分子鎮(zhèn)痛

－未來疼痛治療的新策略

分子鎮(zhèn)痛慢性疼痛神經(jīng)病理性疼痛癌痛炎癥痛等

由實(shí)際的或潛在的組織損傷引起的一種不愉快的感覺和情感經(jīng)歷（IASP定義）

由于各種原因(如骨質(zhì)增生,慢性軟組織傷以及惡性腫瘤等)所致的長期(數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年)不愈的疼痛疼痛慢性疼痛慢性疼痛神經(jīng)病理性疼痛由實(shí)際的或潛在的組織損傷引起的一種不愉疼痛傳導(dǎo)通路疼痛傳導(dǎo)通路藥物治療：阿片類藥物、NSAIDs、抗精神病藥物等物理治療：光療、水療、冷熱療、針刺等手術(shù)治療：選擇性的神經(jīng)阻滯、神經(jīng)損毀術(shù)等慢性疼痛治療策略分子鎮(zhèn)痛——新策略藥物治療：阿片類藥物、NSAIDs、抗精神慢性疼痛治療策略轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛疫苗鎮(zhèn)痛靶向毀損鎮(zhèn)痛近幾年我們的研究轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛近幾年我們的研究

轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛

鞘內(nèi)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植（腦啡肽原基因）鎮(zhèn)痛分子（腦啡肽）外源基因修飾細(xì)胞株轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛鞘內(nèi)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植（腦啡肽原基因）鎮(zhèn)痛分子（腦啡肽）外源基因轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛我們的研究經(jīng)歷的三階段細(xì)胞移植轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植病毒轉(zhuǎn)基因治療轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛我們的研究經(jīng)歷的三階段細(xì)胞移植轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移嗜鉻細(xì)胞

免疫反應(yīng)生存期短來源困難細(xì)胞移植嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)

免疫隔離——減少免疫抑制劑的應(yīng)用，保護(hù)植入細(xì)胞免遭受機(jī)體排斥缺點(diǎn)

1.微囊制作復(fù)雜，成功率不高

2.微囊內(nèi)死亡的細(xì)胞會污染正常產(chǎn)物

3.囊膜破裂

4.微囊纖維包裹，影響了微囊對外環(huán)境的敏感性和鎮(zhèn)痛物質(zhì)的釋放

微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)

可取自自體或同種異體，組織相容性好非腫瘤細(xì)胞，無致瘤性存在的問題

細(xì)胞生存時間基因表達(dá)的可控性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)解決細(xì)胞來源問題

—永生化細(xì)胞永生化

利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源性的永生化基因轉(zhuǎn)入到靶細(xì)胞并穩(wěn)定整合到靶細(xì)胞基因組中，獲得穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，從增殖危機(jī)中逃逸，從而獲得無限增殖能力解決細(xì)胞來源問題

—永生化細(xì)胞永生我們構(gòu)建的永生化細(xì)胞永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞永生化神經(jīng)前體細(xì)胞我們構(gòu)建的永生化細(xì)胞永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞永生化神經(jīng)前體細(xì)胞基因修飾永生化細(xì)胞鎮(zhèn)痛人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，大鼠蛛網(wǎng)膜下腔移植后，具有良好的鎮(zhèn)痛效果腺相關(guān)病毒攜帶人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)前體細(xì)胞，蛛網(wǎng)膜下腔移植后，具有良好的鎮(zhèn)痛效果基因修飾永生化細(xì)胞鎮(zhèn)痛人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞基因表達(dá)的可控性非可控性表達(dá)模式可控性表達(dá)模式基因表達(dá)的可控性非可控性表達(dá)模式可控性表達(dá)模式Tet-on誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)

解決基因表達(dá)可控性問題

—tet-on表達(dá)系統(tǒng)目的基因TRErtTACMVTet-on誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)解決基因表達(dá)可控性問題

可控性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛可控性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛+Dox-Dox+Dox永生化膠質(zhì)細(xì)胞中強(qiáng)力霉素調(diào)節(jié)腦啡肽分泌+Dox-Dox+Dox永生化膠質(zhì)細(xì)胞中強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)表達(dá)后大鼠腦脊液中

