(gòu)：真核生物基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋樱粭l mRN只翻譯一種蛋白質(zhì)。(6)部分基因多拷貝。真核生物基因組DNA水平的表達(dá)調(diào)控包括哪幾種方式

答：(1)染色質(zhì)的丟失；⑵基因擴(kuò)增；(3)基因重排；⑷基因的甲基化修飾；(5)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用。列舉幾種真核基因的順式作用元件 答:⑴啟動(dòng)子：Hogness(TATA)盒,CAAT盒;(2)增強(qiáng)子：SV40病毒中，位于早期啟動(dòng)子5'上游約200bp，內(nèi)含2個(gè)72bp的重復(fù)序列，其核心序列為GGTGTGGA_AAG沉默子：SV40中的AG~ITiTIT序列為終止轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件。簡(jiǎn)述反式作用因子的基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。 答：一個(gè)完整的反式作用因子通常含有三個(gè)主要功能結(jié)構(gòu)域，分別為DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活化域和結(jié)合其他蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)構(gòu)域含有幾十到幾百個(gè)氨基酸殘基。不同的結(jié)構(gòu)域有自己的特征性結(jié)構(gòu)。(1)DNA識(shí)別結(jié)合域：鋅指結(jié)構(gòu)、堿性亮氨酸拉鏈、同源結(jié)構(gòu)域、螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)、堿性a螺旋。(2)轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域：酸性a-螺旋、富含谷氨酰胺的結(jié)構(gòu)域、富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域。簡(jiǎn)述真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制。 答：主要通過(guò)反式作用因子與順式作用元件和RNA聚合酶(RNApolymerase，RNAp01)的相互作用完成。(1)順式作用元件(cis—actingelement)指某些能影響基因表達(dá)但不編碼新的蛋白質(zhì)和RNA勺DNA序列，按照功能分為啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、負(fù)調(diào)控元件(沉默子等)。⑵反式作用因子(trans—actingfactor)指能直接或間接地識(shí)別或結(jié)合在各順式作用元件8-12bp核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄

18.19.效率的一組蛋白質(zhì)，也稱(chēng)序列特異性DNA結(jié)合蛋白(sequeneespecificDNA18.19.bindingprotein,SDBP)這是一類(lèi)細(xì)胞核內(nèi)蛋白質(zhì)因子。在結(jié)構(gòu)上含有與DNA吉合的結(jié)構(gòu)域。(3)反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：①反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：真核基因轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)節(jié)，首先表現(xiàn)為反式作用因子的功能調(diào)節(jié)，即特定的反式作用因子被激活后，可以啟動(dòng)特定基因的轉(zhuǎn)錄。反式作用因子的激活方式如下：表達(dá)式調(diào)節(jié)；共價(jià)修飾；配體結(jié)合；蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用②反式作用因子作用方式：成環(huán)；扭曲；滑動(dòng)； Oozing③反式作用因子的組合式調(diào)控：基因表達(dá)的調(diào)控不是由單一的反式作用因子完成而是幾種因子組合，發(fā)揮特定的作用。簡(jiǎn)述基因表達(dá)調(diào)控的意義及基本調(diào)節(jié)層次。 答：⑴在同一機(jī)體的各種細(xì)胞中雖然含有相同的遺傳信息即相同的結(jié)構(gòu)基因， 但它們并非在所有細(xì)胞中都同時(shí)表達(dá)，而必須根據(jù)機(jī)體的不同發(fā)育階段、不同的組織細(xì)胞及不同的功能狀態(tài)，選擇性、程序性地表達(dá)特定數(shù)量的特定基因。