4.14.1高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器。保健食品中褪黑素的測(cè)定范圍本方法規(guī)定了以褪黑素為有效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的測(cè)定方法。本方法適用于以褪黑素為有效成分的膠囊或片劑包裝的保健食品中褪黑素的測(cè)定。本方法高效液相色譜-紫外檢測(cè)法的檢出限為0.5ng；取樣量0.5g時(shí)，檢出濃度為0.07mg/kg。本方法高效液相色譜-熒光法的檢出限為30pg,線性范圍為0.05?0.50ng。第一篇高效液相色譜紫外檢測(cè)法原理試樣中的褪黑素經(jīng)溶解、稀釋、過(guò)濾后,使用具有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。試齊IJ除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確定為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。甲醇:色譜純。無(wú)水乙醇：優(yōu)級(jí)純。三氟乙酸：優(yōu)級(jí)純。高效液相色譜流動(dòng)相：甲醇：水：三氟乙酸=45：55：0.05。褪黑素(Melatonin)標(biāo)準(zhǔn)品：Sigma公司產(chǎn)品。褪黑素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精確稱(chēng)量30mg褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品于100mL容量瓶中，加入70%乙醇溶解后定容至刻度。準(zhǔn)確吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，加入流動(dòng)相(3.4)定容至刻度，此溶液濃度為0.060mg/mL。儀器設(shè)備4.2超聲波清洗器。3離心機(jī)。■■■■試樣處理：使用研缽將片劑或膠囊研成粉末并使之混合均勻。精確稱(chēng)量約一粒片劑或膠囊的重量于10mL容量瓶中，以70%乙醇定容至刻度，使用超聲波清洗器提取10min。將提取液離心至澄清。準(zhǔn)確量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容至刻度，混勻后經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾后進(jìn)行色譜分析。測(cè)定液相色譜參考條件色譜柱：C18，4.6mmx250mmo紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)：222nmo流速：0.8mL/min。柱溫：室溫3.3.3.3.2色譜分析3.3.3.3.2色譜分析量取1QL標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣凈化液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。5.3.3色譜圖褪黑素標(biāo)準(zhǔn)色譜圖計(jì)算h10xcx10xx1000h2sX二一取取取取取取取（1）式中：X-試樣中褪黑素的含量，mg/kg；h-試樣的峰高或峰面積；h-標(biāo)準(zhǔn)的峰高或峰面積；sc-褪黑素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mL；m-試樣質(zhì)量，go6.2結(jié)果表示：計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。7.技術(shù)參數(shù)準(zhǔn)確度：本方法的回收率在外?！^之間。精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的％o第二篇高效液相色譜熒光法原理試樣中褪黑素經(jīng)甲醇反復(fù)提取，制成甲醇溶液，按一定比例進(jìn)行稀釋后，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，以熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間定性和與標(biāo)準(zhǔn)品峰面積比較進(jìn)行定量。試齊9甲醇：重蒸。9褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品：純度為％792儲(chǔ)備溶液：精密稱(chēng)取褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品1用甲醇溶解并配成的儲(chǔ)備溶液，于C保存。92使用溶液：使用前精密量取一定量標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液，根據(jù)褪黑素在儀器上的響應(yīng)情況，用甲醇稀釋成標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。儀器,高效液相色譜儀：附熒光檢測(cè)器和微處理機(jī)。.離心機(jī)超聲波清洗機(jī)試樣制備片劑研細(xì)備用；膠囊內(nèi)容物混合均勻備用。分析步驟2提取精密稱(chēng)取試樣于的刻度試管中，加甲醇約m超聲振蕩m離心，取上清液于容量瓶中，再加甲醇約于殘?jiān)?，按前述方法重?fù)提取次，合并上清液，加甲醇至刻度，搖勻。取此溶液適量，用甲醇稀釋并定容，制成試樣溶液待測(cè)。2測(cè)定22高效液相色譜條件221色譜柱：X不銹鋼柱。?21流動(dòng)相：甲醇。221流速：/。進(jìn)樣量:檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器，激發(fā)光波長(zhǎng)射光波長(zhǎng)22色譜分析將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)后，分別將0L標(biāo)準(zhǔn)溶液及凈化后試樣液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量.本方法線范性圍為。計(jì)算XX\z—=X熒熒熒熒熒熒熒熒熒熒熒熒熒熒熒1()XX式中：試樣中褪黑素的含量，/被測(cè)樣液中褪黑素的含量，g試樣重量，；樣液進(jìn)樣體積，.L;試樣稀釋液總體積，稀釋倍數(shù)結(jié)果表示：