腦啡肽含量明顯增加注：與SNI組和SNI/Control組相比*P<0.05

與SNI/hPPE/Dox(-)組相比，#P<0.05誘導(dǎo)表達(dá)后誘導(dǎo)表達(dá)后大鼠腦脊液中

腦啡肽含量明顯增加注：與SNI組和S誘導(dǎo)hPPE基因表達(dá)后鎮(zhèn)痛效果評價注：SNI/hPPE/Dox(+)組和SNI/hPPE/Dox(-)組相比，*P<0.05誘導(dǎo)表達(dá)后結(jié)果提示具有良好的可控性鎮(zhèn)痛效果誘導(dǎo)hPPE基因表達(dá)后鎮(zhèn)痛效果評價注：SNI/hPPE/D病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛結(jié)果提示蛛網(wǎng)膜下腔注射病毒后，具有良好的可控性鎮(zhèn)痛效果病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛結(jié)果提示蛛網(wǎng)膜下腔注射病毒后，具有良優(yōu)點(diǎn)

操作簡單，容易實(shí)現(xiàn)外源基因表達(dá)效率高缺點(diǎn)

慢病毒應(yīng)用于基因治療，暫無長期臨床觀察，因此有病毒的生物安全性擔(dān)憂病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛優(yōu)點(diǎn)病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛成果發(fā)表文章

1.

XuebiT,GongmingW,YukeT,etal.AnimprovedTet-onsystemforexpressioninneuronsdeliveredbyasinglelentiviralvector.HumGeneTher.2009,20:113–123.2.

XuY，TianXB，TianYK,etal.Lumbartransplantationofimmortalizedenkephalin-expressingastrocytesattenuateschronicneuropathicpain.EurJPain.2008,12(4):525-33.3.

AnK,TianYK,etal.ImmortalizedRatAstrocyteStrainGeneticallyModifiedbyRatPreprogalaninGene.JournalofHuazhongofUniversityScienceandTechnology[MedSci],2005,25(2):144-146.４.安珂,田玉科,楊輝,高峰,王鵬.猿腎病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞株的構(gòu)建.中華麻醉學(xué)雜志,2004,24(11):838-841.５.楊輝,田玉科,王鵬,安珂,高峰,吳小兵,梅偉.重組人前腦啡肽原基因腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建.中華麻醉學(xué)雜志,2005,25(1):34-36.６.

高峰,田玉科,楊輝,安珂,張傳漢.猿腎病毒40大T抗原基因永生化大鼠神經(jīng)前體細(xì)胞株的構(gòu)建.中華麻醉學(xué)雜志,2005,25(8):597-600.

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成果發(fā)表文章疫苗鎮(zhèn)痛疫苗鎮(zhèn)痛疫苗原理體液免疫抗原識別

B細(xì)胞活化、增殖與分化合成分泌抗體并發(fā)揮效應(yīng)抗原抗體疫苗原理體液免疫抗原抗體疫苗的應(yīng)用傳染病1.During等構(gòu)建的疫苗AAV/NR1，產(chǎn)生NR1抗體，可用于腦缺血和癲癇的治療

2.Schenk等研究發(fā)現(xiàn)，Aβ42多肽疫苗可誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，治療AD疫苗應(yīng)用于慢性癌痛？神經(jīng)系統(tǒng)疾?。耗X缺血、癲癇、阿爾茨海默?。ˋlzheimerdisease,AD）

疫苗的應(yīng)用傳染病1.During等構(gòu)建的疫苗AAV/NR1鎮(zhèn)痛疫苗疼痛NR2BNR2B拮抗劑NR2BsiRNA以NR2B為靶點(diǎn)，將NR2B作為抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生NR2B抗體，拮抗NR2B或下調(diào)其表達(dá)，用于癌痛治療NMDA受體2B亞基NR2B疫苗鎮(zhèn)痛疫苗疼痛NR2BNR2B拮抗劑N構(gòu)建NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B重組腺病毒recombinantadenovirus5-mediatedNR2B(rAd5/NR2B)質(zhì)粒pDC515/NR2B轉(zhuǎn)染293細(xì)胞鎮(zhèn)痛疫苗rAd5/NR2B構(gòu)建NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B重組腺病毒recombNR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B特異性抗體鎮(zhèn)痛疫苗rAd5/NR2BNR2B多肽NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B特異性抗體鎮(zhèn)痛疫苗rAd5/N大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度“”加強(qiáng)免疫的時間大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度“”加強(qiáng)免疫的時間12NR2B?180kDaβ-actin?