通常情況下，真核生物細(xì)胞只有2%?15%的基因處于有轉(zhuǎn)錄活性的狀態(tài)。為了適應(yīng)環(huán)境的變化，生物體需要不斷的調(diào)節(jié)和控制各種基因的表達(dá)。 (2)基因表達(dá)的調(diào)控是一個(gè)十分復(fù)雜的過(guò)程。從DNA上的遺傳信息到蛋白質(zhì)功能發(fā)揮的整個(gè)過(guò)程中，存在著基因組、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后、翻譯及翻譯后多個(gè)水平的調(diào)控環(huán)節(jié)。舉例說(shuō)明什么是管家基因及其基因表達(dá)特點(diǎn)。 答：⑴管家基因(house.keepinggenes)是指所有細(xì)胞中均要表達(dá)的一類(lèi)基因，其產(chǎn)物是維持細(xì)胞基本生命活動(dòng)所必需的。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因與核糖體蛋白基因等。(2)管家基因表達(dá)水平受環(huán)境因素影響較小，在個(gè)體各個(gè)生長(zhǎng)階段的大多數(shù)、或幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá)，或變化很小。它的表達(dá)只受啟動(dòng)序列或啟動(dòng)子與RNA聚合酶相互作用的影響，而不受基他機(jī)制調(diào)節(jié)a調(diào)控區(qū)多呈低甲基化。

20.簡(jiǎn)述真核生物在翻譯水平上的調(diào)控20.簡(jiǎn)述真核生物在翻譯水平上的調(diào)控答：（1）翻譯起始的調(diào)控:翻譯起始因子的功能調(diào)控：elF-2是蛋白質(zhì)合成過(guò)程中重要的起始因子。有些物質(zhì)可以影響elF-2的活性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成的速度。培養(yǎng)的真核細(xì)胞處于營(yíng)養(yǎng)不足（“饑餓”）時(shí)，elF-2失活，最終導(dǎo)致肽鏈合成起始效率降低。阻遏蛋白的調(diào)節(jié)作用：所有進(jìn)入胞漿的 mRN分子并不是都可以立即與核糖體結(jié)合翻譯成蛋白質(zhì)。由于存在一些特定的翻譯抑制蛋白可以與一些 mRNA的5'端結(jié)合，從而抑制了蛋白質(zhì)翻譯。③5'AUG對(duì)翻譯的調(diào)節(jié)作用..以真核mRN為模板的翻譯開(kāi)始于最靠近其5'端的第一個(gè)AUG90%以上的真核mRN符合第一AUG規(guī)律。但在有些mRN中，在起始密碼子AUG的上游（5'端）非編碼區(qū)有一個(gè)或數(shù)個(gè)AUG稱(chēng)為5'AUG5'AUG的閱讀框通常與正常編碼區(qū)的閱讀框不一致，不是正常的開(kāi)放閱讀框a如果從5'AUG開(kāi)始翻譯，很快就會(huì)遇到終止密碼子。因此，若從5'AUGff始翻譯，就會(huì)翻譯出無(wú)活性的短肽。mRNA5端非編碼區(qū)長(zhǎng)度對(duì)翻譯的影響：起始密碼AUG!游非編碼區(qū)的長(zhǎng)度可以影響翻譯水平。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)AUG密碼子離5'端帽子的位置太近時(shí)，不容易被40S亞基識(shí)別。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)AUG密碼子距5'端帽子結(jié)構(gòu)的距離在12個(gè)核苷酸以?xún)?nèi)時(shí)，有一半以上的核糖體40S亞基會(huì)滑過(guò)第一個(gè)AUG當(dāng)5'端非編碼區(qū)的長(zhǎng)度在17—80核苷酸之間時(shí)，體外翻譯效率與其長(zhǎng)度成正比。所以，第一個(gè)AUG至5'端之間的長(zhǎng)度同樣影響翻譯起始效率和翻譯起始的準(zhǔn)確性。（2）mRNA穩(wěn)定性調(diào)節(jié)：mRNA勺穩(wěn)定性是翻譯水平調(diào)控的重要因素，是由于mRN是翻譯蛋白質(zhì)的模板，其量的多少直接影響蛋白質(zhì)合成的量。mRN半衰期越長(zhǎng)，.翻譯效率越高，在細(xì)胞內(nèi)合成蛋白質(zhì)的量愈多。（3）小分子RNA對(duì)翻譯的調(diào)控作用：如lin-4RNA由lin-4基因編碼，可阻抑Iin-14蛋白質(zhì)（一種核蛋白），從而調(diào)控生長(zhǎng)發(fā)育的時(shí)間選擇。21.簡(jiǎn)述真核基因轉(zhuǎn)錄因子分類(lèi)及功能。 答:（1）反式作用因子指能直接或間接地識(shí)別或結(jié)合在各順式作用元件8-12bp核心序列上，參與調(diào)控

