實(shí)驗(yàn)1

大腸桿菌的培養(yǎng)和分離進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增，利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作。進(jìn)行大腸桿菌的分離，用固體培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的劃線培養(yǎng)。說(shuō)明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求。學(xué)習(xí)目標(biāo)0119世紀(jì)中期，法國(guó)的釀造業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程中，出現(xiàn)了葡萄酒變酸、變味的怪事。經(jīng)過(guò)一番研究，法國(guó)科學(xué)家巴斯德發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致生產(chǎn)失敗的根源在于發(fā)酵物中混入了雜菌。

新課導(dǎo)入02微生物是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、形體微小，若想得到純凈的微生物，就必須對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)和分離。今天我們就以大腸桿菌為例學(xué)習(xí)微生物的培養(yǎng)與分離。（一）基礎(chǔ)知識(shí)（二）實(shí)驗(yàn)流程新知探究03微生物1培養(yǎng)基2無(wú)菌操作3（一）基礎(chǔ)知識(shí)微生物11、概念：指結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物。2、微生物的類群病毒

細(xì)菌

藍(lán)細(xì)菌

放線菌

酵母

霉菌

原生動(dòng)物病毒原核生物真菌原生動(dòng)物培養(yǎng)基21、類型：按物理性質(zhì)分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基凝固劑瓊脂擴(kuò)大培養(yǎng)，工業(yè)生產(chǎn)分離純化，鑒定菌種，計(jì)數(shù)，保藏2、成分及其作用：成分作用主要來(lái)源碳源主要作能源物質(zhì)無(wú)機(jī)碳(CO2)或有機(jī)碳(糖類)氮源合成含N類化合物N2，NH3，銨，硝酸鹽尿素，牛肉膏，蛋白胨無(wú)機(jī)鹽調(diào)節(jié)滲透壓等硝酸銨，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鈉，氯化鈉等水提供生存環(huán)境水生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)促生長(zhǎng)維生素，AA，堿基等無(wú)菌操作31、概念：

無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。2、無(wú)菌操作包括：（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。（1）消毒：用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程；不能殺死芽孢和孢子。3、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別（2）滅菌：以化學(xué)或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌的過(guò)程。4、常用的消毒與滅菌的方法：（1）常用消毒法：A、煮沸消毒法：100℃煮沸5-6minB、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（牛奶）C、化學(xué)藥劑消毒法：用70%酒精進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源D、紫外線消毒：（空氣）a.灼燒滅菌（2）常用滅菌法：b.干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。c.高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。思考2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。配制培養(yǎng)基包器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種、劃線培養(yǎng)觀察記錄（二）實(shí)驗(yàn)流程配制培養(yǎng)基包器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種、劃線培養(yǎng)觀察記錄（二）實(shí)驗(yàn)流程配制培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基的配制流程圖配制培養(yǎng)基包器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種、劃線培養(yǎng)觀察記錄（二）實(shí)驗(yàn)流程包器材包器材配制培養(yǎng)基包器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種、劃線培養(yǎng)觀察記錄（二）實(shí)驗(yàn)流程高壓鍋滅菌滅菌條件：121℃（1kg/c㎡）15min滅菌配制培養(yǎng)基包器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種、劃線培養(yǎng)觀察記錄（二）實(shí)驗(yàn)流程搖床震蕩培養(yǎng)12h（于LB液體培養(yǎng)基中）菌種擴(kuò)增配制培養(yǎng)基包器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種、劃線培養(yǎng)觀察記錄（二）實(shí)驗(yàn)流程倒平板滅菌后的培養(yǎng)基在無(wú)菌操作臺(tái)上倒入4個(gè)培養(yǎng)皿中，倒后立即置于水平位置上，輕輕晃動(dòng)，使培養(yǎng)基鋪滿平皿底部，待凝，使之形成平面。配制培養(yǎng)基包器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種、劃線培養(yǎng)觀察記錄（二）實(shí)驗(yàn)流程接種將斜面上培養(yǎng)的大腸桿菌菌種接種到滅菌后的液體培養(yǎng)基中，使其在37℃搖床培養(yǎng)12小時(shí)。注意事項(xiàng):1.火焰旁從斜面上用接種環(huán)取菌；2.取菌前接種環(huán)要用酒精燈灼燒滅菌，冷卻后方能取菌；3.取菌后封口膜和棉塞復(fù)原。燒至暗紅接種劃線

1）灼燒接種環(huán)；

2）接種環(huán)冷卻后，蘸取帶菌培養(yǎng)物；

3）在近火焰處，讓帶菌接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上劃線。①④③②分離后，一個(gè)菌體便會(huì)形成一個(gè)菌落，這是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。編號(hào)成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答下列問(wèn)題：隨堂練習(xí)041）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。2）若不慎將過(guò)量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入

。自養(yǎng)型微生物含碳有機(jī)物3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。4）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有

類。固氮微生物35）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是

。