42kDa3與空白對照組和病毒空載體組比較，*P＜0.05大鼠免疫后脊髓NR2B表達(dá)下調(diào)1：空白對照組2：病毒空載體對照組3：病毒疫苗免疫組12NR2B?180kDaβ-actin?42kDa大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價與術(shù)前比較，＃P<0.05；與空白對照組和病毒空載體組相比，*

P<0.05鎮(zhèn)痛疫苗可發(fā)揮超前鎮(zhèn)痛作用結(jié)果提示免疫后大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價與術(shù)前比較，＃P<0.05；與空白對照表位疫苗表位疫苗表位：抗原表位（epitope）

抗原被抗體識別的特異性位點(diǎn)抗體多肽抗原抗體表位抗原抗體表位疫苗表位疫苗抗體多肽抗原抗體表位抗原抗體表位疫苗NR2B多肽NR2B表位基因NR2B表位疫苗rAd5/eNR2B鎮(zhèn)痛作用篩選NR2B表位表位疫苗NR2B多肽NR2B表位基因NR2B表位疫苗r大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度大鼠免疫后脊髓NR2B表達(dá)下調(diào)NB2BΒ-actin1：空白對照組2：表位疫苗免疫組3：載體對照組與空白對照組和載體對照組比較，*P＜0.05大鼠免疫后脊髓NR2B表達(dá)下調(diào)NB2BΒ-actin1：空白大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價NR2B表位疫苗能夠更加有效地誘發(fā)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生良好的鎮(zhèn)痛效果結(jié)果提示與術(shù)前比較，＃P<0.05；與空白對照組和病毒空載體組相比，*

P<0.05“”免疫時間免疫后大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價NR2B表位疫苗能夠更加有效地誘發(fā)免疫表位疫苗優(yōu)點(diǎn)提高免疫效應(yīng)特異性強(qiáng)缺點(diǎn)過程復(fù)雜表位篩選困難表位疫苗優(yōu)點(diǎn)提高免疫效應(yīng)缺點(diǎn)過程復(fù)NR2B作用廣泛疼痛認(rèn)知功能運(yùn)動功能神經(jīng)元凋亡突觸可塑性NR2BNR2B作用廣泛疼痛認(rèn)知功能運(yùn)動功能神經(jīng)元凋亡突觸可塑性NR疫苗的安全性評價檢測大鼠海馬及脊髓神經(jīng)元的凋亡Morris水迷宮檢測大鼠的認(rèn)知功能認(rèn)知檢測海馬長時程增強(qiáng)(LTP)現(xiàn)象突觸以大鼠游泳速度評價其運(yùn)動功能凋亡疫苗結(jié)果提示鎮(zhèn)痛疫苗不會引起大鼠脊髓及海馬神經(jīng)元的凋亡增加，也不會損害大鼠的認(rèn)知功能和運(yùn)動功能，但是會削弱海馬CA1區(qū)LTP的產(chǎn)生與維持運(yùn)動鎮(zhèn)痛疫苗的安全性有待更進(jìn)一步研究！疫苗的安全性評價檢測大鼠海馬及脊髓神經(jīng)元的凋亡Morris水

rAd5/NR2B鎮(zhèn)痛疫苗現(xiàn)已申請發(fā)明專利

（專利申請?zhí)?00710168964.7）發(fā)表文章：

1.WangGM,TianYK,etal.GeneTher,2007,14(24):1681-7.2.WangGM,TianYK,etal.ChinMedJ(Engl),2007,120(8):643-7.3.王公明,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2007,27(8):699-702.4.陳建平,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2006,26(10):948-951.5.陳建平,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2007,27(12):1100-1103.6.王公明,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2008,28,9:783-786.

……成果rAd5/NR2B鎮(zhèn)痛疫苗現(xiàn)已申請發(fā)明專利靶向細(xì)胞毀損鎮(zhèn)痛靶向細(xì)胞毀損鎮(zhèn)痛分子靶向治療分子靶向治療受體靶向技術(shù)有的放矢一種以細(xì)胞受體、關(guān)鍵基因和調(diào)控分子為靶點(diǎn)的新型治療分子靶向治療分子靶向治療受體靶向技術(shù)有的放矢一種以細(xì)胞受體、下行易化系統(tǒng)延髓頭端腹內(nèi)側(cè)核（RVM）

腦干下行抑制/易化系統(tǒng)下行易化系統(tǒng)