22.23.24.靶基因轉(zhuǎn)錄效率的一組蛋白質(zhì)，有時(shí)也稱(chēng)轉(zhuǎn)錄因子。 ⑵目前發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因22.23.24.子有近百種，根據(jù)其作用方式的不同分為三類(lèi)：① 通用轉(zhuǎn)錄因子：系多數(shù)細(xì)胞普遍存在的一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子，如TATAbox結(jié)合因子TFHDC-X:box結(jié)合因子SPI等；②組織特異性轉(zhuǎn)錄因子：在很大程度上，基因表達(dá)的組織特異性取決組織特異性轉(zhuǎn)錄因子的存在；③誘導(dǎo)性反式作用因子：這些反式作用因子的活性能被特異的誘導(dǎo)因子所誘導(dǎo)， 這種活性的誘導(dǎo)可以是新蛋白的合成。簡(jiǎn)述真核和原核基因表達(dá)調(diào)控共同的要素。 答：⑴DNA元件:具有調(diào)節(jié)功能的DNAJ列原核：?jiǎn)?dòng)序列，操縱序列真核：順式作用元件，啟動(dòng)子，增強(qiáng)子，抑制子(2)調(diào)節(jié)蛋白：原核：阻遏蛋白：負(fù)性調(diào)節(jié)；激活蛋白：正性調(diào)節(jié)真核：轉(zhuǎn)錄因子基本轉(zhuǎn)錄因子、激活因子、抑制因子(3)RNA聚合酶：RNAR合酶主要是通過(guò)識(shí)別與結(jié)合啟動(dòng)子，參與基因轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控說(shuō)明阻遏蛋白在原核基因表達(dá)調(diào)控中的普遍意義。 答：阻遏蛋白通常是與基因操縱區(qū)結(jié)合，減弱或阻止其調(diào)控的基因轉(zhuǎn)錄，其介導(dǎo)的調(diào)控方式為負(fù)調(diào)控。如大腸埃希菌乳糖代謝，在沒(méi)有誘導(dǎo)劑時(shí)，與 lac相鄰(上游端)的調(diào)節(jié)基因I的產(chǎn)物-lac阻遏蛋白，能與操縱子操縱基因0特異地結(jié)合，抑制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。請(qǐng)解釋正性調(diào)節(jié)在真核基因表達(dá)調(diào)控中的普遍意義。 答：在真核細(xì)胞中，RNA聚合酶對(duì)啟動(dòng)子的親和力很低，基本上不能靠其自身來(lái)起始轉(zhuǎn)錄，而是需要依賴(lài)多種激活蛋白的協(xié)同作用。真核基因調(diào)控中雖然也發(fā)現(xiàn)有負(fù)性調(diào)控元件，但其存在并不普遍；真核基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的調(diào)控蛋白也有起阻遏和激活作用或兼有兩種作用者，但總的是以激活蛋白作用為主。即多數(shù)真核基因在沒(méi)有調(diào)控蛋白作用時(shí)是不轉(zhuǎn)錄的， 需要表達(dá)時(shí)就要有激活的蛋白質(zhì)來(lái)促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。換言之：真核基因表達(dá)以正性調(diào)控為主導(dǎo)。簡(jiǎn)述乳糖操縱子在有葡萄糖存在而沒(méi)有乳糖存在時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄起始負(fù)調(diào)控的原理。答：由于在沒(méi)有乳糖的條件下，lac阻遏蛋白能與操縱基因特異地結(jié)合，抑制了結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。DNA的損傷原因是什么答：DNA的損傷原因包括三大類(lèi)：（1）DNA分子的自發(fā)性損傷：DNA勺自發(fā)性化學(xué)變化。DNA復(fù)制產(chǎn)生的誤差；（2）物理因素引起的DNA損傷：①紫外線(xiàn)照射引起的DNA損傷；②電離輻射引起的DNA損傷。（3）化學(xué)因素引起的DNA損傷：①烷化劑對(duì)DNA勺損傷；②堿基類(lèi)似物、修飾劑對(duì)DNA勺損傷。簡(jiǎn)述DNA分子的自發(fā)性損傷。 答:DNA分子的自發(fā)性損傷包括兩大類(lèi)：（1）DNA復(fù)制產(chǎn)生的誤差；（2）DNA的自發(fā)性化學(xué)變化包括堿基的異構(gòu)互變、堿基的脫氨基作用、脫嘌呤與脫嘧啶、堿基修飾與鏈斷裂。簡(jiǎn)述物理因素引起的DNA損傷。答：物理因素引起的DNA損傷有：⑴紫外線(xiàn)照射引起的DNA損傷。當(dāng)DNA受到最易被其吸收波長(zhǎng)（?26Onm）的紫外線(xiàn)照射時(shí)，同一條DNA鏈上相鄰的嘧啶以共價(jià)鍵連成二聚體，相鄰的兩個(gè)T、或兩個(gè)C、或C與T間都可以環(huán)丁基環(huán)連成二聚體，其中最容易形成的是T-T二聚體。⑵電離輻射引起的DNA損傷：有直接和間接的效應(yīng)，直接效應(yīng)是DNA直接吸收射線(xiàn)能量而遭損傷；間接效應(yīng)是指DNA周?chē)渌肿游丈渚€(xiàn)能量而產(chǎn)生具有很高反應(yīng)活性的自由基，進(jìn)而損傷 DNA簡(jiǎn)述電離輻射可導(dǎo)致的 DNA分子變化。答：電離輻射可導(dǎo)致DNA分子的多種變化：（1）堿基變化：主要是由-OH自由基引起，包括DNA鏈上的堿基氧化修飾、過(guò)氧化物的形成、堿基環(huán)的破壞和脫落，一般嘧啶比嘌呤更敏感。（2）脫氧核糖變化：脫氧核糖上的每個(gè)碳原子和羥基上的氫都能與-OH反應(yīng)，導(dǎo)致脫氧核糖分解，最后引起DNA鏈斷裂。(3)DNA鏈斷裂：這是電離輻射引起的嚴(yán)重?fù)p傷事件，斷裂數(shù)隨照射劑量而增加。射線(xiàn)的直接和間接作用都可能使脫氧核糖破壞或磷酸二酯鍵斷開(kāi)而致 DSIA鏈斷裂。(4)交聯(lián)：包括DNA鏈交聯(lián)和DNA蛋白質(zhì)交聯(lián)。簡(jiǎn)述哺乳動(dòng)物中DNA損傷的修復(fù)類(lèi)型。答：對(duì)不同的DNA損傷，細(xì)胞可以有不同的修復(fù)反應(yīng)。目前，已在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了四個(gè)較為完善的DNA修復(fù)通路，分別是核苷酸切除修復(fù)(nucleotide.excisionrepair，NER)堿基切除修復(fù)(base—excisionrepair ，BER)重組修復(fù)(recombinationrepair) 和錯(cuò)配修復(fù)(mismatchrepair)簡(jiǎn)述E.coli錯(cuò)配修復(fù)機(jī)制 答：在E.coi中，錯(cuò)配修復(fù)蛋白MutS二聚體沿著DNA運(yùn)動(dòng)，能夠發(fā)現(xiàn)DNA骨架因非互補(bǔ)堿基對(duì)之間的不對(duì)稱(chēng)而產(chǎn)生的變形，從而識(shí)別錯(cuò)配核苷酸。 MutS在錯(cuò)配位點(diǎn)夾住DNA利用ATP水解釋放的能量使DNA形成扭結(jié)，MutS自身構(gòu)象也發(fā)生改變。隨后，MutS錯(cuò)配DNA復(fù)合物募集該修復(fù)系統(tǒng)的第二種蛋白因子 MutL,MutL再激活內(nèi)切核酸酶MutH在錯(cuò)配位點(diǎn)附近切斷錯(cuò)配核苷酸所在的一條DNAS,在解旋酶UvrD和外切核酸酶作用下，將包括錯(cuò)配核苷酸在內(nèi)的一條單鏈 DNA去除，所產(chǎn)生的單鏈DNA缺口由DNA聚合酶川填補(bǔ).DNA連接酶封口，完成錯(cuò)配修復(fù)。以人為例，簡(jiǎn)述堿基切除修復(fù)機(jī)制 答：在人細(xì)胞核中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)八種DNA糖苷酶，他們參與堿基切除修復(fù)，具有損傷特異性，通常嘧啶的氧化損傷由hNTH、hNEILI或hNEIL2移除，而嘌呤的氧化損傷由hOGGI移除。特異識(shí)別的異常堿基包括：胞嘧啶脫氨基產(chǎn)生的尿嘧啶、氧化的鳥(niǎo)嘌呤、脫氨基的腺嘌呤、開(kāi)環(huán)堿基以及碳原子之間雙鍵變成單鍵的堿基等。 APE.1蛋白酶的作用是修復(fù)AP位點(diǎn)，它從AP位點(diǎn)的5'端切開(kāi)，再去除無(wú)堿基的殘基，然后由DNA聚合酶及連接酶插入一個(gè)新合成的堿基，完成修復(fù)過(guò)程。簡(jiǎn)述E.coli核苷酸切除修復(fù)機(jī)制。答：E.coli的核苷酸切除修復(fù)主要由四種蛋白組成：UvrA、UvrB、UvrC、UvrD。兩個(gè)UvrA分子和一個(gè)UvrB分子組成復(fù)合物結(jié)合于DNA并消耗ATP沿著DNA鏈移動(dòng)，UvrA能夠發(fā)現(xiàn)損傷造成的DNA雙螺旋變形，由UvrB負(fù)責(zé)解鏈，在損傷部位形成單鏈區(qū)，并使之彎曲約130度，接著UvrB募集內(nèi)切核酸酶UvrC，在損傷部位的兩側(cè)切斷DNA鏈，其中一個(gè)切點(diǎn)位于損傷部位5'側(cè)八個(gè)核苷酸處，而另一個(gè)切點(diǎn)位于3'側(cè)四或五個(gè)核苷酸處。然后，DNA解旋酶UvrD去除兩切口之間的DNA片段，由DNA聚合酶和連接酶填補(bǔ)缺口。簡(jiǎn)述人類(lèi)核苷酸切除修復(fù)機(jī)制。 