μ阿片受體陽性易化神經(jīng)元μ受體神經(jīng)元下行易化系統(tǒng)延髓頭端腹內(nèi)側(cè)核（RVM）μ受體神經(jīng)元靶點(diǎn)μ阿片受體μ阿片受體陽性易化神經(jīng)元細(xì)胞膜表面特異性表達(dá)μ阿片受體以μ阿片受體為靶點(diǎn)，特異性損毀易化神經(jīng)元可阻斷疼痛的下行易化系統(tǒng)，達(dá)到鎮(zhèn)痛的目的μ阿片受體靶點(diǎn)μ阿片受體μ阿片受體受體靶向技術(shù)自殺基因配體偶聯(lián)物(免疫偶聯(lián)物)實(shí)現(xiàn)治療的靶向性配體受體靶向技術(shù)自殺配體偶聯(lián)物(免疫偶聯(lián)物)實(shí)現(xiàn)治療的靶向性配內(nèi)嗎啡肽-caspase3耦聯(lián)體耦聯(lián)體結(jié)合μ阿片受體內(nèi)吞吞噬體形成耦聯(lián)體裂解凋亡內(nèi)嗎啡肽Caspase-3內(nèi)嗎啡肽-caspase3耦聯(lián)體耦聯(lián)體結(jié)合μ阿片受體內(nèi)吞吞噬靶向毀損鎮(zhèn)痛RVM區(qū)注射μ受體陽性神經(jīng)元特異性表達(dá)caspase3μ受體陽性神經(jīng)元凋亡鎮(zhèn)痛作用內(nèi)嗎啡肽Caspase-3結(jié)果提示ＲＶＭ區(qū)注射后具有良好的鎮(zhèn)痛效果靶向毀損鎮(zhèn)痛RVM區(qū)注射μ受體陽性神經(jīng)元特異性表達(dá)caspa受體靶向毀損鎮(zhèn)痛優(yōu)點(diǎn)靶向性強(qiáng)鎮(zhèn)痛效果確切（安全性有待進(jìn)一步研究）

缺點(diǎn)

工藝復(fù)雜，成本高轉(zhuǎn)染率低受體靶向毀損鎮(zhèn)痛優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)成果發(fā)表文章1.CaoF，TianYK,etal.Regulationofspinalneuroimmuneresponsesbyprolongedsystemicmorphinetreatmentinaratmodelofcancerinducedbonepain.BrainRes.（Revision）2.肖興鵬,田玉科,等.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2008,29(24).3.曹菲,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2008,28(6).4.曹菲,田玉科,等.中國組織工程研究與臨床康復(fù),2007,50(11).5.許愛軍,田玉科,等.中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志,2008,14(3).......成果發(fā)表文章展望有待解決的問題安全性其他生物學(xué)功能臨床未來疼痛治療的新策略

——希望與困難并存展望有待解決的問題致謝國家自然科學(xué)基金委員會１.去永生化轉(zhuǎn)腦啡肽基因神經(jīng)細(xì)胞的構(gòu)建及其鎮(zhèn)痛效應(yīng)研究（項(xiàng)目編號：30170905），2002.1～2004.12２.N-甲基-D-天門冬氨酸受體2B亞基表位疫苗的構(gòu)建及其鎮(zhèn)痛效應(yīng)的研究（項(xiàng)目編號：30471660），2005.1～2007.12３.受體靶向毀損癌痛大鼠腦干下行易化系統(tǒng)鎮(zhèn)痛效應(yīng)的研究（項(xiàng)目編號：30672027），2007.1～2009.12４.NG2細(xì)胞在大鼠神經(jīng)病理性痛中的作用及其機(jī)制研究（項(xiàng)目編號：30872441）2009.01~2011.12致謝國家自然科學(xué)基金委員會１.去永生化轉(zhuǎn)腦啡肽基因神經(jīng)細(xì)未來疼痛治療的新策略課件Thanks!Thanks!分子鎮(zhèn)痛