答：人XPC蛋白負(fù)責(zé)發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋中的變形，其功能相當(dāng)于E.coli中的UvrA;人XPB和XPD蛋白具有解旋酶活性，其功能相當(dāng)于E.coli中的UvrB;核酸酶ERCCl-XPF切割損傷部位5'側(cè)，X.PG切割3'側(cè)，其功能相當(dāng)于uvrC高等生物NER切割單鏈DNA片段程度為24—32個(gè)核苷酸。這一片段被釋放后，產(chǎn)生的缺口由 DNA聚合酶和連接酶填補(bǔ)。NEF不僅能夠修復(fù)整個(gè)基因組的損傷，而且能夠拯救因轉(zhuǎn)錄模板鏈損傷而暫停轉(zhuǎn)錄的RNA聚合酶，即轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)修復(fù)。在這一過(guò)程中，NER蛋白被募集于暫停的RNA聚合酶。簡(jiǎn)述人全基因組與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)核苷酸切除修復(fù)過(guò)程中的異同點(diǎn)。答：人全基因組與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)核苷酸切除修復(fù)的基本過(guò)程相同，即都有發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤，解鏈并募集內(nèi)切核酸酶，切割損傷部位，解旋去除損傷位點(diǎn)，DNA聚合酶和連接酶填補(bǔ)缺口。轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)與全基因組核苷酸切除修復(fù)的不同點(diǎn)在于hER蛋白被募集于暫停的RNA聚合酶，并且轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)修復(fù)的核心TF

UH分別參與了兩個(gè)獨(dú)立過(guò)程:UH分別參與了兩個(gè)獨(dú)立過(guò)程:是在核苷酸切除修復(fù)時(shí)起 DNA解旋酶的作用；二是在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中打開(kāi)DNA莫板。簡(jiǎn)述大腸埃希菌重組修復(fù)機(jī)制。答：E-coli的rec基因編碼的幾種酶（recA、recB、reeC和recD）參與重組修復(fù)。recB、recC、recD酶復(fù)合物兼有解旋酶和核酸酶活性，它利用ATR水解提供能量沿著DNA移動(dòng)。其中，recB和recD是兩種解旋酶，recB沿DNA鏈5'端解旋，運(yùn)動(dòng)速度較慢;而recD沿DNAg3'端解旋，運(yùn)動(dòng)速度較快，導(dǎo)致單鏈DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)逐漸累積。當(dāng)recB、reeC、recD遇到chi序列。5'-GCTGGTCC-時(shí)，它就在附近將單鏈DNA切斷，從而使DNA重組成為可能。E.coli的recA蛋白在DNA重組中起關(guān)鍵作用。recA蛋白緊緊結(jié)合于單鏈DNA每圈結(jié)合六個(gè)recA分子。DNA單鏈區(qū)產(chǎn)生于recB、recC、recD酶的作用或DNA缺口。recA蛋白結(jié)合DNA具有正協(xié)同效應(yīng)。E.coli的RuvA蛋白識(shí)別Holliday結(jié)構(gòu)連接處，而RuvB蛋白具有解旋酶和ATPase活性，能驅(qū)動(dòng)分支移動(dòng)。最后由內(nèi)切核酸酶RuvC特異識(shí)別Holliday結(jié)構(gòu)中的ATrG序列并切割DNA使Holliday結(jié)構(gòu)分離，從而完成DNA重組。人DNA雙鏈斷裂后的修復(fù)機(jī)制。 答:對(duì)于DNA雙鏈斷裂損傷，細(xì)胞必須利用雙鏈斷裂修復(fù)，即重緝修復(fù)，重組修復(fù)分為同源重組和非同源末端連接。DNA雙鏈斷裂后，細(xì)胞中存在姐妹染色體時(shí)，則通過(guò)同源重組的方式進(jìn)行修復(fù)，如細(xì)胞中不存在姐妹染色體時(shí)，則通過(guò)非同源末端連接的方式進(jìn)行修復(fù)。簡(jiǎn)述SOS修復(fù)機(jī)制。答：在DNA受到嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，SOS^答能夠誘導(dǎo)合成很多參與DNA損傷修復(fù)的酶和蛋白質(zhì)。SOSS答十分迅速，在DNA損傷發(fā)生后幾分鐘內(nèi)就可出現(xiàn)。轉(zhuǎn)錄阻遏蛋白 Lex.A抑制若干編碼參與SOS應(yīng)答蛋白質(zhì)的基因表達(dá)，具有潛在的蛋白水解酶活性， Ecoli的DNA損傷產(chǎn)生的單鏈DNA誘導(dǎo)recA蛋白水平提高近50倍，而recA?蛋白能激活LexA自我蛋白酶解，導(dǎo)致至少15個(gè)參與SOS^答的損傷修復(fù)蛋白基因解除阻遏狀態(tài)而表達(dá)。