－未來疼痛治療的新策略

分子鎮(zhèn)痛慢性疼痛神經(jīng)病理性疼痛癌痛炎癥痛等

由實(shí)際的或潛在的組織損傷引起的一種不愉快的感覺和情感經(jīng)歷（IASP定義）

由于各種原因(如骨質(zhì)增生,慢性軟組織傷以及惡性腫瘤等)所致的長期(數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年)不愈的疼痛疼痛慢性疼痛慢性疼痛神經(jīng)病理性疼痛由實(shí)際的或潛在的組織損傷引起的一種不愉疼痛傳導(dǎo)通路疼痛傳導(dǎo)通路藥物治療：阿片類藥物、NSAIDs、抗精神病藥物等物理治療：光療、水療、冷熱療、針刺等手術(shù)治療：選擇性的神經(jīng)阻滯、神經(jīng)損毀術(shù)等慢性疼痛治療策略分子鎮(zhèn)痛——新策略藥物治療：阿片類藥物、NSAIDs、抗精神慢性疼痛治療策略轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛疫苗鎮(zhèn)痛靶向毀損鎮(zhèn)痛近幾年我們的研究轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛近幾年我們的研究

轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛

鞘內(nèi)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植（腦啡肽原基因）鎮(zhèn)痛分子（腦啡肽）外源基因修飾細(xì)胞株轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛鞘內(nèi)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植（腦啡肽原基因）鎮(zhèn)痛分子（腦啡肽）外源基因轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛我們的研究經(jīng)歷的三階段細(xì)胞移植轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植病毒轉(zhuǎn)基因治療轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛我們的研究經(jīng)歷的三階段細(xì)胞移植轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移嗜鉻細(xì)胞

免疫反應(yīng)生存期短來源困難細(xì)胞移植嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)

免疫隔離——減少免疫抑制劑的應(yīng)用，保護(hù)植入細(xì)胞免遭受機(jī)體排斥缺點(diǎn)

1.微囊制作復(fù)雜，成功率不高

2.微囊內(nèi)死亡的細(xì)胞會污染正常產(chǎn)物

3.囊膜破裂

4.微囊纖維包裹，影響了微囊對外環(huán)境的敏感性和鎮(zhèn)痛物質(zhì)的釋放

微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)微囊化嗜鉻細(xì)胞細(xì)胞移植轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)

可取自自體或同種異體，組織相容性好非腫瘤細(xì)胞，無致瘤性存在的問題

細(xì)胞生存時間基因表達(dá)的可控性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植優(yōu)點(diǎn)解決細(xì)胞來源問題

—永生化細(xì)胞永生化

利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源性的永生化基因轉(zhuǎn)入到靶細(xì)胞并穩(wěn)定整合到靶細(xì)胞基因組中，獲得穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，從增殖危機(jī)中逃逸，從而獲得無限增殖能力解決細(xì)胞來源問題

—永生化細(xì)胞永生我們構(gòu)建的永生化細(xì)胞永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞永生化神經(jīng)前體細(xì)胞我們構(gòu)建的永生化細(xì)胞永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞永生化神經(jīng)前體細(xì)胞基因修飾永生化細(xì)胞鎮(zhèn)痛人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，大鼠蛛網(wǎng)膜下腔移植后，具有良好的鎮(zhèn)痛效果腺相關(guān)病毒攜帶人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)前體細(xì)胞，蛛網(wǎng)膜下腔移植后，具有良好的鎮(zhèn)痛效果基因修飾永生化細(xì)胞鎮(zhèn)痛人前腦啡肽原基因修飾永生化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞基因表達(dá)的可控性非可控性表達(dá)模式可控性表達(dá)模式基因表達(dá)的可控性非可控性表達(dá)模式可控性表達(dá)模式Tet-on誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)

解決基因表達(dá)可控性問題

—tet-on表達(dá)系統(tǒng)目的基因TRErtTACMVTet-on誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)解決基因表達(dá)可控性問題

可控性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛可控性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛+Dox-Dox+Dox永生化膠質(zhì)細(xì)胞中強(qiáng)力霉素調(diào)節(jié)腦啡肽分泌+Dox-Dox+Dox永生化膠質(zhì)細(xì)胞中強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)表達(dá)后大鼠腦脊液中