recA激活的靶蛋白斷裂位點(diǎn)是位于多肽鏈中央的二肽Ala-Gly。Ecoli的recA蛋白有雙重功能，一是在DNA重組過(guò)程中具有DNA鏈交換活性；二是具有蛋白水解酶激活活性。當(dāng)DNA兩條鏈的損傷鄰近時(shí)，損傷不能被切除或重組修復(fù)，這時(shí)在內(nèi)切核酸酶、外切核酸酶的作用下造成損傷處的 DNA鏈空缺，再由損傷誘導(dǎo)產(chǎn)生的一整套特殊DNA聚合酶即SOS修復(fù)酶類(lèi)，催化空缺部位DNA勺合成，這時(shí)補(bǔ)上去的核替酸幾乎是隨機(jī)的，但仍然保持了 DNA雙鏈的完整性，使細(xì)胞得以生存。這種修復(fù)帶給細(xì)胞很高的突變率。簡(jiǎn)述SangerDNA測(cè)序法的原理。答：SangerDNA測(cè)序法是建立在兩個(gè)基本原理之上：（1）核酸是依賴(lài)于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合；（2）可延伸的引物必須能提供游離的3'羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的3'羥基末端，因此會(huì)終止聚合反應(yīng)的進(jìn)行a如果分別用4種雙脫氧核苷酸終止反應(yīng)，則會(huì)獲得4組長(zhǎng)度不同的DNA片段。通過(guò)比較所有DNA片段的長(zhǎng)度可以得知核苷酸的序列。何謂PCR?式述PCR技術(shù)的基本原理和影響茵素。 答：PCF是一種體外酶促擴(kuò)增特異DNA片段的技術(shù)，其原理類(lèi)似DNA勺體內(nèi)擴(kuò)增a它包括：PCF包括三個(gè)基本過(guò)程：①變性，即在較高溫度（93C?98%）使雙鏈模板DNA變性解鏈成單鏈DNA以提供復(fù)制的模板；②退火，即在較低溫度（37C?65%）使加入的引物與待擴(kuò)增DNA區(qū)域特異性地結(jié)合，以提供DNA復(fù)制起始的3'-OH;③延伸，即在適當(dāng)?shù)臏囟龋?0qC?75C）下，DNA聚合酶從特異性結(jié)合到DNA模板上的引物3'一OH端開(kāi)始，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原貝U，按照待擴(kuò)增區(qū)域的核苷酸序列， 進(jìn)行DNA鏈的延伸，即合成新的DNA分子。這三個(gè)過(guò)程組成一個(gè)循環(huán)周期；每個(gè)周期合成的產(chǎn)物又可作為下一個(gè)周期的模板，如此循環(huán)往復(fù)，經(jīng)過(guò)11輪循環(huán)后，靶DNA勺拷貝數(shù)理論n2=上呈2增長(zhǎng)。影響PCF反應(yīng)的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTR模板和Mg離子，此外，pH、溫度、循環(huán)次數(shù)也會(huì)影響PCR反應(yīng)。PCR的基本原理是什么用PCFT增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣的信息答：PCF是根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外進(jìn)行DNA勺變性、復(fù)性和引物延伸。用PCFT增某一基因至少要預(yù)先知道足夠合成一對(duì)引物的靶DNA序列。切口平移（nicktranslation）標(biāo)記探針的主要步驟有哪些答：⑴DNaseI造成切口；（2）DNA聚合酶川的5'-3'外切核酸酶進(jìn)行切割；（3）DNA聚合酶川的5'-3'合成酶進(jìn)行修補(bǔ)；⑷在修補(bǔ)過(guò)程中，隨著切口（nick）的移動(dòng)，將放射性的底物摻人到雙鏈DNA中。什么是Western免疫印跡它與Southern印跡有什么不同答：Western免疫印跡是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后用特異性的抗體進(jìn)行檢測(cè)。它 Southern的不同在于探針的性質(zhì)不同，在Western免疫印跡中使用的探針是抗體（蛋白質(zhì)）。什么是隨機(jī)引物（randomprimer）

如何標(biāo)記DNA?答:隨機(jī)引物是人工合成的長(zhǎng)度為6個(gè)核苷酸的寡聚核苷酸片段群體，含有各種可能的排列順序（46=4096）;或是用DNase處理、牛胸腺DNAf獲得的6-12個(gè)堿基的片段。將待標(biāo)記的DNA片段同隨機(jī)引物一起進(jìn)行雜交，并以雜交體上的寡聚核苷酸為引物，在ICdenow酶的作用下合成互補(bǔ)DNA鏈，當(dāng)反應(yīng)底物中有放射性的dNTP寸，新合成的DNA就帶上了標(biāo)記。什么是印跡（blotting）雜交答：通過(guò)一定的物理學(xué)方法將dnaRNA或蛋白質(zhì)從凝膠上轉(zhuǎn)移到固體支持物，然后同液體中的探針 （抗體）進(jìn)行雜交，以檢測(cè)特異DNARNA或蛋白質(zhì)的一種方法。因?yàn)镈NARNA或蛋白質(zhì)從凝膠向?yàn)V膜轉(zhuǎn)移的過(guò)程稱(chēng)為印跡，故此將這種雜交稱(chēng)為印跡雜交。什么是原位菌落雜交(colony,hybridization)

答：原位菌落雜交是根據(jù)微孔濾膜雜交和原位雜交的原理而改良的一種篩選重組體的一種核酸雜交方法。它是將生長(zhǎng)在或影印在微孔濾膜上的菌落(或噬菌斑)原位溶菌，原位進(jìn)行DNA變性并原位固定在濾膜上，然后用放射性標(biāo)記的探針同固定了的DNA進(jìn)行雜交經(jīng)放射自顯影后，確定哪一個(gè)菌落含有重組的 DNA分子，再?gòu)膮⒈绕桨迳线x取重組體。簡(jiǎn)述Southem印跡雜交的原理和方法。 答：Southern印跡雜交是1975年Southern建立起來(lái)的一種雜交方法，屬固相一液相雜交。該法的主要特點(diǎn)是利用毛細(xì)現(xiàn)象將DNA專(zhuān)移到固體支持物上，稱(chēng)為Southern轉(zhuǎn)移或Southern印跡(Southernblot)。它首先用合適的限制性?xún)?nèi)切核酸酶將DNA切割，進(jìn)行電泳分離后，利用干燥的吸水紙產(chǎn)生毛細(xì)作用，使液體經(jīng)過(guò)凝膠，從而使DN/片段由液流攜帶從凝膠轉(zhuǎn)移并結(jié)合在固體支持物表面，在通過(guò)和探針雜交來(lái)檢測(cè)固體支持物表面的 DNASouthern印跡雜交、Northern 印跡雜交及Western免疫印跡彼此之間有哪些不同 答：(1)檢測(cè)目標(biāo)物質(zhì)不同：Southern印跡雜交檢測(cè)的是DNANorthern印跡雜交檢測(cè)的是RNAWestern免疫印跡雜交檢測(cè)的是蛋白質(zhì)。⑵所用凝膠不同：Southern印跡雜交和Northern印跡雜交用的是瓊脂糖凝膠，而Western免疫印跡用的是SDS'-聚丙烯酰胺凝膠。(3)是否變性電泳不同：Southern印跡雜交是跑非變性瓊脂糖凝膠電泳，電泳之后在凝膠上用NaOh處理使DNA變性，然后轉(zhuǎn)??；Northern印跡雜交實(shí)在電泳上樣前用甲基氫氧化銀、乙二醛或甲醛使 RNA變性，而不用NaOh因?yàn)樗鼤?huì)水解RNA的2'?OHWestern免疫印跡則是跑變性的聚丙烯酰胺電泳或非變性的聚丙烯酰胺電泳。(4)探針不同：Southern印跡雜交、Northern印跡雜交的探針是單鏈的DNA或RNA而Western免疫印跡用的探針是特異性抗體蛋白質(zhì)，而非核酸。TaqDNA聚合酶有哪些特性答：Taqdna聚合酶特性具有以下特性：（1）較高的熱穩(wěn)定性；（2）53'聚合酶活性；（3）53'外切酶活性；（4）具有轉(zhuǎn)錄酶活性；（5）較弱的非模板依賴(lài)性；（6）缺乏3'一5'外切酶活性。如何提高PCRDNA聚合酶的保真性答:.⑴使用TaqDNA聚合酶時(shí)，摻人少量具有3'一5'外切酶活性的耐熱DNA聚合酶，錯(cuò)配率可降為原來(lái)的1/10；⑵使四種dNTP底物濃度相等；（3）MgCI2濃度盡可能低；（4）減少循環(huán)數(shù)。PCR引物設(shè)計(jì)的原則主要有哪些 答:⑴引物長(zhǎng)度：10?30Nt；（2）堿基分布：A、T、GC隨機(jī)分布；（3）G+c含量：40%?60%Tm=4（G+C）+2（A+T）;⑷引物之間：避免3'端互補(bǔ)：（5）引物自身：不應(yīng)形成二級(jí)結(jié)構(gòu)；⑹引物3'末端堿基：最好選T、c、G,不選A；（7）引物5'末端堿基：可不與模板DNA互補(bǔ)。影響PCR擴(kuò)增平臺(tái)期的因素（1）引物及dNTP底物濃度降低，摻入速度減慢。（2）酶與模板比例下降,底物過(guò)量。3）非特異性產(chǎn)物或引物二聚體與反應(yīng)物競(jìng)爭(zhēng)4）產(chǎn)物的再結(jié)合簡(jiǎn)述基因克隆的主要過(guò)程。 答：①制備目的基因和相關(guān)載體；②將目的基因和有關(guān)載體進(jìn)行連接；③將重組的 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞；④DNA重組體的篩選和鑒定；⑤DNA重組體的擴(kuò)增、表達(dá)和其他研究簡(jiǎn)述寡核苷酸介導(dǎo)的定點(diǎn)誘變技術(shù)的原理 。答：利用Klenow片段（DNA聚合酶I大片段）延伸與單鏈環(huán)狀DNA模板相配對(duì)的寡核苷酸引物，這個(gè)寡核苷酸引物除了有一處與模板的堿基錯(cuò)配外，其余部分均與模板互補(bǔ)，由寡核苷酸的錯(cuò)配處誘發(fā)突變，并在體外新合成一個(gè)雜合雙鏈 DNA用T4DNAffi接酶將新合成的雜合雙鏈DNA連接成雙鏈閉環(huán)DNA分子，將體外合成的雜合閉環(huán)雙鏈DNA專(zhuān)化到E.coli細(xì)胞，由于環(huán)狀DNA復(fù)制的特點(diǎn)，就會(huì)同時(shí)產(chǎn)生野生型與誘變型兩種DNA分子，最后通過(guò)篩選，將誘變型DNA分子篩選出來(lái)。