腦啡肽含量明顯增加注：與SNI組和SNI/Control組相比*P<0.05

與SNI/hPPE/Dox(-)組相比，#P<0.05誘導(dǎo)表達(dá)后誘導(dǎo)表達(dá)后大鼠腦脊液中

腦啡肽含量明顯增加注：與SNI組和S誘導(dǎo)hPPE基因表達(dá)后鎮(zhèn)痛效果評價注：SNI/hPPE/Dox(+)組和SNI/hPPE/Dox(-)組相比，*P<0.05誘導(dǎo)表達(dá)后結(jié)果提示具有良好的可控性鎮(zhèn)痛效果誘導(dǎo)hPPE基因表達(dá)后鎮(zhèn)痛效果評價注：SNI/hPPE/D病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛結(jié)果提示蛛網(wǎng)膜下腔注射病毒后，具有良好的可控性鎮(zhèn)痛效果病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛結(jié)果提示蛛網(wǎng)膜下腔注射病毒后，具有良優(yōu)點(diǎn)

操作簡單，容易實(shí)現(xiàn)外源基因表達(dá)效率高缺點(diǎn)

慢病毒應(yīng)用于基因治療，暫無長期臨床觀察，因此有病毒的生物安全性擔(dān)憂病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛優(yōu)點(diǎn)病毒轉(zhuǎn)基因鎮(zhèn)痛成果發(fā)表文章

1.

XuebiT,GongmingW,YukeT,etal.AnimprovedTet-onsystemforexpressioninneuronsdeliveredbyasinglelentiviralvector.HumGeneTher.2009,20:113–123.2.

XuY，TianXB，TianYK,etal.Lumbartransplantationofimmortalizedenkephalin-expressingastrocytesattenuateschronicneuropathicpain.EurJPain.2008,12(4):525-33.3.

AnK,TianYK,etal.ImmortalizedRatAstrocyteStrainGeneticallyModifiedbyRatPreprogalaninGene.JournalofHuazhongofUniversityScienceandTechnology[MedSci],2005,25(2):144-146.４.安珂,田玉科,楊輝,高峰,王鵬.猿腎病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞株的構(gòu)建.中華麻醉學(xué)雜志,2004,24(11):838-841.５.楊輝,田玉科,王鵬,安珂,高峰,吳小兵,梅偉.重組人前腦啡肽原基因腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建.中華麻醉學(xué)雜志,2005,25(1):34-36.６.

高峰,田玉科,楊輝,安珂,張傳漢.猿腎病毒40大T抗原基因永生化大鼠神經(jīng)前體細(xì)胞株的構(gòu)建.中華麻醉學(xué)雜志,2005,25(8):597-600.

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成果發(fā)表文章疫苗鎮(zhèn)痛疫苗鎮(zhèn)痛疫苗原理體液免疫抗原識別

B細(xì)胞活化、增殖與分化合成分泌抗體并發(fā)揮效應(yīng)抗原抗體疫苗原理體液免疫抗原抗體疫苗的應(yīng)用傳染病1.During等構(gòu)建的疫苗AAV/NR1，產(chǎn)生NR1抗體，可用于腦缺血和癲癇的治療

2.Schenk等研究發(fā)現(xiàn)，Aβ42多肽疫苗可誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，治療AD疫苗應(yīng)用于慢性癌痛？神經(jīng)系統(tǒng)疾病：腦缺血、癲癇、阿爾茨海默?。ˋlzheimerdisease,AD）

疫苗的應(yīng)用傳染病1.During等構(gòu)建的疫苗AAV/NR1鎮(zhèn)痛疫苗疼痛NR2BNR2B拮抗劑NR2BsiRNA以NR2B為靶點(diǎn)，將NR2B作為抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生NR2B抗體，拮抗NR2B或下調(diào)其表達(dá)，用于癌痛治療NMDA受體2B亞基NR2B疫苗鎮(zhèn)痛疫苗疼痛NR2BNR2B拮抗劑N構(gòu)建NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B重組腺病毒recombinantadenovirus5-mediatedNR2B(rAd5/NR2B)質(zhì)粒pDC515/NR2B轉(zhuǎn)染293細(xì)胞鎮(zhèn)痛疫苗rAd5/NR2B構(gòu)建NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B重組腺病毒recombNR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B特異性抗體鎮(zhèn)痛疫苗rAd5/NR2BNR2B多肽NR2B全基因鎮(zhèn)痛疫苗NR2B特異性抗體鎮(zhèn)痛疫苗rAd5/N大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度“”加強(qiáng)免疫的時間大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度“”加強(qiáng)免疫的時間12NR2B?180kDaβ-actin?