Klenow片段的主要用途有哪些 答：⑴補(bǔ)齊雙鏈DNA勺3,末端。⑵通過(guò)補(bǔ)齊3'端，標(biāo)記3'末端。⑶在cDNA克隆中，合成第二股鏈。⑷DNA序列分析。末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的作用 。答；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶能將脫氧核苷酸加到DNA勺3,OH~主要用于探針標(biāo)記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進(jìn)行克隆將DNA分子進(jìn)行體外連接的方法 ：黏性末端連接、平端連接、同聚物加尾連接、人工接頭連接表達(dá)融合蛋白有何優(yōu)點(diǎn) 答：表達(dá)融合蛋白的優(yōu)點(diǎn)如下：⑴融合蛋白較穩(wěn)定，不易被細(xì)菌蛋白酶水解；（2）如果融合蛋白中有信號(hào)肽序列，可產(chǎn)生分泌型產(chǎn)物.（3）可利用針對(duì)原核部分的單抗進(jìn)行親和層析，便于純化.堿性磷酸酶在基因克隆中的作用 。答：堿性磷酸酶能去除DNA或RNA5端的磷酸根。制備載體時(shí)，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身環(huán)化，提高重組效率?；蚩寺∵^(guò)程中，獲得目的基因的途徑有哪些 答:⑴從基因組文庫(kù)中獲得（2）從cDNA文庫(kù)中獲得（3）PCR擴(kuò)增特定基因什么是基因突變它有哪些主要類(lèi)型在特定DNA序列中，堿基組成及排列順序可因機(jī)體內(nèi)外因素的作用發(fā)生改變，導(dǎo)致DNA-級(jí)結(jié)構(gòu)變化，稱(chēng)為基因突變。主要類(lèi)型分為：1）點(diǎn)突變，在DNA序列某個(gè)位點(diǎn)上，一種堿基（核苷酸）被另一種取代所產(chǎn)生的改變2）缺失，一個(gè)堿基或一段堿基序列丟失的改變。3）插人，某個(gè)位置增加一個(gè)堿基或一段堿基序列的改變4）重排，常見(jiàn)有反置或遷移倒位，即基因DNA序列內(nèi)部重組5）配子突變和體細(xì)胞突變；6）動(dòng)態(tài)突變，微衛(wèi)星序列串聯(lián)重復(fù)拷貝數(shù)隨著世代傳遞而不斷增加的現(xiàn)象簡(jiǎn)述基因突變的不同遺傳學(xué)效應(yīng)。 基因突變的遺傳學(xué)效應(yīng)包括錯(cuò)義突變、無(wú)義突變、同義突變和移碼突變。1）錯(cuò)義突變是因DNA分子中堿基對(duì)被取代，突變基因中相應(yīng)密碼子所編碼氨基酸被另一種所取代。 2）無(wú)義突變是由于堿基取代、缺失或插入后使得編碼某種氨基酸的密碼子變成了終止密碼子，導(dǎo)致蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程被提前終止。 3）同義突變是由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，使突變前后相應(yīng)密碼子編碼同一氨基酸。4）移碼突變是指DNA序列中發(fā)生單堿基，多個(gè)堿基或DNA片段的缺失或插入，導(dǎo)致突變點(diǎn)后二聯(lián)密碼閱讀框改變。何謂基因診斷與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)診斷相比，它具有哪些特點(diǎn)答：用分子生物學(xué)的理論和技術(shù)，通過(guò)直接探查基因的存在狀態(tài)或缺陷，從基因結(jié)構(gòu)、定位、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或翻譯水平分析基因的功能，從而對(duì)人體狀態(tài)與疾病作出診斷的方法。具有高特異性、高靈敏性、早期診斷性、應(yīng)用的廣泛性等特點(diǎn)。簡(jiǎn)述SSCP分析的原理。答：在非變性條件下，DNA分子為維持其穩(wěn)定而自身折疊形成具有一定空間結(jié)構(gòu)的構(gòu)象， 這種構(gòu)象是由單鏈DNA分子中的堿基順序所決定，DNA分子中的堿基變異（即使只有一個(gè)堿基）可導(dǎo)致其空間構(gòu)型的改變，形成不同的構(gòu)象，導(dǎo)致電泳遷移率發(fā)生改變。單核苷酸多態(tài)性用作遺傳標(biāo)志具有那些突出優(yōu)勢(shì) 答：分布更廣泛；高度穩(wěn)定性；部分位于基因內(nèi)部，直接影響基因功能發(fā)揮；是雙等位