42kDa3與空白對照組和病毒空載體組比較，*P＜0.05大鼠免疫后脊髓NR2B表達(dá)下調(diào)1：空白對照組2：病毒空載體對照組3：病毒疫苗免疫組12NR2B?180kDaβ-actin?42kDa大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價與術(shù)前比較，＃P<0.05；與空白對照組和病毒空載體組相比，*

P<0.05鎮(zhèn)痛疫苗可發(fā)揮超前鎮(zhèn)痛作用結(jié)果提示免疫后大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價與術(shù)前比較，＃P<0.05；與空白對照表位疫苗表位疫苗表位：抗原表位（epitope）

抗原被抗體識別的特異性位點(diǎn)抗體多肽抗原抗體表位抗原抗體表位疫苗表位疫苗抗體多肽抗原抗體表位抗原抗體表位疫苗NR2B多肽NR2B表位基因NR2B表位疫苗rAd5/eNR2B鎮(zhèn)痛作用篩選NR2B表位表位疫苗NR2B多肽NR2B表位基因NR2B表位疫苗r大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度大鼠免疫后產(chǎn)生NR2B抗體的滴度大鼠免疫后脊髓NR2B表達(dá)下調(diào)NB2BΒ-actin1：空白對照組2：表位疫苗免疫組3：載體對照組與空白對照組和載體對照組比較，*P＜0.05大鼠免疫后脊髓NR2B表達(dá)下調(diào)NB2BΒ-actin1：空白大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價NR2B表位疫苗能夠更加有效地誘發(fā)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生良好的鎮(zhèn)痛效果結(jié)果提示與術(shù)前比較，＃P<0.05；與空白對照組和病毒空載體組相比，*

P<0.05“”免疫時間免疫后大鼠免疫后鎮(zhèn)痛效果評價NR2B表位疫苗能夠更加有效地誘發(fā)免疫表位疫苗優(yōu)點(diǎn)提高免疫效應(yīng)特異性強(qiáng)缺點(diǎn)過程復(fù)雜表位篩選困難表位疫苗優(yōu)點(diǎn)提高免疫效應(yīng)缺點(diǎn)過程復(fù)NR2B作用廣泛疼痛認(rèn)知功能運(yùn)動功能神經(jīng)元凋亡突觸可塑性NR2BNR2B作用廣泛疼痛認(rèn)知功能運(yùn)動功能神經(jīng)元凋亡突觸可塑性NR疫苗的安全性評價檢測大鼠海馬及脊髓神經(jīng)元的凋亡Morris水迷宮檢測大鼠的認(rèn)知功能認(rèn)知檢測海馬長時程增強(qiáng)(LTP)現(xiàn)象突觸以大鼠游泳速度評價其運(yùn)動功能凋亡疫苗結(jié)果提示鎮(zhèn)痛疫苗不會引起大鼠脊髓及海馬神經(jīng)元的凋亡增加，也不會損害大鼠的認(rèn)知功能和運(yùn)動功能，但是會削弱海馬CA1區(qū)LTP的產(chǎn)生與維持運(yùn)動鎮(zhèn)痛疫苗的安全性有待更進(jìn)一步研究！疫苗的安全性評價檢測大鼠海馬及脊髓神經(jīng)元的凋亡Morris水

rAd5/NR2B鎮(zhèn)痛疫苗現(xiàn)已申請發(fā)明專利

（專利申請?zhí)?00710168964.7）發(fā)表文章：

1.WangGM,TianYK,etal.GeneTher,2007,14(24):1681-7.2.WangGM,TianYK,etal.ChinMedJ(Engl),2007,120(8):643-7.3.王公明,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2007,27(8):699-702.4.陳建平,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2006,26(10):948-951.5.陳建平,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2007,27(12):1100-1103.6.王公明,田玉科,等.中華麻醉學(xué)雜志,2008,28,9:783-786.

……成果rAd5/NR2B鎮(zhèn)痛疫苗現(xiàn)已申請發(fā)明專利靶向細(xì)胞毀損鎮(zhèn)痛靶向細(xì)胞毀損鎮(zhèn)痛分子靶向治療分子靶向治療受體靶向技術(shù)有的放矢一種以細(xì)胞受體、關(guān)鍵基因和調(diào)控分子為靶點(diǎn)的新型治療分子靶向治療分子靶向治療受體靶向技術(shù)有的放矢一種以細(xì)胞受體、下行易化系統(tǒng)延髓頭端腹內(nèi)側(cè)核（RVM）

腦干下行抑制/易化系統(tǒng)